Загрузка...
Учебная работа. Грибковые заболевания кожи
Федеральное агентство по здравоохранению и соц развитию
Санкт-Петербургская муниципальная мед
академия им. И.И. Мечникова
«УТВЕРЖДАЮ»
Зам. председателя Учебно-методического
объединения по мед и фарма-
цевтическому образованию вузов Рф
_______________ Денисов И.Н.
протокол УМО-769 от 30.11.04.
ГРИБКОВЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ кожи
Учебное пособие
под редакцией доктора С.И. Данилова
Санкт-Петербург 2005
УДК 616.511: 616-002.828 (-052.63) (06)
Грибковые работоспособности»> работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) кожи. Учебное пособие под ред. проф. СИ. Данилова СПбГМА им. И.И. Мечникова — СПб: 2005. С. 124
В учебном пособии изложен материал по эпидемиологии, этиологии и клиническому течению грибковых болезней кожи. Особенное внимание уделено характеристике грибов, источникам инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) и патогенезу развития дерматофитий. В пособии рассмотрены вопросцы лабораторной диагностики и современных способов исцеления.
Пособие создано для студентов мед вузов.
Учебное пособие составили сотрудники кафедры дерматовенерологии СПбГМА им. И.И. Мечникова: проф. Данилов С.И.; доценты — Пирятинская В.А., Грибанова Т.В., Смирнова О.Н., Клю-чарева С.В.; Помощники — Лалаева А.М., Карякина Л.А., Тернов-ская О.А., Гусева С.Н., Пирятинская А.Б., Петунова Я.Г., Смирнова И.О., Нечаева О.С., Белова Е.А.; доцент кафедры микробиологии Васильев О.Д.
Рецензенты:
Соколовский Е.В., доктор мед наук, доктор, заведующий кафедрой дерматовенерологии с клиникой Санкт-Петербургского муниципального мед Института им. И.П. Павлова.
Барбинов В.В., доктор мед наук, доктор, заместитель начальника кафедры дерматологических и венерических заболеваний Военно-медицинской академии.
Рекомендовано в качестве учебного пособия Ученым Советом СПбГМА им. И.И. Мечникова
© СПбГМА им. И.И. Мечникова, 2005 г
© Кафедра дерматовенерологии, 2005 г
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность задачи
Дерматомикозы (грибковые работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности)) составляют огромную группу болезней дерматологического покрова и слизистых оболочек, вызываемых внедрением и жизнедеятельностью растительных микробов — грибов.
Дерматомикозы представляют большенный энтузиазм в силу контраста не только лишь возбудителей и вызываемой ими медицинской картины, но, основным образом, собственной склонностью к распространению, обусловленной высочайшей контагиозностью возбудителей. Грибы принадлежат к классу низших растений, лишенных хлорофилла и не способных ассимилировать углекислоту. Они обширно всераспространены в природе, что разъясняется критериями существования их в качестве паразитов, условно-патогенных грибов и сапрофитов. Грибы отнесены к отдельному королевству Fungi, либо Myceta (грибы), одному из 5 царств эукарион. К королевству Fungi относят 4 отдела:
1) Chitridiomyceta, насчитывающий 800 видов, которые не вызывают микозы;
2) Zygomyceta имеют около 1000 видов, которые вызывают му-короз и эндомофтороз;
3) Отдел Ascomymyceta включает 32 тыщи видов, имеющих половую (репродуктивную) стадию актуального цикла и около 14 тыщ вегетативную (внеполовую) стадию. Гифы аскомицетов имеют двухслойную клеточную оболочку, перегородки, половая стадия представлена аском (мешок либо сумка), заполненным спорами. Аскомицеты являются возбудителями большинства микозов;
4) отдел Basidomyceta (базидомицеты) насчитывают около 15 тыщ видов. Имеют половую стадию размножения (споры) и вегетативную. Базидомицеты являются возбудителями криптококкоза, разноцветного лишая и остальных Malassezia-инфекций, белоснежной пьедры и трихоспонороза.
Под именованием дерматомицетов либо дерматофитов (от греческих слов derma — кожа, mykes — гриб, phyton — растение) особенное пространство занимают патогенные грибы, принадлежащие к низшим грибам — гифомицетам — нитчатым грибам, характеризующимся ните и спорообразованием; значимая часть дерматомицетов относится к классу Ascomycetes. Общей соответствующей чертой для дерматомицетов является паразитирование их в коже либо ее придатках — волосах, ногтях. Источником инфецирования грибковыми болезнями служат нездоровой человек, также нездоровые звериные. Инфецирование происходит как методом конкретного контакта с нездоровыми, так и через предметы, находившиеся в соприкосновении с ними и зараженные грибами.
Попадая в организм человека либо звериного с волосами и чешуйками во внешнюю среду, грибы могут проявлять свою жизнедеятельность и вирулентность в течение долгого времени, продолжающегося годами.
Попадание гриба на поверхность дерматологического покрова приводит к внедрению его в роговой слой. Крайнее облегчается при наличии мацерации и микротравмы, также тем обстоятельством, что роговой слой представляет собой не только лишь подходящую питательную среду, да и лучшую среду для паразитических грибов. Некие виды грибов ограничивают свое местонахождение в коже только роговым слоем. Остальные же грибы, как к примеру, микроспорум и трихофиты, поражают также и придатки кожи — волосяные фолликулы, волосы и ногти.
По месту локализации внедрившихся грибов и по степени воспалительной реакции различают поверхностные и глубочайшие (подкожные) дерматомикозы.
Патогенное действие грибов не ограничивается только дерматологическим покровом с его придатками. Черногубовым Н.А. и Пелевиной И.О. описаны случаи всепригодного поражения кожи и желудочно-кишечного тракта грибковой этиологии. Подавляющее большая часть грибковых болезней владеют высочайшей степенью заразительности. В эпидемиологическом отношении особенное малышей, делают делему борьбы с дерматомикозами в особенности животрепещущей.
Возросло (термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). В особенности значительна роль микозов в трансплантологии, онкоге-матологии, неонатологии. к примеру, Candida spp. Теснят внугрибольничных возбудителей-бактерий. Группа микозов крепко занимает пространство в структуре ВИЧ (вирус иммунодефицита человека, вызывающий ВИЧ-инфекцию — заболевание, последняя стадия которой известна как синдром приобретённого иммунодефицита СПИД)-ассоциированной патологии. Растущая значимость микозов принуждает улучшать методики их диагностики, исцеления, зависимо от возбудителей и форм инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека).
1. Короткие исторические сведения о грибковых заболеваниях
Грибковые истории наших познаний о грибковых заболеваниях.
1-ый период, так именуемый описательный, начинается с глубочайшей древности (Гиппократ, Цельс) до середины XIX века. Начало исследования микозов в медицине относится к древней эре. Молочница была описана Гиппократом и Галеном, фавус (парша) и инфильтративно-нагноительная трихофития — Цельсом, а современное заглавие дерматофитий (tinea) возникло в старом Риме, когда были открыты 1-ые возбудители грибковых болезней. В 1842 г. был описан возбудитель поверхностной трихофитии и микроспории. В 1846 г. — возбудитель разноцветного лишая.
2-ой период в истории грибковых болезней простирается с половины до конца XIX века, чему содействовало изобретение микроскопа, развитие ботаники, а потом микологии. В этот период были открыты новейшие виды грибов: в 1839г. — гриб возбудитель фавуса, в 1842г. — поверхностной трихофитии и микроспории, в 1846 г. — возбудители разноцветного лишая, актиномикозы (1892) и бластомикозы (1894). Изучалась и описывалась вызываемая ими клиническая картина, выполнялись поиски более подходящих для роста грибов питательных сред, чем было положено начало исследования возбудителей гриба всех болезней в культурах (1899 г., Сабуро). На рубеже XIX-XX вв. были описаны практически все главные микозы человека и их возбудителей. Российский ученый Верюжский один из первых на основании бессчетных посевов грибов на питательных средах обосновал, что грибковые работоспособности»>времени. В этот период обращают на себя внимание работы по исследованию токсинов грибов и иммунитета, также серология грибковых болезней, вопросцы их исцеления, исследование которых привело к расширению арсенала целительных средств.
Ведущее пространство в этот период заняла наша российская дерматология, представленная таковыми учеными как Павлов С.Т., Поспелов А.И., Никольский Н.В., Фридман Е.Ф., Богров С.Л., Черногу-бов Н.А., Картамышев А.И., Боголепов А.А., Подвысоцкая О.Н., Аравийский А.Н., Чубарова А.С., Ариевич A.M., Кашкин П.Н. и др.
Морфология грибов
Грибы являются растительными организмами. вместе с водными растениями они относятся к низшим растениям и различаются от крайних тем, что не содержат хлорофилла и не ассимилируют углерода.
Возбудители патогенных грибов (они исследованы под микроскопом) состоят из нитей различной длины и толщины, именуемых гифами. время от времени они переплетаются меж собой наподобие войлока. Сплетение нитей, либо гиф, составляет вегетативное тело гриба и именуется мицелием либо грибницей. Нити мицелия могут делиться поперечными перегородками на отдельные членики (клеточки), как это наблюдается, к примеру, у грибов — возбудителей трихофитии, в этом случае мицелий именуют септированным. В остальных вариантах поперечные перегородки могут отсутствовать -тогда нить мицелия представляется в виде одной разветвляющейся и разросшейся клеточки, напоминающей собой полую трубку.
Нити мицелия имеют оболочку, которая состоит из целлюлозы, фунгина, хитиноподобного и кислотоупорного вещества. В оболочке мицелиальной нити заключена грибная протоплазма, состоящая из органических и неорганических веществ. В протоплазме имеются вакуоли и разные включения: жир, гликоген, пигмент, фиброзные образования, кристаллоиды и смолистые вещества. В протоплазме грибов заключены клеточные ядра в виде малеханьких круглых образований неодинаковой величины, в каких наблюдаются явления митоза и прямого деления методом перешнуровки ядра. Хим состав грибов различается огромным многообразием. Сюда входят органические соединения — углеводы, белки, жиры, растительные кислоты (щавелевая, лимоновая, уксусная, муравьиная и др.), ароматичные соединения, эфирные масла, алкалоиды (муска-рин, эрготин и пр.), глюкозиды, также неорганические соединения — соли натрия, калия, фосфора, железа, серы и др. Не считая того, в регулирующих многофункциональный уровень внутренней жизни организма»>вегетативных (от лат. vegetatio — возбуждение, от лат. vegetativus — растительный, комплекс центральных и периферических клеточных структур, регулирующих функциональный уровень внутренней жизни организма) телах грибов часто находятся пигментные вещества сложного хим состава, придающие колониям грибов фиолетовую, красноватую, золотисто-желтую и другую расцветку. Для биохимической активности грибов свойственна их способность выделять ферменты, расщепляющие белки и жиры, углеводы.
Зависимо от критерий наружной среды, а именно питания, мицелий грибов может иметь различную форму. В одних вариантах в протяжении нитей мицелия образуются перетяжки, что делает их схожими на стволы тростника. У неких грибов окончания мицелия бывают в виде маленьких и толстых ответвлений и напоминают собой подсвечники либо же образуют переплетения, имеющие сходство с рогами северного оленя. Обозначенные формы мицелия обнаруживаются, основным образом, в незапятнанных культурах. Мицелий, обнаруживаемый в патогенном материале, представляется наиболее одинаковым. В лабораторной диагностике кроме обнаружения мицелия необходимыми являются споры, которые, по определению акад. О.Н. Под-высоцкой и проф. П.Н. Кашкина, представляют собой «комочки сгущенной протоплазмы, заключенные в наиболее плотную и резко конту-рированную, время от времени двойную оболочку», т.е. морфологически споры являются образованиями, появившимися в нитях мицелия и отделившимися от их, — это клеточки проигрывания грибов, которые являются в то же время одной из стадий существования грибов и поддержания их био рода.
Размножение патогенных грибов происходит средством спор, которые, будучи наиболее устойчивыми, чем мицелиальные нити, образуются, основным образом, при неблагоприятных критериях для развития жизни грибов. Даже по истечении долгого срока споры, попав в подходящие условия, могут прорастать и создавать новейший мицелий.
Возбудители грибковых болезней; представляют собой организмы, находящиеся в неизменном и тесноватом общении с наружной средой, ассимилируют вещества, нужные для их жизни. К числу крайних сначала относятся углерод, азот, минеральные соли.
Огромное Потребность грибов в углероде. Из углеродов более просто усваиваются грибами глюкоза, мальтоза, левулеза и др. Азот грибы усваивают из пептонов и аминокислот, также из солей аммония. Из неорганических веществ для питания грибов нужны соли калия, железа, марганца, фосфора и др.
Усвоение питательных веществ грибами соединено с их ферментативной Деятельностью. Большая часть патогенных грибов способно производить ферменты, разрушающие тканевые элементы. Из их особенное развития дерматомикозов, растворяя дерматологический жир и облегчая проникновение грибов в кожу. Реакция среды также имеет лучше всего вырастают при слабокислой реакции среды. Но границы кислотности среды, в какой могут расти грибы, колеблются в достаточно широких границах. Актуальный цикл грибов состоит из 2-ух фаз либо стадий: половой (репродуктивной) и бесполой (вегетативной). Половая стадия актуального цикла грибов именуется телеоморфой, бесполая — анамор-фой. Иным вариантом роста является почкование, когда происходит отделение дочерней клеточки от материнской. В репродуктивной фазе тело гриба имеет сложное строение и состоит из дифференцированных клеток, имеющих особые репродуктивные органы. Посреди их выделяют структуры переживания, дозволяющие переносить неблагополучные условия. Грибы плодятся с помощью спор. Споры образуются в итоге обычного митоза и мейоза. В первом случае тип спорообразования и стадия развития гриба именуются бесполыми, а сами бесполые споры — конидиями. Во 2-м случае тип размножения именуется половым, а само имя «споры» почаще применяется конкретно к половым спорам. Для почти всех плесневых грибов типично наличие особенных органов конидиогенеза (бесполого размножения). Отпочковывающиеся дочерние клеточки дрожжевых грибов именуют бластоконидиями.
Устойчивость грибов
Можно считать, что температурные границы роста грибов колеблются меж 15° и 50° выше нуля. Более подходящей температурой для роста грибов является температура 25-30° выше нуля.
По данным A.M. Ариевича, П.Н. Кашкина и др. создателей солнечный свет задерживает рост дерматофитов, так каждодневное в течение 1-го часа освещение грибов солнцем ведет к смерти грибов, как в культурах, так и в патологическом материале.
Резистентность дерматомицетов в отношении хим веществ достаточно высока. Понятно, что опосля 10-минутного действия формалина (2%), двууглекислой соды (10%), карболовой кислоты (2,5 %), при действии в течение нескольких секунд веществом хлорной извести (0,5 %) наблюдается смерть грибов. Настолько же действенное действие оказывает настойка йода (10%), анилиновые краски — фукорцин, метил-виолет, бриллиантовая зелень (1-2 %), салициловая и бензойная кислота (1 %).
В патологическом материале, в особенности в волосах, грибы могут сохранять свою жизнеспособность в течение долгого времени. Академик О.Н. Подвысоцкая показывает, что грибы в волосах сохраняют свои патологические характеристики в течение 1-го года, а в ногтевых пластинках и чешуйках — от 4 недель до полугода. Встречаются отдельные указания на жизнеспособность патогенных грибов в течение 3-8 лет (Иткин, Малышев).
Как демонстрируют исследования, жизнеспособность грибов разъясняется наличием спор, устойчивых к наружным действиям, в то время как мицелии оказывается погибшим. Эта устойчивость спор в патологическом материале является очень принципиальным ‘ эпидемиологическим фактором. Имеющееся деление грибов на сапрофитов и условно-патогенных грибов представляется очень условным. Потому следует выделить принципиальные патогенетические причины, содействующие переходу этих грибов в патогенное либо, можно сказать, паразитарное состояние:
а) гипоавитаминозы,
б) эндокринопатии, в особенности сладкий диабет,
в) дисбактериоз и остальные состояние иммунодефицита, а именно ВИЧ (вирус иммунодефицита человека, вызывающий ВИЧ-инфекцию — заболевание, последняя стадия которой известна как синдром приобретённого иммунодефицита СПИД)— прионами»>зараза.
Способы диагностики грибковых болезней
1. Микроскопичное исследование представляет собой более удачный и всераспространенный способ исследования на грибы. Для получения достоверных результатов исследования на грибы взятие материала рекомендуется создавать до исцеления. Материал для исследования берется с периферических мест, представляющих собою более свежайшие очаги поражения. Чешуйки, волосы и ногти представляют собой наиболее либо наименее плотное непрозрачное роговое вещество и потому должны подвергаться соответственной обработке до микроскопичного исследования. Лишь в итоге обработки патологического материала происходит его расслоение с освобождением грибов, заключенных в ороговевших тканях, и просветление крайних. Как следует, создаются условия, подходящие для обнаружения грибов. Лучшим реактивом для просветления служит 30% раствор едкого калия либо натрия. Чешуйки и ногти должны быть расщеплены на маленькие частички. Волос разрезается на мелкие поперечные сегменты. Микроскопичное исследование патологического материала представляет собой более удачный и всераспространенный способ исследования на грибы. Соответствующей индивидуальностью частей грибов является завышенная светопреломляемость, позволяющая отлично различать их от остальных микроскопичных образований.
Мицелий грибов находится в препарате в виде длинноватых, зигзагообразных, ветвящихся нитей. При всем этом нередко можно созидать деление мицелия на членики (септированный мицелий) различной длины и ширины. Мицелий по форме и строению представляется типичным, что уже при незначимом навыке его не тяжело дифференцировать от остальных образований. Обнаружение в препарате лишь одной нити мицелия дозволяет в почти всех вариантах подтвердить клинический диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) грибкового наличие возбудителя микроспории. Руководствуясь величиной спор, можно также гласить о крупноспоровой и мелкоспоровой трихофитии и микроспории.
Из всего произнесенного следует прийти к выводу, что при исследовании чешуек и частиц ногтей диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) грибкового обнаружения мицелия либо спор грибов. В ответе лаборатории обязано быть обозначено: обнаружены либо не обнаружены грибы.
При микроскопичном исследовании волос весьма принципиально найти отношение гриба к нему. Элементы гриба — мицелий и споры — могут размещаться как на поверхности волоса (тип эктот-рикс), так и снутри его (тип эндотрикс). В первом случае элементы гриба, располагаясь на поверхности волоса, могут просачиваться в наименьшем количестве вовнутрь его. По величине спор различают крупноспоровый и мелкоспоровый эктотрикс. При обнаружении маленьких спор на поверхности волоса, покрывающих его на неком протяжении подобно чехлу, возникает вопросец о отличии мелкоспоровой поверхностной трихофитиии от микроспории. При поверхностной трихофитии споры имеют схожую величину и форму, они размещаются в виде цепей по длине волоса При микроспории споры размещаются без какой-нибудь системы, наподобие мозаики. Мицелий и споры гриба могут размещаться снутри волоса (тип эндотрикс). Нередко микроскопичная картина припоминает мешок с орешками. Роль крайних играют споры, располагающиеся цепями по длине волоса (Trichophyton endothrix). Гриб — возбудитель фавуса — также размещается снутри волоса, но элементы его, в отличие от трихофитии, никогда не заполняют полностью вещества волоса и оставляют часть его неизмененной. Преобладают нити мицелия, спор в волосе находится не много. Не считая того, волосы, пораженные фавусом, содержат пузырьки воздуха
Таковым образом, при микроскопичном исследовании волос выявляется отношение гриба к волосу, размещение гриба вне либо снутри волоса, величина, форма и группировка частей гриба. Наиболее четкий, исчерпающий ответ быть может дан лишь на основании культурального исследования.
2. Культуральное исследование грибов. Культивирование грибов на искусственных питательных средах представляет собою обширно всераспространенный способ исследования грибов. Подавляющее большая часть питательных сред содержит углеводы и пептон, соотношение которых колеблется в достаточно широких размерах в разных средах. Среда Сабуро (сладкий агар). Она состоит из мальтозы (глюкозы) 4,0; пептона 1,0; агар-агара 1,8; дистиллированной воды — 100 смЗ. Среда Сабуро Пользуется широкой известностью и распространением. Она дает неплохой рост грибов, сравнимо просто приготавливается и не просит для собственного изготовления сложных приспособлений. Выкармливание грибов на питательных средах является всераспространенным способом исследования, обеспечивающим правильную диагностику грибковых болезней, определение вида грибов-возбудителей, также выбор действенных способов исцеления и профилактических мероприятий. Лучшая реакция питательной среды для выкармливания большинства дерматофитов — слабокислая, она колеблется в границах рН — 6,0-6,8. Более подходящие температурные условия для роста грибов в термостате колеблются меж 25 и 28 градусами выше нуля.
Наружный вид культур зависимо от вида грибов представляется очень различным. Патогенные грибы зависимо от выделяемого пигмента могут окрашивать колонии в различные цвета. Фиолетовый трихофитон (Trichophyton violaceum) — возбудитель поверхностной трихофитии — получил свое заглавие от соответствующего красновато-фиолетового пигмента, окрашивающего его колонии. Не считая того, поверхность культур носит матовый нрав, пореже она представляется маслянистой и покрыта складками.
Возбудители поверхностных дрожжевых дерматозов (кандидо-зов), грибы рода Candida, дают колонии различной формы и вида, имеют возможности вызывать брожение того либо другого вида сахара.
Дерматофитозы
Микозы кожи, вызванные мицелиальными и дрожжеподобными грибами, именуются дерматомикозы.
Микозы ногтей, вызванные мицелиальными и дрожжеподобными грибами, именуются онихомикозы.
Микозы кожи и её кератин-содержащих придатков, вызванные дерматофитами, именуются дерматофитозы либо дерматофитии
Дерматомикозы и онихомикозы, не считая дерматофитов, могут быть вызваны последующими грибами:
* Дерматомикозы
1. Candida spp.
2. Fusarium moniliforme
3. Trichosporon beigelii
4. Hendersonula toruloidea
* Онихомикозы
1. Scopulariopsis brevicaulis
2. Acremonium sp.
3. Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. glaucus, A. teereus, A. versicolor
4. Fusarium oxysporum
5. Geotrichum candidum
6. Candida albicans
7. Hendersonula toruloidea
8. Cephalosporium sp.
Дерматофитозы (английские синонимы «tinea» либо «ringworm») — это более всераспространенные поверхностные микозы человека и звериных, при которых поражаются кератиновые ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) кожи, волосы и ногти. Они вызываются группой схожих мицелиаль-ных кератинофильных грибов, имеющих общее заглавие «дермато-фиты» и способных применять кератин в качестве источника питания. К данной для нас группе относят около 100 грибов, большая часть из которых является почвенными кератинофильными грибами, но лишь 42 вида признано достоверно существующими и вправду соединены с микозами человека. Из их 11 видов более всераспространены как возбудители дерматофитозов. Предполагается, что в процессе эволюции почвенные грибы адаптировались к определенным обладателям и равномерно сформировали имеющиеся группы антропо, зоо- и геофильных дерматофитов.
Неидеальные формы дерматофитов разделяются на 3 рода:
1. Род Epidermophyton — продуцирует лишь макроконидии при отсутствии микроконидий. Включает 2 вида, один из которых патогенен для человека.
2. Род Microsporam — продуцирует микроконидии и шорехова-тые макроконидии. Описано 19 видов, из которых 9 вызывают инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) людей и звериных.
3. Род Trichophyton — продуцирует гладкостенные макроконидии и микроконидии. Включает 22 вида, в большей степени вызывающих инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) человека и звериных. Совершенные формы относят к роду Arthroderma гимноасковых.
Около 60% всех выделенных от людей видов составляет Т. rubrum, около 25 % Т. mentagrophytes, около 10 % — Т. verruco-sum и Т. tonsurans. Все другие виды: Е. fioccosum, M. andonini, М. canis и остальные — вызывает 1 %-5 % всех дерматофитозов.
Дерматофитозы
Источники инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) и эпидемиология
Дерматофиты — единственная группа реально контагиозных грибов, т.е. способных передаваться от одних {живых} источников (люди, звериные) к иным.
Превалирующие виды дерматофитов, вызывающие микозы кожи, различаются на разных территориях.
По естественному резервуару обитания и источнику инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) для людей дерматофиты разделяются на:
1. антропофильные, которые встречаются практически только у людей, вызывают в большей степени мягенькие, приобретенные инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека);
2. зоофильные свойственны для домашних и одичавших звериных и птиц. У людей вызывают островоспалительные и стремительно заканчивающиеся инфекции (термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека);
3. геофильные дерматофиты, имеющие своим резервуаром почву, вызывают островоспалительные ограниченные инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека), обычно, спонтанно излечивающиеся.
Таблица 1
Экологическая систематизация дерматофитов по их первичному резервуару
Антропофильные
Зоофильные
Геофильные
Везде всераспространенные виды
T.mentagrophytes var. Interdigitale
Т. equinum (лошадки)
Т. ajelloi
T. rubrum
T.mentagrophyte s var. men- tagrophytes (грызуны, кроли- ки, дикобразы)
Т. terrestre
Т. schoenleinii
Т. verrucosum (Kp. рог. скот)
M.fulvum
Т. tonsurans
М. canis (кошки, собаки)
M. gypseum
T. violaceum
М. equinum (лошадки)
M. cookei
М. audouinii
M. gallinae (куриные)
Е. stockdaleae
Е. floccosum
М. nanum (свиньи)
М. amazonicum
Географически ограниченные и редчайшие виды
Т. concentricum
T. simii (мортышки)
Т. megninii
M. persicolor (грызуны)
Т. gourvilli
Т. erinacel (ежи, дикобразы)
Т. yaoundei
M. distartum (кошки, собаки)
Т.soudanense
М. ferrugineum
Т. raubitschekii
Т. kanei
Дерматофитозы встречаются во всем мире, а их частота, локализация и доминирование возбудителей зависят от экологических причин, вида жизни и обычаев населения.
Везде распространенны такие виды дерматофитов как T. Mentagrophytes, T. Rubrum, E. floccosan
Некие виды дерматофитов имеют ограниченное географическое распространение и эндемичны на определенных территориях. Так Т. soudaneuse, T. gourvilii и Т. yaoundi географически ограничены Центральной и Западной Африкой. М. feirugineum в большей степени всераспространен в Стране восходящего солнца и окружающих её районах, Т. concentricum регится на юге Тихого океана, в Центральной и Южной Америке.
Но растущая мобильность населения приводит к изменению ареалов распространения дерматофитов. к примеру, Т. tonsurans вытеснил М. audouinii как главный возбудитель микоза волосистой части головы в США (Соединённые Штаты Америки — человек, звериное, почва) либо методом непрямого контакта через инфицированные чешуйки кожи либо волос (расчески, одежка, обувь, мебель, театральные кресла, головные уборы, белье для постели, полотенца, ковры).
Зависимо от вида дерматофиты могут сохранять жизнеспособность на предметах среды до 15 месяцев.
Патогенез дерматофитозов
Дерматофиты колонизируют кератиновые ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) и в ответ на их клеточки и метаболиты возникает воспалительная реакция организма на уровне кожи. Поражения являются в большей степени дерматологическими вследствие неспособности дерматофитов инвазировать глубочайшие ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) и органы. Только в редчайших вариантах вовлекаются подкожные ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) (керион, гранулёма Майокки) либо возникает генерализованная системная прионами»>зараза, вызванная дерматофитами.
In vitro дерматофиты повреждают кератин сочетанием ферментативного переваривания протеиназами (кератиназами) и механического давления.
In vivo их активность проявляется в зоне дифференциации на вновь синтезированном кератине. В течение инкубационного периода гифы прорастают в stratum corneum кожи и потом в волосяной фолликул и в стержень волоса, поражая новейшие фолликулы.
Для поддержания инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) рост гриба координируется со скоростью продукции кератина. Заразный процесс останавливается и исцеление начинается, когда вновь синтезирующийся здоровый кератин удаляет гифы гриба из кератинизированной зоны.
Виды рода Trichoplyton поражают кожу, волосы и ногти.
Виды рода Microsporum поражают волосы, кожу и весьма изредка ногти.
Виды Epidermophyton поражают кожу и ногти, но не волосы.
Предрасполагают к инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека): наследные причины, нарушения микроциркуляции, завышенная температура, влажность.
Заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) начинаются с локального воспаления в месте первичного внедрения гриба. Воспалительные конфигурации более выражены на периферической границе очагов.
Клинические проявления болезней классифицируются зависимо от анатомической локализации.
Ниже мы приводим таблицу (Табл. 2).
Таблица 2
Клинические формы дерматофитий и их более нередкие возбудители
работоспособности»>заболевания
Более нередкие возбудители
Микоз волосистой части головы, бровей и ресниц
Trichophyton species, Microsporum species
Фавус
Т. schoenleinii, T. violaceum (изредка), М. gypseum (изредка)
Керион
Т. verrucosum, T. mentagrophytes
Микоз бороды и усов
Т. rubrum, T.mentagrophytes, T. verrucosum
Микоз гладкой кожи лица и тела
Т. rubrum and any other dermatophytes и некие остальные дерматофиты
Т. concentricum
Микоз складок
Е. floccosum, Т. rubrum, T. mentagrophytes
Микоз ногтей
Т. rubrum, T. mentagrophytes, изредка остальные трихофитоны
Микоз кистей
Т. rubrum, E. floccosum, T. mentagrophytes
Микоз стоп
Т. rubrum, Т. mentagrophytes, E. floccosum
Лабораторная другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента)
диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) дерматомикозов ставят на основании медицинской картины и результатов лабораторных исследовательских работ.
Лабораторные исследования состоят из последующих шагов:
I. Взятие и транспортировка патологического материала;
II. Микроскопия материала;
III. Выделение и идентификация незапятанной культуры возбудителя с определением чувствительности к химиопрепаратам;
IV. Серологические и аллергологические исследования.
I. Взятие и транспортировка патологического материала.
Правильное взятие материала в значимой степени влияет на фуррор микроскопии и получение культуры, потому что не все чешуйки и волосы из очагов поражения содержат элементы гриба. Патологический материал следует брать в очень вероятном количестве из очагов, не подвергавшихся местному исцелению.
Дерматологические чешуйки соскабливают с активных периферических краев очага поражения либо в межпальцевых промежутках при помощи стерильного, слегка затупленного скальпеля. Клочки мацерированного, белесоватого рогового слоя и покрышки пузырьков берут пинцетом. Поверхностные корочки и чешуйки в центре микотических очагов содержат существенно меньше грибных частей и наименее подходящи для исследования. денька взятия материала с шелушащихся очагов на гладкой коже и у малышей можно использовать прозрачную липкую ленту.
Глубочайшие слои пораженной ногтевой пластинки соскабливают скальпелем, извлекая рыхловатые роговые массы. Для взятия материала из пораженных ногтей употребляют маникюрные ножницы, скальпели, пинцет, препаровальные иглы. Получение тонко измельченного патологического материала упрощает последующие исследования.
При поражении волос эпиляционным пинцетом извлекают расположенные на периферии очага деформированные, белесоватые, обломанные волосы, изменившие цвет и потерявшие упругость.
Исследование лампой Вуда
Лампа Вуда является инвентарем, облегчающим диагностику и взятие исследуемого материала при клинически выраженных и субклинических формах грибковых зараз, также употребляется для контроля излеченности. Лампа Вуда — это ультрафиолетовая лампа со стеклянным фильтром, состоящим из силиката бария с 9 % окисью никеля и пропускающим длинноволновые УФ (Ультрафиолетовое излучение — электромагнитное излучение, занимающее диапазон между фиолетовой границей видимого излучения и рентгеновским излучением)-лучи 365 нм, употребляется для облучения в мгле с расстояния до поверхности 20 см. Лампа Вуда вызывает флюоресценцию, индуцируемую у неких микробов.
Ярко-зеленая флюоресценция наблюдается при поражении волос дерматофитами рода Microsporum (M. audouinii, M. canis, М. ferrugenium, Mdistortum). способ дозволяет стремительно и просто провести скриннинг значимых контингентов людей (малышей) при подозрении на микроспорию. Ограничивает применение лампы Вуда повышение этиологической роли Т. tonsurans (слабенькая флюоресценция) и остальных нефлюоресцирующих видов дерматофитов.
При разноцветном лишае (М. furfur) пораженная кожа имеет золотисто-желтую флюоресценцию, при эритразме (возбудитель -Corynebacterium minutissimum) — красноватую, при поражении ран микробами рода Pseudomonas — ярко-зеленую. Артефакты при исследовании могут быть обоснованы внедрением неких косметических и антифунгальных мазей.
Для взятия материала при стертых формах микозов волосистой части головы можно применять стерильный вельвет, ковровый лоскуток, стерильную щетку для мытья рук с нанизанным на ее ворс на глубину 0,3-0,5 мм бинтом, создающим при вычесывании волос фильтроподобный слой, на котором задерживаются чешуйки и волосы. Для посева бинт расстилают на питательной среде до возникновения роста гриба.
Патологический материал можно собирчть в стерильные чашечки Петри; меж 2-мя стерильными предметными стеклами, скрепленными резинками и закручеными в бумагу; в пакеты из темной бумаги, чтоб лучше созидать чешуйки и волоски. Следует избегать использования пергаментной и вощеной бумаги, потому что при разворачивании может произойти утрата и распространение патогенного материала.
Транспортировка и пересылка материала выполняются в стерильных биксах с сопроводительными документами. В сопроводительной бумаге следует указывать:
1) ФИО, возраст, пол хворого;
2) учреждение и ФИО доктора;
3) дату взятия и нрав материала;
4) предполагаемый диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) и № истории заболевания.
Для взятия и исследования материала лучше иметь последующее оборудование: микроскоп световой, фазовоконтрастное устройство, осветитель, окулярный микрометр, микологические лопатки, бактериологические петли, препаровальные иглы, скальпели, пинцеты эпиляционные, пинцеты хирургические и анатомические, ножницы, шпатели, газовые горелки либо спиртовки, чашечки Петри, предметные и покровные стекла, пробирки бактериологические, пробирки центрифужные, предметные стекла с лунками, пробирки, воронки, пипетки мерные, глазные, пастеровские, палочки стеклянные, карандаши по стеклу, лупу.
Работа в микологической лаборатории, сплетенная с исследованием заразного материала, обязана проводиться в согласовании с существующими инструкциями по технике сохранности и противоэпидемическому режиму. В лаборатории следует иметь шкафы для незапятанной посуды, инструментов, питательных сред, реактивов. Для дезинфекции рабочих столов, стекол с патологическим материалом, защитных клеенок употребляют 5 % раствор хлорамина, раствор лизола и остальные средства, обозначенные в Аннотации МЗ СССР (Союз Советских Социалистических Республик, также Советский Союз — части:
— для микроскопии;
— для получения культур;
— для повторного контрольного исследования.
II. Микроскопия патологического материала
гриб прионами»>зараза эпидемиология дерматофит
более обычный и резвый способ для установления наличия гриба в тканях. Для этого дерматологические и ногтевые чешуйки измельчают препаровальными иглами, а длинноватые волосы (при фавусе) делят на недлинные фрагменты (0,1-1 мм) ребром нагретого скальпеля либо прокаленной препаровальной иглой. Измельченный материал помещают на середину предметного стекла, наносят 1—2 капли 10 % КОН и слегка подогревают над пламенем до возникновения белесоватого ободка по краю капли, не доводя до кипения, накрывают покровным стеклом и оставляют на 5-10 мин (волосы, дерматологические чешуйки), 30-40 мин (ногтевые чешуйки) для мацерации и просветления.
При перегревании продукта, сильном надавливании либо очень долговременной обработке происходят деформация волос и нарушение расположения спор и мицелия гриба. Чтоб обойтись без нагревания, продукт выдерживают в 20% КОН 30-60 мин. Препараты микроскопируют сначала под малым повышением с опущенным конденсором либо с прикрытой апертурной диафрагмой для затемнения поля зрения; потом избранные места просматривают при большенном увеличении сухой системы с приподнятым конденсором. При незначимом количестве частей гриба (сначала кислоты, 40 г глицерина, 20 мл дистиллированной воды, 20 г кристаллической карболовой кислоты и 0,05 г хлопчатобумажной синьки), хлорлактофенол (20 г кристаллического хлоралгидрата, 10 г кристаллической карболовой кислоты, 10 г молочной кислоты), 10 % водно-спиртовый раствор сульфида натрия, 15 % КОН в 15 % диметилсульфоксиде на дистиллированной воде. Хорошими и примерно равноценными смесями, просветляющими дерматологические и ногтевые чешуйки, являются 10 % КОН, 15 % КОН+15 % ДМСО и 10 % Na2S.
Для обработки грубых роговых масс ногтей, чешуек кожи с подошв и ладоней и при массовых осмотрах используют способы обогащения. Материал в центрифужных пробирках заливают 1,5-2 мл 20 % КОН, кипятят в водяной бане 30-60 мин, потом центрифугируют 15 мин при 3000 о/мин либо отстаивают 1 день. Опосля сливания воды осадок переносят на предметное стекло пастеровской пипеткой и микроскопируют.
Ногтевые чешуйки рекомендуется обрабатывать PAS (periodic acid-Shiff) способом, который окрашивает гифы грибов в красноватый цвет.
Нрав поражения волос дерматофитами дозволяет найти родовую принадлежность гриба. Вид можно обусловьте лишь по культуре.
Есть последующие типы поражения волос дерматофитами:
I. Trichophyton ectotrix — артроспоры размещаются неверными цепочками снаружи волоса, окружая его в основании. Пораженные волосы не флюоресцируют. Tr. ectotrix имеет две разновидности: Тг. ectotrix megasporon (крупноспоровый, размер спор 8-12 мк), характерен для поражения Т. equinum, T. gallinae, Т. megninii, Т. rubrum, Т. verrucosum и Tr. ectotrix microides (мелкоспоровый, размер спор 3—5 мк), характерен для поражения Т. mentagrophytes.
2. Trichophyton endotrix — артроспоры размером 3-5 мк параллельными цепочками размещаются лишь снутри волоса. Пораженные волосы не флюоресцируют: они скручиваются и ломаются, оставляя недлинные пеньки либо «темные точки». Данный тип поражения характерен для Т. tonsurans, T. violaceum, также для африканских дерматофитов Т. gourvilii, T. soudanense, T. yaoundei.
3. Microsporum — артроспоры размером 2-3 мк (нечетко видны при малом увеличении) беспорядочно-мозаично размещаются снутри волоса и белесоватым чехлом окружают его стержень снаружи. Пораженные волосы ярко флюоресцируют; обламываясь, они оставляют пеньки 5-8 мм. Таковой тип поражения волос характерен для М. audouinii, M. canis, M. distortum, M. ferrugineum. При надавливании на покровное стекло в препарате из пораженного микроспорумами волоса время от времени можно созидать мицелиальную бахромку — так именуемую «кисть Адамсона». волосы, пораженные М. gypseum, M. fulvum, M. nanum, M. vanbreuseghemii, не флюоресцируют, споры при всем этом наиболее большие (5-8 мк) и видны при малом увеличении.
4. Trichophyton — свойственное для фавуса полиморфное поражение волос септированными гифами мицелия разной ширины и артроспорами различной величины, расположенными снутри волос, содержащих пузырьки воздуха и капельки жира. волосы не заполнены грибковыми элементами, остаются длинноватыми; слабо флюоресцируют под лампой Вуда. Но не следует основывать диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) лишь на наличии в волосе пузырьков воздуха и капель жира, потому что они время от времени наблюдаются и при остальных типах поражения. Не считая поражения волос по типу Achorion, для фавуса типично образование скутул,- желтоватых корочек, содержащих гифы и споры гриба. Данный тип поражения вызывают Т. schoenleinii, Т. violaceum, M. gypseum.
В чешуйках гладкой кожи, пораженной дерматофитами, можно созидать гифы септированного ветвистого мицелия шириной 2-4 мк, время от времени цепочки из круглых либо многоугольных артроспор размером 4-7 мк. В ногтевых чешуйках почаще наблюдают цепочки либо скопления артроспор и пореже гифы мицелия.
Следует различать от частей гриба такие артефакты, возникающие в продуктах, как так именуемый «мозаичный гриб» (размещается по границам эпителиальных клеток, состоит из фрагментов органической природы различного размера), удлиненные кристаллы щелочи (полигональная форма); исчезают при промывании продукта, для чего же с одной стороны наносят каплю воды, а с иной помещают кусок фильтровальной бумаги и осторожно, чтоб не утратить материал, повторяют 2-3 раза, капли жира (разные размеры, отсутствие внутренней структуры), нити ваты (размер, гомогенность, некорректная форма, кисточка на конце).
В заключении по микроскопии патологического материала указывают тип поражения волос, наличие либо отсутствие мицелия и спор гриба в дерматологических и ногтевых чешуйках. Но считают, что гифы дерматофитов в продуктах неотличимы от мицелия дрож-жеподобных либо плесневых грибов. Потому для определения вида возбудителя необходимо соединять микроскопию патологического материала с получением незапятанной культуры. При всем этом эталоны патологического материала следует культивировать и при отрицательных результатах микроскопии.
III. Культуральное исследование
Оно нужно для выделения и идентификации возбудителя, для определения латентного дерматофитоза, носительства дерма-тофитов бодрствующими лицами, выявления дерматофитов в окружающей среде и определения чувствительности культуры к химиопрепаратам
3.1 Получение незапятанной культуры
Исследуемый материал следует очень измельчить и засевать в малых количествах на скошенный агар в пробирках в 2-4 точки на расстоянии 1-2 см. Материалом одной пробы засевают не наименее 2-3 пробирок (волосы) и 4-5 пробирок (дерматологические и ногтевые чешуйки) на две разные питательные среды. Для первичной изоляции дерматофитов желательно применять обычную агаршованную среду Сабуро (SDA); 2 либо 4 % глюкозы (глюкоза 20 либо 40 г, пептон 10 г, агар 20 г, дистиллированная вода до 1000 мл, рН 6,8-7,0), сусло-агар (пивное сусло, разбавленное дистиллированной водой до 7 % углеводов по Баллингу, агар 20 г) либо среду Сабуро с антибиотиками: бактерицидные лекарства (пенициллин: 50 мкг/мл+стрептомицин 50-100 мкг/мл либо левомицетин 50 мкг/мл, либо биомицин 200 ед/мл, гентамицин) и антиплесневой антибиотик актидион (циклогексимид) 0,1-0,4 мг/мл. Изготовление селективных сред с антибиотиками — 200 000 ед кристаллического пенициллина растворяют в 10 мл стерильной воды, 1 мл этого раствора + 9 мл воды дают концентрацию 2000 мкг/мл. Добавление 2,5 мл этого разведения к 100 мл растопленной и охлажденной до 50° среды дает концентрацию пенициллина 50 мкг/мл. Аналогично создают добавление в среду стрептомицина (1 г стрептомицина=1 млн.ед). Биомицин добавляют растворением 1 пилюли (100000 ед) в 500 мл остывающей среды. Левомицетин за ранее растворяют в 10 мл 70° этилового спирта и добавляют в среду до концентрации 50 мкг/мл. Актидион (антибиотик из Streptomyces griseus) — белоснежный кристаллический порошок, термостабильный, отлично растворимый в ацетоне. В 1 мл ацетона растворяют 10-50 мг актидиона, доводят до 2 мл дистиллированной водой и добавляют к 100 мл остывающей среды. Актидион не влияет на рост дерматофитов и подавляет почти все плесневые грибы, также виды Candida и Cryptococcus. Потому при подозрении на этилогическую роль этих грибов посевы следует создавать также и на среды без актидиона.
Посевы инкубируют в термостате при 25-30-37° соответственно (почаще 30°) и изучат раз в неделю до 4 недель. При подозрении на Т. verrucosum половину засеянных пробирок следует инкубировать при 37°, потому что гриб резвее вырастает при данной для нас температуре. 1-ые признаки роста дерматофитов отмечают с 4 по 12 денек инкубации в точках посева по бокам внесенного материала. При отсутствии роста в течение 30 дней результаты культивирования считают отрицательными. В хороших критериях первичные культуры почти всех дерматофитов можно идентифицировать на 7-10 денек опосля посева, но в случае фавиформных грибов время от времени лишь на 20-30 денек. Первичные культуры вырастают сравнимо медлительно и при использовании сред без лекарств могут быть подавлены наиболее стремительно возрастающими микробами и плесневыми грибами. В отличие от крайних, колонии дерматофитов никогда не бывают темными, голубыми либо зеленоватыми. Принципиально соблюдать асептику при взятии и хранении материала, также изучить его в кратчайший срок. При возникновении роста лучше произвести отсев с края первичной культуры на свежайшую среду для получения незапятанной культуры. Перед инкубацией засеянные и надписанные чашечки Петри следует завернуть в целофан либо в бумагу для предотвращения резвого высыхания и вторичного воздушного загрязнения.
3.2 идентификация незапятанной культуры
3.2.1 Черта колоний
При описании колоний следует отмечать такие признаки как время возникновения и скорость роста колонии, ее размеры, цвет поверхности и оборотной стороны, нрав поверхности и ее рельеф, форму и край колонии, ее густоту и наличие врастания в субстрат. Характеризуя колонию, указывают на ее отличия от обычных штаммов, что принципиально для оценки полиморфизма данного вида гриба, также для выявления атипичных штаммов и новейших, редчайших в Рф видов.
3.2.2 Микроскопичное исследование культур
При малом увеличении и сильном освещении можно изучить край колонии через стекло пробирки, потому что нити мицелия передвигаются на стекло. наличие и размещение соответствующих морфологических частей (конидии, спирали) в сочетании с культуральными признаками в раде случаев разрешают предвари-. тельно найти вид без изготовления микропрепарата либо микрокультуры. При таком исследовании пробирку можно фиксировать рукою либо применять древесную подставку с вырезом.
Для изготовления микропрепарата фрагмент культуры расщепляют микологической лопаточкой и препаровальной иглой на предметном стекле в капле воды (вода, раствор Люголя, лак-тофенол, этанол+вода 1:1, этанол+глицерин + вода 2:4:4) и накрывают покровным стеклом. Культуру для исследования берут из центральной и периферической зоны колонии. Микроскопировать следует сначала под малым (*8), а потом под огромным (*40) повышением сухой системы микроскопа. Элементы гриба определяют при помощи окулярного микрометра, идентификации
На центр покровного стекла наносят каплю водянистой среды, содержащую грибные элементы, и устанавливают его каплей вниз на смазанное вазелином кольцо Вантигема либо предметное стекло с лункой. Для предотвращения высыхания на дно заносят каплю воды. Можно приготовить микрокультуры в агаровых блоках. Для этого из агара вырезают квадраты размером 10×10 мм, высотой 2 мм и переносят их на предметное стекло. Культуру засевают в центре всякого ребра агарового квадрата, накрывают его покровным стеклом и просвет меж покровным и предметным стеклом заполняют за ранее расплавленным парафином для предотвращения высыхания. Микрокультуры инкубируют во увлажненной камере (чашечка Петри либо эксикатор с влажной ватой).
При микроскопичной характеристике культур следует учесть септированность мицелия, наличие, нрав и метод прикрепления макроконидий и микроконидий, также структуру мицелия и его образований — спиралей, гребешковых гифов, фавиче-ских канделябров. наличие и нрав хламидоспор не имеют решающего диагностического значения.
3.2.4 Биохимические дифференциально-диагностические испытания
При невозможности идентифицировать штаммы, основываясь лишь на их морфологических особенностях, используют испытания для определения неких проявлений метаболической активности грибов. Для лабораторной практики разработаны способы определения питательных потребностей и способы определения ферментативной активности дерматофитов.
Определение потребности в источниках питания и витаминах.
Основную минимальную среду (NH4NO3 1,5 г, глюкоза 40 г; MgS04 * 7НгО 0,5 г; КН2РС>4 1 г; агар Дифко 20 г; дистиллированная вода до 1000 мл) растворяют при нагревании и автоклавируют при 0,5 атм 15 мин. Витамины (группа низкомолекулярных органических соединений относительно простого строения и разнообразной химической природы) (тиамин 1 мг, i-инозит 250 мг, L-гистидин 150 мг, никотиновая кислота 10 мг) растворяют в 100 мл дистиллированной воды любой, автоклавируют при 0,5 атм 15 мин и хранят в холодильнике. Перед опытом 2 мл того либо другого витамина (витамины — сборная по химической природе группа органических веществ, объединённая по признаку абсолютной необходимости их для гетеротрофного организма в качестве составной части пищи) добавляют к 100 мл остывающей главный среды. Для определения возможности ассимилировать углеводы их заносят в основную среду заместо глюкозы до конечной концентрации 1 %. Источники азотистого питания заносят в среду заместо NH4NO3. Контролем служат посевы на основную и обогащенную среду.
Кератинолитическая активность (тест перфорации волос).
А) Мелко раздробленную очищенную почву стерилизуют в автоклаве 3 денька попорядку по 1 часу при 1 атм. и помещают в чашечки Петри ровненьким слоем в 3-4 мм. На поверхности земли умеренно и не густо распределяют нарезанные на недлинные фрагменты (15-20 мм) детские волосы, простерилизованные в автоклаве 2 денька попорядку по 20 мин при 1 атм. На поверхность почвенно-волосяной среды наносят взвесь исследуемой культуры в 1-2 мл дистиллированной воды. Посевы инкубируют 4 недельки при 22-27° с еженедельным увлажнением среды стерильной дистиллированной водой. Наличие органов-перфораторов либо остальных форм кератиноли-зиса регистрируют методом еженедельной микроскопии волос, на которых происходит развитие культуры гриба.