Учебная работа. Биохимические маркеры развития парентеральных вирусных гепатитов

(Пока оценок нет)

Загрузка...

Учебная работа. Биохимические маркеры развития парентеральных вирусных гепатитов

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «ВИТЕБСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени П.М. МАШЕРОВА»

Факультет Био

Кафедра Экологии и охраны природы

КУРСОВАЯ РАБОТА

по дисциплине Биохимия

БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ развития ПАРЕНТЕРАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ

Карпова Наталья Михайловна,

3 курс 33(2) БФ ОЗО

Витебск, 2015

Реферат

Список определений: Парентеральные вирусные гепатиты, гепатит В, С, Д, маркеры парентеральных вирусных гепатитов (HBsAg, HCV, дефектный-HDV), лактатдегидрогеназа, аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, билирубин, щелочная фосфатаза.

Предмет исследования: биохимические маркеры парентеральных вирусных гепатитов.

объект исследования: сыворотка крови (внутренней средой организма человека и животных), направленная на исследование в клинико-диагностическую лабораторию УЗ «Могилевский областной лечебно-диагностический центр».

Цель данной работы: выявить главные биохимические аспекты диагностики парентеральных вирусных гепатитов.

задачки работы:

1. Сформировать общее представление о природе .

2. Классифицировать данные по применению биохимических маркеров для диагностики парентеральных вирусных гепатитов.

3. Изучить высококачественные и количественные способы определения маркеров парентеральных вирусных гепатитов.

4. На основании экспериментальных данных, прийти к выводу о главных способах диагностики парентеральных вирусных гепатитов посреди населения, применяемых в медицинской практике.

способы исследования: описательно-аналитический, сравнительно-сопоставительный, статистический, лабораторные способы диагностики маркеров парентеральных вирусных гепатитов. Теоретическая и практическая значимость: в работе представлена и систематизирована главная информация по биохимическим аспектам диагностики парентеральных вирусных гепатитов.

Введение

Глобальная организация здравоохранения объявила 28 июля Глобальным Деньком борьбы с гепатитами для увеличения осведомленности и вербования к данной нам дилемме внимания людей во всем мире. Установлено, что вирусные гепатиты — это группа всераспространенных и небезопасных для человека заразных болезней, которые достаточно существенно различаются меж собой, вызываются различными вирусами, но все таки имеют общую черту — это работоспособности, которое поражает сначала печень человека и вызывает ее воспаление (Воспаление — сложная местная реакция организма на повреждение). Печень является самым большим непарным органом в организме человека. Она размещается в правом подреберье под диафрагмой. Это огромная хим лаборатория, которая делает в организме человека около 500 актуальных функций, к примеру: обезвреживает посторонние вещества, перерабатывает вещества в энергию и «строй материалы», продуцируют желчь, которая помогает организму переваривать еду, хранит огромное количество витаминов (А, B, C.К, РР, фолиевая кислота и др.) и микроэлементов (железо, медь, цинк, марганец, молибден), сахаров и почти все другое.

За крайнее время с неувязкой парентеральных вирусных гепатитов (дальше ПВГ) столкнулись миллионы людей. В мире насчитывается около 240 млн. приобретенных носителей вируса гепатита В и около 700 млн. носителей вируса гепатита С, т.е. любой 6 обитатель нашей планетки. Это обширно распространённая патология посреди населения, Раз в год 1,5 млн. обитателей планетки гибнут от острых и приобретенных действий, обусловленных вирусами гепатитов.

Парентеральные вирусные гепатиты в протяжении ряда крайних лет продолжают оставаться обширно всераспространенным заразным болезнью посреди населения. Раз в год регистрируются, в среднем, около 300-350 случаев ПВГ. В 94% случаев обнаружения маркеров вируса парентеральных гепатитов происходит при воззвании за мед помощью по иным причинам, т.к. почти всегда болезнь протекает бессимптомно, только в 3-5% развивается острое клинически выраженное социально полезной деятель»>болезнь. Исцеление парентеральных гепатитов долгое и дорогостоящее, при приобретенном течении может длиться всю жизнь.

Неувязка вирусных гепатитов является одной из самых животрепещущих и в нашей стране, потому Министерством здравоохранения Республики Беларусь в целях усиления профилактической работы и вербования внимания общественности поддержана инициатива Интернационального Альянса по борьбе с гепатитами объединяющего наиболее 200 ассоциаций нездоровых гепатитами по всему миру. В Беларуси с 2010 года организуются мероприятия в рамках Интернационального денька борьбы с гепатитами. [ 3]

В истинное время учеными разработаны действенные вакцины против вирусных гепатитов А и В. Потому преждевременное выявление нездоровых гепатитом и вакцинация являются на нынешний денек главными способами предотвращения этих болезней.

Предмет исследования: биохимические маркеры парентеральных вирусных гепатитов.

Цель данной работы: выявить главные биохимические аспекты диагностики парентеральных вирусных гепатитов.

задачки работы:

1. Сформировать общее представление о природе .

вирус гепатит болезнь маркер

1. Общее представление о заболеваемости

1.1 систематизация ПВГ

Парентеральный вирусный гепатит — это воспалительное социально полезной деятель»>болезнь печени, которое вызывают вирусы, проникающие в организм человека через нарушения и повреждения целостности дерматологических и слизистых покровов. Инфицирование наступает при контакте с зараженной кровью (внутренней средой организма) либо иными био жидкостями. К группе парентеральных вирусов относятся вирусы гепатита В, D, С, F, G, TTV, Sen V.В истинное время детально индетифицировано и включено в международную систематизацию вирусов 5 гепатотропных вирусных возбудителей: вирус гепатита А ( HAV ), вирус гепатита В ( HBV ), вирус гепатита С ( HCV ), вирусгепатита D ( HDV ) и вирус гепатита E ( HEV ).

А — энтеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HAV)

В — парентеральный (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-HBV)

С — парентеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HCV)

D — парентеральный (дефектный-HDV)

E — энтеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HEV)

Предполагается, что есть и остальные гепатотропные вирусы ещё недостаточно изученные.

G ( GB ) — парентеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HGV)*

ТТ — парентеральный (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-TTV)*

SEN — парентеральный (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-SENV)*

*не утверждены по таксономии и номенклатуре вирусов.

Устойчивость вирусов в окружающей среде очень высочайшая — при комнатной температуре на предметах и поверхностях инфекционность вирусов сохраняется от 3 до 6 месяцев, в замороженном виде — 15-25 лет.

Источником инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) парентерального вирусного гепатита является человек — нездоровой острым, приобретенным гепатитом либо носитель вируса, у которого клинические проявления заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) отсутствуют. вирус содержится во всех био жидкостях источника инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека): крови (внутренней средой организма человека и животных), сперме, вагинальном секрете. В наименьших концентрациях — в слюне, моче, грудном молоке, поте, желчи. Для инфецирования довольно мельчайшей капли крови (внутренней средой организма человека и животных) (10-6 — 10-7 мл.крови (внутренней средой организма человека и животных)), иногда даже невидимой невооруженным глазом. Инфецирование происходит естественными и искусственными способами. Естественные пути реализуются при половом контакте, от мамы к ребенку (внутриутробно через плаценту либо во время родов при прохождении через родовые пути). Принципиальное пространство имеет контактно-бытовой путь передачи инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). Контактно-бытовой путь реализуется:

а) при использовании общих с нездоровым предметов личной гигиены (бритвенных устройств, маникюрных принадлежностей, мочалок, расчесок, постельных принадлежностей);

б) при соприкосновении с хоть какими поверхностями помещений и предметов, грязными кровью (внутренней средой организма) (при наличии у контактных порезов и микротравм);

в) может быть инфецирование и во время уличных стычек;

Искусственные пути передачи в истинное время почаще всего реализуются при проведении немедицинских парентеральных вмешательств, а именно — во время инъекционного введение наркотиков с внедрением общих шприцев, игл либо уже инфицированного наркотика.

Существует риск инфецирования во время проведения татуировок, пирсинга, маникюра и педикюра грязным инструментарием.

Некий риск инфецирования существует и при проведении мед манипуляций: при переливании крови (внутренней средой организма человека и животных), во время гемодиализа, при разных хирургических вмешательствах. Но в нашей стране этот риск сведен к минимуму, т.к. для проведения инъекций и манипуляций употребляются разовые стерильные шприцы, инструментарий и перевязочный материал, а для предупреждения инфецирования через донорскую тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) при каждой кроводаче исследуется на маркеры ПВГ.

работоспособности может протекать в клинически выраженной и бессимптомной форме. Инкубационный период (период от момента инфецирования до первых клинических проявлений) в среднем составляет от 6 недель до 6 месяцев. В течение этого времени вирус плодится и его концентрация в организме возрастает. Наступает преджелтушный период (4-10 дней), в течение которого возникает чувство общей беспомощности, вялости, возникает тошнота (тягостное ощущение в подложечной области и глотке), рвота (рефлекторное извержение содержимого желудка), усугубляется аппетит, прямо до его отсутствия, тревожат кожи, моча темнеет и становится «цвета пива», кал обесцвечивается. время от времени может появляться сыпь типа «крапивницы». И, в конце концов, наступает желтушный период, продолжительностью от 2 недель до 1,5 месяца. Сначала желтеют глаза, слизистая оболочек твердого неба и уздечки языка, позже окрашивается кожа. Желтуха сопровождается дерматологическим зудом и ухудшением общего состояния, нарастают признак — один отдельный признак интоксикации (боль в голове, сонливость (наличие избыточной продолжительности сна), увеличение температуры). Возникает чувство тяжести и ноющие либо приступообразные диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) на основании обнаружения завышенной активности в крови (внутренней средой организма человека и животных) АЛТ, ACT и остальных гепатоспецифическихэнзимов высочайшей концентрации в крови (внутренней средой организма человека и животных): HBsAg и HBeAg, анти-HBsAg, IgM, ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-вируса. Дальше желтуха равномерно потухает и наступает период излечения. Но острая прионами»>зараза у части нездоровых перебегает в носительство маркеров ПВГ или в приобретенный гепатит. Если для гепатита В свойственна хронизация процесса в 5-10% случаев, для гепатита В+Д — в 60% случаев, то для гепатита С — в 80-90% случаев. Развитие цирроза печение и гепатоцеллюлярной карциномы — результат долгого персистирования вируса в организме.

Основой профилактических мероприятий по предотвращению инфицирования вирусом гепатита Вявляется вакцинация. В Республике в рамках приказа Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 05.12.2006 №913 «О совершенствовании организации проведения профилактических прививок» прививаются против гепатита В:

· новорожденные детки

· 13-летние дети

· детки и взрослые, в семьях которых есть носитель HBsAg, нездоровой острым либо приобретенным гепатитом В.

· детки и взрослые часто получающие лица, у каких произошел контакт с материалом, контаминированным вирусом гепатита В.

· мед работники, имеющие контакт с кровью (внутренней средой организма) и иной био жидкостью человека.

· лица, занятые в производстве иммунобиологических препаратов из донорской и плацентарной крови (внутренней средой организма человека и животных).

· студенты мед институтов и учащиеся средних мед учебных заведений.

· пациенты перед плановой операцией, ранее не привитые

К весьма принципиальным профилактическим мероприятиям относятся меры по предупреждению рискованного поведения:

· нужно избегать случайных половых связей, иметь 1-го надёжного полового партнёра.

· применять презерватив при половом контакте;

· никогда не экспериментировать и не употреблять наркотики;

· косметические процедуры (татуировки, пирсинг, маникюр, педикюр) проводить лишь в особых учреждениях, имеющих лицензию на их проведение.

· воспользоваться лишь персональными предметами личной гигиены: бритвенными и маникюрными принадлежностями, ножницами, расческами, мочалками, полотенцами.[5,1,13]

· Главным резервуаром вируса гепатита В являются вирусоносители, которых по данным ВОЗ насчитывается наиболее 300 млн. человек. Не считая вирусоносителей, резервуаром вируса являются нездоровые наточенными и приобретенными формами гепатита В, в том числе нездоровые циррозом печени.

По данным Глобальной организации здравоохранения около 1-ого млрд человек в мире инфицировано вирусом гепатита С. Вирус гепатита Сявляется однонитевым РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) — вирусом и по структуре генома относится к флавивирусам. Для вируса гепатита С свойственна высочайшая частота мутаций. Инфецирование вирусом гепатита С в 80-85% случаев происходит парентерально, то — есть также как гепатитами В и D . Вирусный гепатит D ( HDV ) как правило наблюдается в ассоциации с вирусным гепатитом В ( HBV ), но существенно пореже, чем остальные вирусные гепатиты. Вирусным гепатитом D нередко заражаются при переливании крови (внутренней средой организма человека и животных) либо её компонент, изредка при половых контактах[6,18]

1.2 смерти) ПВГ

Диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) вирусного гепатита основывается на данных опроса, осмотра и лабораторного обследования пациента. С помощью лабораторной диагностики оценивают глубину повреждения печени, выявляют тип вируса и стадию процесса. Не считая медицинской картины диагностическую Ценность имеют общий клинический анализ крови (внутренней средой организма человека и животных), в каком во время заболевания определяется увеличенное содержание лимфоцитов, также замедленная скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и анализ мочи, в каком с первых дней заболевания наблюдается положительная реакция на уробилин и желчные пигменты. Информативным является УЗИ (Ультразвуковое исследование — неинвазивное исследование организма человека или животного с помощью ультразвуковых волн) печени, показывающее ее повышение и уплотнение. Делая упор лишь на осмотр и общие клинические способы обследования, достаточно трудно установить тип вирусного гепатита. Косвенно представить тип вируса можно, если установлена связь с источником поражения, также по продолжительности периодов заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности).[8]

другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) вирусного гепатита С: базирована на выявлении специфичных антитела IgM к вирусу гепатита С ( HCV ), определяемые иммуноферментным способом являются подтверждением во-1-х инфицирования HCV , во-2-х — свидетельствуют о остроте гепатита либо обострении приобретенного гепатита, невзирая на отсутствие гиперферментемииАлТ и АсТ и симптомов гепатита. Определение РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) вируса гепатита С полимеразной цепной реакцией (ПЦР) дозволяет достоверно найти наличие либо отсутствие HCV в крови (внутренней средой организма человека и животных) пациента, найти вирусный генотип, количество РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) (его генокопий) в 1мл. крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого. нужно создать: биохимическое исследование крови (внутренней средой организма человека и животных) на АлТ, АсТ, холестерин (органическое соединение, природный жирный, липофильный спирт, содержащийся в клеточных мембранах всех живых организмов за исключением безъядерных) билирубин, УЗИ (Ультразвуковое исследование — неинвазивное исследование организма человека или животного с помощью ультразвуковых волн) органов брюшной полости. Все нездоровые переболевшие хоть какой формой гепатита С должны быть на диспансерном учёте и 2-3 раза в году проходить лабораторное обследование.

другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) гепатита В: вирус гепатита B является ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-содержащим вирусом.

Он имеет 4 антигена:

HBsAg — поверхностный антиген, имеет специальные нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри, при помощи которых вирус цепляется за клетки-мишени, этот антиген быть может заблокирован антителами анти-HbsAg. Является более частым маркером вируса гепатита B.

HBcorAg — сердцевинный антиген, связывается крепко с ядрами клеток-мишеней, в крови (внутренней средой организма человека и животных) фактически не определяется. антитела к нему могут определяться всю жизнь, но защитной способностью они не владеют.

HBeAg — антиген инфекциозности. Обнаружение свидетельствует о размножении вируса в организме.

HBxAg — антиген, кодируемый определенными генами. Этот антиген отвечает за начало развития онкологического процесса, т.к. через подавление белка р-53 он активирует протоонкогены.

Для диагностики вирусного гепатита В (и вероятного гепатита Д) употребляют их специальные маркеры:

— ИФА (иммуноферментный анализ) определение в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) антигенов (HBsAg, HBeAg) и кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса гепатита В (по предназначению доктора — быть может высококачественное и количественное). Для начала проводится высококачественное определение, потом по мере необходимости — количественное (оно наиболее дорогостоящее).

При гепатите В более достоверным является отслеживание вируса по антигену HBsAg способом ИФА (иммуноферментный анализ).

Плюсы способа ИФА:

— доступность методики, распространенность в лабораториях, — показатель достоверно отражает уровень зараженных клеток печени, — изменение динамики соответствует уровню иммунного ответа организма на вирус, — исчезновение антигена HBsAg является более надежным показателем полного исцеления пациента.[9,11]

Лабораторная другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) гепатита Д (ГД) вирус гепатита Д (ВГД) — это дефектный вирус, содержащий одно-спиральную РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов), которому для репликации нужно помощь вируса ГВ для синтеза оболочечных белков, состоящих из HBsAg, который употребляется для инкапсуляции генома ВГД. ВГД не принадлежит ни к одному из узнаваемых семейств вирусов звериных, по своим свойствам ВГД более близок к вироидам и сателлитным вирусам растений. Лабораторная смерти) осуществляется методом обнаружения серологических маркеров ВГД, включая наличие антигена, антител к нему и РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) ВГД. Обнаружение антигена ВГД и РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) ВГД в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) либо ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) печени свидетельствует о наличии активной ГД-инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека), но, необходимо подчеркнуть, что эти маркеры могут не обнаруживаться в сыворотке нездоровых фульминантным ГД. Маркером активной репликации ВГД также является анти-ВГД класса IgМ. Серологические маркеры инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) ГД зависят от того, как был приобретен вирус — в виде коинфекции с ВГВ (у большинства нездоровых социально полезной деятель»>болезнь имеет острое течение и завершается выздоровлением) либо суперинфекции у нездоровых с приобретенной ГВ-заразой (протекает тяжелее, чем коинфекция — в 10% развивается фульминантный гепатит). При коинфекции почти всегда антитела — анти-ВГД класса IgМ и IgG — обнаруживаются в течение работоспособности»>человек был когда-либо инфицирован ВГД. антиген ВГД определяется лишь у 25% нездоровых и обычно исчезает совместно с исчезновением HВsAg. При суперинфекции у нездоровых с приобретенной ГВ-заразой серологическая картина имеет последующие соответствующие индивидуальности: — титр HBsAg понижается к моменту возникновения антигена ВГД в сыворотке; — антиген ВГД и РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-ВГД продолжают определяться в сыворотке, потому что обычно у большинства пациентов с суперинфекцией ГД (70-80%) развивается приобретенная простейшими»>, в отличие от случаев коинфекции; — определяются высочайшие титры время. Серологические маркеры вируса ГД определяют способом иммуноферментного и радиоиммунного анализа, а РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-ВГД — способом полимеразной цепной реакции. Русскими и забугорными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все нужные составляющие и реактивы для постановки теста. В исследовательских продуктах употребляют дельта-антиген, приобретенный из печени сурков, экспериментально зараженных ГД; антиген, выделенный из печени погибших носителей ВГД; дельта-антиген, приобретенный генно-инженерным методом.[12,11]

2. Способы определения маркеров ПВГ

Результаты проведенных лабораторных исследовательских работ играют существенную, если не ведомую, роль для доказательства вирусного гепатита и установления его этиологии.

Главным диагностическим маркером ВГВ является HBsAg. Определение HBsAg осуществляется способами ИФА, ФИА, МФА, также мембранным экспресс-методом. антитела к HBsAg (дальше ~ антиHВS) являются маркером, свидетельствующим о ранее перенесенной инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) или наличии поствакцинального иммунитета.

В вариантах первичного обнаружения HBsAg, анти-НВsАg способами ИЛА либо ФИА нужно проведение конфирматорного теста.

Для выявления HBeAg употребляются способы ИФА и ФИА, также мембранный экспресс-способ. Первично-положительные по HВеАg результаты исследования подтверждаются конфирматорным тестом. HBeAg представляет собой диагностический маркер, ассоцированный с высочайшей инфекционностью крови (внутренней средой организма человека и животных), активной репродукцией вируса гепатита В и риском перинатальной передачи возбудителя.

Выявление наличие HBcAg в гепатоцитах свидетельствует о активной репродукции вирусных частиц.

антитела к HBcAg класса М (дальше ~ анти-НВс IgM) возникают через 1 — 2 недельки опосля возникновения HBsAg и циркулируют крови (внутренней средой организма человека и животных) от 2 до 18 месяцев у пациентов с острым вирусным гепатитом В и пациентов с приобретенным вирусным гепатитом В — при реактивации инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека).

Суммарные антитела к HBcAg и составляющие их антитела класса G возникают опосля анти-НВс IgM и продолжительно (нередко на всю жизнь) определяются у переболевших острым вирусным гепатитом В, пациентов с приобретенной формой кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса гепатита В способом ПЦР показывает на наличие и репродукцию в организме возбудителя.

Количественное обнаружение ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса гепатита В способом ПЦР (определение вирусной перегрузки) дозволяет оценить активность репликации вируса и эффективность антивирусной для снятия либо устранения симптомов и проявлений терапии (заболевания). Способ IЦР употребляется также для определения генотипов вируса гепатита В целью выбора хорошей схемы исцеления работоспособности»>заключения о сущности болезни и состоянии пациента) маркеров ВГD проводится у лиц, имеющих маркеры вируса гепатита В.[14]

Выявление серологических маркеров вирусных гепатитов

Установить вирусную природу гепатита и получить информацию о его этиологии может быть лишь методом выявления серологических маркеров вирусов гепатита. К таковым маркерам относят вирусные белки (антигены), специфичные антитела, вырабатываемые организмом в ответ на заразу, и нуклеиновые кислоты вируса (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) либо РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)), представляющие его геном.

совокупа способов, позволяющих выявлять в био тканях и жидкостях специальные вирусные либо бактериальные белки (антигены) либо антитела, вырабатываемые в организме владельца в присутствии того либо другого возбудителя, относят к иммунологическим способам лабораторного анализа. За крайние несколько десятилетий иммунологические способы исследования получили повсеместное распространение. Предпосылкой этого явилось тесное слияние иммунологии и биотехнологии, которое позволило создать и ввести в практику широкий диапазон тест-систем, основанных на содействии антиген — антитело. Применительно к вирусным гепатитам, иммуноферментный анализ относится к непрямым способам обнаружения возбудителя, позволяющим установить этиологию работоспособности»>заболевания.

Сравнимо не так давно в практику клинико-диагностических лабораторий вошли способы генодиагностики, дозволяющие обнаруживать и охарактеризовывать гены либо несмысловые последовательности ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) и/либо РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов). Своим развитием эти способы должны разработкой в 1983 г принципа полимеразной цепной реакции (ПЦР). 1-ые сообщения по практическому применению ПЦР возникли в 1985 г и с того времени количество публикаций, где ПЦР употребляется в качестве 1-го из способов исследования, занимает одно из первых мест в мировой научной литературе. Эти подходы приложимы для обнаружения и исследования геномов заразных агентов, обнаружения маркеров онкологических болезней, выявления генетических конфигураций в геноме человека, связанных с теми либо другими многофункциональными нарушениями. В отличие от ИФА, ПЦР-анализ относится к прямым способам обнаружения возбудителя в клиническом материале, что дозволяет оценить активность вирусного процесса и проследить процессы распространения возбудителя в разных органах и тканях.

Серодиагностика вирусного гепатита В.

Вирус гепатита В (hepatitis B Virus, HBV) относится к семейству Hepadnoviridae. Геном вируса представлен отчасти сдвоенной круговой молекулой ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) размером 3200 п.н. При световой микроскопии HBV смотрится сферической частичкой поперечником 42 нм (частичка Дейна), состоящей из ядра — нуклеоида, имеющего форму икосаэдра поперечником 28 нм, снутри которого находится двуцепочечная ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов), концевой белок и фермент ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-полимераза. В состав нуклеоидного белка входят HBcAg и HBeAg. Наружная оболочка (шириной 7 нм) образована поверхностным антигеном HBV — HBsAg (рис. 2, 3). вирус гепатита В является псевдоретровирусом, т. е. его ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) может отчасти встраиваться в геном гепатоцитов. При ОВГ и обострении ХГ вирусные частички можно найти в гепатоцитах и сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого. При интегративной форме ХГ В и в стадии ремиссии HBV в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) не выявляется.Основой лабораторной диагностики инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV является определение серологических маркеров инфицирования вирусом: HBsAg, HВeAg, анти-НВс класса IgM и IgG, анти-НВе и анти-HBs, HBV ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) и активности вирусной ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) — полимеразы. Зависимо от течения вирусного гепатита В диапазон конфигурации серологических маркеров смотрится по-разному

HBsAg — главный маркер инфицирования HBV. При остром вирусном Вв большинстве случаев (90-80 %) HBsAg удается выявить в инкубационном периоде, начиная с 3-5-й недельки инфецирования. Средняя длительность циркуляции антигена — 70-80 дней. Резвое исчезновение HBsAg (в 1-ые деньки желтухи) с возникновением антиНВs — нехороший прогностический признак. При приобретенном гепатите ВHBsAg может циркулировать в крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого в протяжении почти всех лет. Необходимо подчеркнуть, что применяющиеся в истинное время способы определения HBsAg, в том числе ИФА, имеют порог чувствительности. Потому при наличии клинических признаков гепатита и отсутствии HBsAg в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) нужно изучить остальные маркеры инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV. Наличие HBsAg в крови (внутренней средой организма человека и животных) свидетельствует о присутствии вируса в печени и с большенный толикой вероятности в крови (внутренней средой организма человека и животных). Не всякая сыворотка, содержащая HВsAg, содержит вирус гепатита В. В ряде всевозможных случаев ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса встраивается в ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) гепатоцита не на сто процентов, а отчасти, лишь тем участком, который шифрует синтез HBsAg. В этих вариантах синтезируются HBsAg без остальных компонент вириона, (другими словами без остальных антигенов). Считают, что таковая ситуация возникает при «здоровом» носительстве HBsAg.HBeAg вируса гепатита В охарактеризовывает высшую инфекционность крови (внутренней средой организма человека и животных), являясь показателем активной репликации HBV. HBeAg циркулирует в крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого лишь в присутствии HBsAg. В первую недельку желтушного периода он выявляется у 85-95 % нездоровых. Выявление HBeAg в течение 2-ух и наиболее месяцев служит прогностическим признаком развития приобретенного гепатита. У большинства нездоровых приобретенным гепатитом с высочайшей активностью процесса HBeAg сохраняется на долгий срок (до нескольких лет).Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В класса M (анти-НВcIgM) — маркер активной репликации НВV и острой инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). Выявляются через 1-2 недельки опосля обнаружения HBsAg и сохраняются в протяжении 2-18 месяцев. У 4-20 % нездоровых острым гепатитом В анти-HBcIgM являются единственным маркером инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). При ХГ В анти-НВсIgM могут быть выявлены у неких нездоровых в наименьших титрах, чем при острой инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека), при этом титр антител отражает тяжесть гепатита. антитела к HBcAg класса G (анти-НВсIgG) возникают фактически сразу с анти-НВсIgM. Как првило, они остаются у всех лиц, переболевших гепатитом В, на всю жизнь. У 95 % носителей HBsAg вместе с HBsAg циркулируют и анти-НВсIgG. антитела к HBsAg (анти-НВs) свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) либо о наличии поствакцинального иммунитета (защитный уровень — 10 МЕ/мл). Они возникают в период излечения, через 4 недельки опосля исчезновения HBsAg, достигая наибольшей концентрации через 1-2 года, с следующим постепенным понижением уровня, труднодоступного выявлению современными способами диагностики. В неких вариантах анти-HВs могут циркулировать на всю жизнь. Возникновение анти-HBs на фоне клинического улучшения у хворого гепатитом В является неплохим прогностическим признаком. Принципиально отметить, что в динамике острой инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV имеется «окно», когда HBsAg уже не определяется, а анти-HBs еще не возникли. При всем этом выявляются анти-HBcIgM и IgG. Из этого следует вывод о необходимости обследования нездоровых ОВГ на анти-HBcIgM даже при отрицательных результатах исследования HBsAg и анти-НВs. антитела к HBeAg (анти-НВе) возникают в крови (внутренней средой организма человека и животных) опосля элиминации HBeAg и окончания репликации вируса. К концу 9-й недельки острого периода гепатита В наиболее 90 % нездоровых имеют анти-НВе. В период излечения анти-НВе могут исчезать. Но, наличие анти-НВе не является показателем отсутствия инфекционности определенной сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных). Показано, что у ряда нездоровых в процессе развития гепатита В (около 10%) под воздействием «иммунного давления» на вирус появляются мутантные формы, которые «избегают» иммунного надзора и не элиминируются. У носителей анти-HBe был выделен мутант, неспособный продуцировать HBeAg из-за изъянов в области precore и получивший обозначение HBeAg-отрицательного. Возникновение HBeAg-отрицательного мутанта приводит к прогрессированию поражения печени при продолжающейся репликации вируса (наличие ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных)). При первичном инфицировании HBeAg-отрицательным мутантом значительно увеличивается риск развития фульминантного гепатита. Описанные маркеры гепатита В исследуются способом ИФА. Диапазон антигенов (HBsAg, HBeAg) дозволяет установить диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) гепатита В и найти стадию работоспособности»> работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) (таблица 1). Недочетом данного способа является невозможность его использования при инфецировании мутантными формами вируса, при иммуносупрессии (нездоровые онкологическими болезнями, наркоманы и т.д.) и для количественной оценки присутствующего в организме возбудителя. Решение этих задач сделалось вероятным в итоге внедрения молекулярно-биологических способов в практику клинико-диагностических лабораторий.

Таблица 1. Разные сочетания серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В и их интерпретация

HBsAg

HBeAg

антиНВc IgM

антиНВ c сумм

антиНВе

антиНВs

HBV ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)

Трактовка результата

—

Острый гепатит В. Одичавший штамм

—

Острый гепатит В. Мутантный штамм

—

+/-

—

-/+

Разрешившийся острый гепатит В.Сероконверсия.

+/-

-/+

—

Приобретенный активный гепатит В

+/-

-/+

+/-

—

+/-

Приобретенный интегративный гепатит В

—

-/+

—

«Здоровое» носительство

—

-/+

—

Перенесенный вирусный гепатит В

—

состояние опосля иммунизации

Способы генодиагностики, к которым относится ПЦР, значительно расширяют способности лабораторной диагностики вирусного В, позволяя конкретно выявить возбудитель, установить тканевую и внутриклеточную локализацию HBV, выявить и охарактеризовать мутантные формы вируса, оценить уровень виремии в течение процесс.

В истинное время существует широкий диапазон исследовательских тест-систем для выявления ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в лабораторных критериях, основанных на способах ПЦР — компании «Roche», НПФ «Литех», «ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) разработка«, LCR (лигазная цепная реакция) — компания «Abbott», bDNA (способ «развлетвленных» ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) зондов) — компания «Chiron». Эти тест-системы разрешают проводить высококачественное определение наличия возбудителя в био материале: сыворотке либо плазме крови (внутренней средой организма человека и животных), ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) печени, мононуклеарах. Одним из вариантов высококачественного определения ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV является разработка ПЦР insitu (в гистологических срезах), позволяющая установить внутриклеточную локализацию вируса в гепатоцитах.

Единственная коммерческая тест-система дифференциальной диагностики НВеAg-отрицательного гепатита В сотворена компанией «Abbot» с внедрением LCR. Значимым недочетом данной нам системы является выявление лишь одной из почти всех мутаций, приводящих к отсутствию синтеза НВеAg вирусом. Выявление всей совокупы генетических конфигураций, соответствующих для НВеAg-отрицательных вирусов гепатита В, может быть пока лишь прямым секвенированием ПЦР-амплифицированных фрагментов вирусного генома.

Численная черта содержания ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в клинических образчиках принципиальна для оценки эффективности антивирусной для снятия либо устранения симптомов и проявлений терапии ( оздоровление»>терапия — процесс, для снятия или устранения симптомов и проявлений работоспособности»>заболевания) и имеет прогностическое значение для определения хронизации HBV. При начально низком уровне виремии (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV наименее 500 фг/мкл) процент хронизации острого гепатита В близок к нулю, при концентрации HBV ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) от 500 до 2000 фг/мклхронизация процесса наблюдается у 25-30% нездоровых, а при высочайшем уровне виремии у пациента (наиболее 2000 фг/мкл) острый гепатит В почаще всего перебегает в приобретенный.

Известные коммерческие тест-системы оценки концентрации ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV реализуют принцип конкурентноспособного ПЦР-анализа с следующей гибридизационной схемой определения товаров амплификации (компания «Roche», НПФ «Литех»). Этот подход основан на внесении в клинический эталон внутреннего эталона известной концентрации, отменно отличающегося от определяемой матрицы. Опосля ПЦР концентрация ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в исследуемом материале рассчитывается на основании известной концентрации внутреннего эталона и соотношения скопления товаров амплификации внутреннего эталона и определяемой матрицы.

В реальный момент развитие способов лабораторной диагностики гепатита В идет по направлению сотворения коммерческих тест-систем для идентификации клинически важных мутантных штаммов HBV, также использованию новейших оптических устройств (биосенсоров) для всеохватывающей диагностики инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV (вирусных белков, антител к ним и ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV)

Серодиагностика гепатита С

вирус гепатита С (hepatitis C virus, HCV) является РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) содержащим гепатотропным и лимфотропным вирусом, относящимся к семейству Flaviviridae. Геном вируса представлен одноцепочечной молекулой (+) РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) размером около 9500 оснований, кодирующей структурные и неструктурные белки.К структурным белкам относят белок сердцевины (кор) и гликопротеины оболочки (Е1 и Е2). Неструктурную область представляет комплекс белков с ферментативной активностью, сначала РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-зависимая — РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) полимераза. Кроме вирусных белков, снаружи вирион покрыт липидной оболочкой состоящей из липопротеинов организма владельца низкой плотности. До 1990 г. ХГ ни-А-ни-В с парентеральным методом передачи диагностировали на основании завышенной активности АЛТ сыворотки в течение 6 месяцев, при отсутствии остальных узнаваемых маркеров вирусных гепатитов. Но у части нездоровых ХГ С уровень АЛТ не увеличивается. В современной диагностике гепатита С главная роль отводится определению кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) HCV.

В отличие от гепатита В, при котором могут быть определены антигены вируса и антитела к ним, при гепатите С способом ИФА улавливаются лишь антитела. Антигены HCV, если и попадают в кровь (внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов), то в количествах, которые фактически не улавливаются. Они могут быть обнаружены лишь в ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) печени при использовании иммунногистохимических способов исследования. Это значительно ограничивает возможность оценки течения и активности заразного процесса.

Анти-HCV не свидетельствуют о продолжающейся репликации вируса, и могут являться признаком как текущей, так и перенесенной инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). Приходится также учесть, что у реципиентов, которым была перелита инфицированная образованная водянистой соединительной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов), могут обнаруживаться анти-HCV донора, не непременно свидетельствующие о инфецировании HCV. У нездоровых ХГ С анти-HCV обнаруживаются в крови (внутренней средой организма человека и животных) не только лишь в вольной форме, да и в составе циркулирующих иммунных комплексов. антитела образуются к любому из вирусных белков, расположенных в структурной и неструктурной области вирусного генома. Сиим определяется их разная специфика и, соответственно, различная диагностическая информативность. Для скрининга гепатита С употребляют способ ИФА, а в качестве подтверждающего теста — способ иммунноблота (RIBA). Существует несколько поколений исследовательских тест-систем для выявления анти-HCV, различающихся собственной чувствительностью и спецификой (таблица 2).

Таблица 2. Сопоставление различных поколений исследовательских иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВГС.

тест-система

Шифр фрагментов

Белок, содержащий данный фрагмент

Эффективность

1 поколение

С100-3

NS3 и NS4

до 82,2%

2 поколение

С100-3, С22, С33с

NS4, кор, NS3

до 97,5%

3 поколение

С100-3, С22, С33с, NS5

NS4, кор, NS3, NS5

до 99,7%

4 поколение*

С100-3, С22, С33с, NS5

NS4, кор, NS3, NS5

до 99,7%

RIBA-3

С100-3, С22, С33с, NS5, e1, e2

NS4, кор, NS3, NS5, E1, E2

до 99,6%

*тест-системы 4-го поколения содержат синтетические и рекомбинантные вирусные антигены, размеры которых могут различаться от фрагментов 3-го поколения.

В заключении следует упомянуть о необходимости всеохватывающего обследования хворого с привлечением новейших достижений мед и био науки для правильной диагностики вирусных гепатитов и предназначения адекватной процесс нездоровому.[2,4,7,21]

Биохимический анализ крови (внутренней средой организма человека и животных)

Биохимический анализ крови (внутренней средой организма человека и животных) пациентов издавна вошел в практику клинических лабораторий. совокупа получаемых данных о показателях обмена биллирубина, сывороточных белках и ферментах разрешают найти воспалительные процессы, происходящие в организме человека и представить их локализацию. Эти аспекты не специфичны и не охарактеризовывают этиологию вирусных гепатитов, совместно с тем существенны для оценки многофункционального состояния печени.

характеристики обмена билирубина.

Оценить у пациента состояние обмена билирубина можно на основании биохимического анализа крови (внутренней средой организма человека и животных), мочи и кала. Вольный билирубин является производной гемоглобина, высвобождающегося в процессе гемолиза эритроцитов. В физиологических критериях любые день гемолизируется приблизительно 1% циркулирующих эритроцитов, из которых появляется 200-250 мг билирубина. Основная часть билирубина поступает в кровяное русло из клеток системы мононуклеарных фагоцитов селезенки и костного мозга (центральный отдел нервной системы животных и человека). Билирубин нерастворим в воде, потому в крови (внутренней средой организма человека и животных) его перенос производят неспецифические транспортные белки — альбумины. Вольный билирубин является ядовитым соединением, способным просачиваться через гемато-энцефалический барьер, вызывая энцефалопатии. Детоксикация билирубина происходит в клеточках печени, где к нему присоединяется глюкуроновая кислота, образуя глюкурониды билирубина. Эти соединения уже не токсичны и водорастворимы, что упрощает их выведение из организма в составе желчи. В кишечном тракте под действием бактериальных ферментов образуются две группы товаров распада билирубина — уробилиногены и стеркобилиногены, основная часть которых выводится с калом. В обычных физиологических критериях почки в выведении билирубина не участвуют. Билирубин в крови (внутренней средой организма человека и животных) здорового человека содержится в концентрации 1,7 — 17,1 мкмоль/л и представлен 2-мя фракциями: нерастворимый билирубин, связанный с альбумином — непрямой билирубин, и растворимые глюкорониды билирубина — прямой билирубин. В норме их соотношение составляет 3:1. При гепатитах повреждаются клеточки печени и, вследствие этого, понижается продукция желчи. Не считая того, в итоге повреждения паренхимы печени желчь поступает не только лишь в желчные канальцы, да и в образованная водянистой соединительной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»> образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>кровь (внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов). Эти процессы приводят к повышению общего билирубина крови (внутренней средой организма человека и животных) за счет обоих его фракций. Отмечено, что уже в конце преджелтушного периода у части нездоровых на фоне обычного общего билирубина начинает расти фракция прямого билирубина, что является ранешным показателем цитолитических действий в печени. В моче начинают выявляться билирубин и уробилины, а концентрация стеркобилина в кале резко понижается (таблица 3).

Таблица 3. Соотношение характеристик обмена билирубина в норме и при развитии печеночной желтухи.

характеристики

Обычные значения

Печеночная желтуха

Общий билирубин сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных)

1,7 — 17,1 мкмоль/л

Существенное увеличение

Прямой билирубин сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных)

до 3,4 мкмоль/л

Увеличение

Непрямой билирубин сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных)

1,7 — 12,7мкмоль/л

Увеличение

Реакция мочи на билирубин и уробилин

Отрицательная

Положительная

Реакция кала на стеркобилин

Положительная

Отрицательная

Необходимо подчеркнуть, что характеристики обмена билирубина для диагностики вирусного гепатита играют роль лишь при развитии желтухи. Безжелтушная форма и преджелтушная фаза вирусных гепатитов в собственном большинстве остаются нераспознанными.

Оценка активности ферментов.

Определение активности аминотрансфераз сыворотки (аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ)) является высокочувствительным показателем цитолиза гепатоцитов, что описывает ее ведомую роль в диагностике гепатитов различной этиологии. При цитолитическом процессе, развивающимся в печени хворого вирусным гепатитом, преобладает «вымывание» АЛТ, степень увеличения АСТ значительно меньше (таблица 4).

Таблица 4. Определение активности ферментов в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных)

Фермент

Обычные* значения

Значения при гепатитах

Специфика для гепатоцитов

Аланинаминотрансфераза (АлАТ)

до 40 Ед/л

повышение

—

Аспартатаминотрансфераза (АсАТ)

до 40 Ед/л

повышение

—

Сорбитдегидрогеназа (СДГ)

до 17 Ед/л

повышение

Фруктозо-1-фосфатальдолаза (Ф1ФА)

до 1 ЕД

повышение

Урокиназа

до 1ЕД

повышение

Щелочная фосфатаза (ШФ)

31-115 Ед/л детки: до 350 Е/л

повышение

—

* значения приведены в согласовании с советами исследовательских тест-систем, применяемых в КДЛ НПФ «Литех»

Для доп доказательства гепатогенной природы ферментемии можно найти активность печеночно-специфических ферментов — сорбитдегидрогеназы, фруктозо-1-фосфатальдолазы, урокиназы и др. Они локализуются в большей степени в гепатоцитах и их выявление в крови (внутренней средой организма человека и животных) совершенно точно соединено с патологией печени. Вкупе с тем, эти испытания уступают по чувствительности определению активности АЛТ. Активность АЛТ и АСТ отражает выраженность воспаления в печени, но не этиологию гепатита.

Белковые пробы

При острых вирусных гепатитах общее содержание белков плазмы крови (внутренней средой организма человека и животных) и их состав фактически не меняются. Исключение представляет тимоловая проба, в норме имеющая значения до 4 ЕД и растущая до 6-8 ЕД при гепатитах.

При ХГ на стадии ЦП могут наблюдаться уменьшение концентрации альбумина в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных), понижение протромбинового индекса (наименее 70%), уменьшение концентрации остальных причин свертывания крови (внутренней средой организма человека и животных) в рамках синдрома печеночно-клеточной дефицитности. Доп показателями активности гепатита являются убыстрение СОЭ (і15 мм/ч), увеличение концентрации гамма-глобулинов сыворотки.[10,16,19]

определения лактатдегидрогеназы.

Принцип способа:

Измененный способ в согласовании с советами Скандинавского Комитета по Ферментам (СКФ).

ЛДГ

Пируват + НАДН + Н+ ? Лактат + НАД+

Состав набора:

1. Буферный раствор:

ТRIS-буфер (рН 7,4) 50ммоль/л

Пируват 1,5ммоль/л

2. Субстратный раствор:

НАДН 0,8ммоль/л

Подготовка и стабильность реагентов

способ работы с персональными реагентами. Реагенты готовы к применению. Реагенты, даже опосля вскрытия флаконов, могут сохраняться при 2-8 С до обозначенного срока годности. Буферный раствор нужно хранить в защищённом от света месте. Следует избегать загрязнения реагентов!

Способ работы с рабочим реагентом. Для изготовления рабочего реагента следует: Осторожно — смешать реагент 1 (Буферный раствор) и 2 (Субстрат) в соотношении 4:1 Рабочий реагент можно хранить в течение 3 недель при 2-80С либо 3 денька — при 15-25С. Рабочий реагент следует хранить в защищённом от света месте.

Исследуемый материал:

Сыворотка, гепарин- либо ЭДТА-плазма.

Не применять гемолизированные пробы!

Падение активности в течение 3 дней

при 2-8С — 8%, при 15-25°C — 2%.

Схема проведения анализа:

Длина волны: Hg 334 им, 340 нм, Hg 365 нм

Длина оптического пути: 1 см

температура: 25С, 30С либо 37С

Измерение: относительно воздуха (уменьшение поглощения). Реагенты и кюветы прогреть до нужной температуры. Температуру в течение анализа поддерживать неизменной (±О.5С).

Схема пипетирования *

Таблица 5 способ работы с персональными реагентами

В кюветы пипетировать

25С, 30С

37С

Проба

20мкл

10мкл

Буферный раствор

1000мкл

Перемешать, инкубировать 1-5 минут при нужной температуре

Субстрат

250мкл

Перемешать, через 1минуту измерить поглощение и сразу включить секундомер. Буквально через 1,2,3 мин повторить измерение.

Таблица 6 способ работы с рабочим реагентом

В кюветы пипетировать

25С, 30С

37С

Проба

20мкл

10мкл

Рабочий раствор

1000мкл

* При использовании микрокювет объемы можно уменьшить в два раза

Расчёт

Высчитать среднюю величину конфигурации поглощения за минуту (*А/мин) и её подставить в формулу:

Активность ЛДГ (Ед/л) = *А/мнн Х F Использовать последующие причины:

Таблица 7 способ работы с персональными реагентами:

Значение фактора F

Hg334нм

340нм

Hg 365нм

F(25С, 30С)

10275

10080

18675

F (37С)

20390

2000

37060

Таблица 8 способ работы с рабочим реагентом:

Значение фактора F

Hg334нм

340нм

Hg 365нм

F(25С, 30С)

8250

8095

15000

F (37С)

16345

16030

29705

Фактор пересчета результатов, выраженных в классической системе единиц (Ед/л), в Международную систему единиц (кат/л):

1 Ед/л =16,67х10-3 мккат/л, 1 мккат/л=60 Ед/.

Эксплуатационная черта

Линейность: Если изменение адсорбции за минуту составляет *A/min=0,150 при Hg 334 нм, 340 нм либо 0,070 при Hg 365 нм, нужно 100 мкл пробы смешать с 900 мкл физ. раствора (0,9% NaCl) и повторить определение. Приобретенный итог помножить на 10.

Таблица 9 Спектр референтных величин

температура

25С,Ед/л

30С,Ед/л

37С,Ед/л

Взрослые

120-140

160-320

225-450

Малыши (до года)

До 500

Определения аланинаминотрансферазы

Кинетический способ.

Кат №~ 001.017.01 Ферментный реагент 1* 80мл

Субстратный раствор 1*20мл

Kaт №~ 001.017.10 Ферментный реагент 1* 800мл

Субстратный раствор 2*100мл

Kaт № 001.017.11 Ферментный реагент 4* 80мл

Субстратный раствор 2*40мл

Принцип способа

Измененный, оптимизированный кинетический способ в согласовании с советами Интернациональной Федерации Медицинской Химии (IFCC), без активации пиридоксальфосфатом:

АЛАТ

2-0ксоглутарат + L-Аланин ~ L-Глутамат + Пируват

ЛДГ

Пируват + НАДН +Н+ —- L -Лактат + НАД+

Состав набора

1. Ферментный реагент:

ТРИС-буфер (рН 7,5) 150 ммоль/л

L -Алании 750 ммоль/л

ЛДГ ?1,2 кЕд/л

2. Субстратный раствор:

2-0ксоглугарат 90 ммоль/л

НАДН 0,9 ммоль/л

Подготовка и стабильность реагентов

При работе с персональными реагентами: Реагенты готовы к использованию и устойчивы, даже опосля вскрытия флаконов, до обозначенного срока годности при хранении при-2 — 8 С в защищенном от света месте. Следует избегать загрязнения реагентов.

При работе с рабочим реагентом для изготовления рабочего реагента следует:

Осторожно смешать реагент 1 (Ферментный) и 2 (Субстрат) в соотношении 4:1 Рабочий реагент можно хранить в течение 4-х недель при 2-80С и 5 дней при 15-250С.

Исследуемый материал:

Сыворотка, ЭДТА- либо гепарин-плазма. Гемолиз мешает проведению анализа! Утрата активности в течение 3 дней при 4°С: <10%, при 20-250С: <17%

Схема проведения анализа

Длина волны: 340нм либо Hg 334 нм, 365 нм

длина оптического пути: 1 см

температура измерения: 25°С, 30°С, 37С

Измерение: против воздуха (понижение поглощения). Перед измерением реагенты и кюветы прогреть до нужной температуры и в течение измерения Поддерживать температуру неизменной

(± 0,50С).

Схема пипетирования*

Таблица 10 способ работы с персональными реагентами

В кюветы пипетировать

25С, 30С

37С

Проба

200мкл

100мкл

Ферментный реагент

1000мкл

Перемешать, инкубировать 5 минут при нужной температуре

Субстрат

250мкл

Таблица 11 способ работы с рабочим реагентом

В кюветы пипетировать

25С, 30С

37С

Проба

200мкл

100мкл

Рабочий раствор

1000мкл

*Полумикрометод; для макрометода объемы удвоить

Расчет

Высчитать среднюю величину конфигурации поглощения за 1минуту (А/мин) и применять ее в расчете:

Активность АлаТ (ед/л) = А/мин х

При изменении поглощения за минуту (А/мин) 0,06-0,08 (Hg 365нм) либо 0,12-0,16 (Hg 334нм и 340нм) следует принимать во внимание результаты измерения лишь в 1-ые 2 минутки (1 мин инкубировать и 2мин определять). Использовать последующие значения фактора F/

Таблица 12 Способ работы с персональными реагентами:

Hg334нм

340нм

Hg 365нм

F(25С, 30С)

1173

1151

2132

F (37С)

2184

2143

3971

Таблица 13 способ работы с рабочим реагентом:

Значение фактора F

Hg334нм

340нм

Hg 365нм

F(25С, 30С)

971

952

1765

F (37С)

1780

1745

3235

1Ед/л = 16,67 х 10-3 мккат/л

1 мккат/л = 60 Ед/л

Таблица 14 Эксплуатационная черта

А/мин

25С, 30С

37С

Hg 365нм

0,080

170 Ед/л

320 Ед/л

Hg334нм/340нм

0,160

190Ед/л

350Ед/л

При таковой активности /поглощении либо выше нужно 0.1 мл пробы смешать с 0,9 мл раствора NaCl (0,9%) и повторить определение, а итог помножить на 10. Высокоактивные сыворотки могут демонстрировать очени низкие величины исходного поглощения, потому что большая часть НАДН будет израсходована до начала измерения. В этом случае нужно провести разведения, как описано выше.

Таблица 15 Спектр референтных величин

25С

30С

37С

Мужчины

До 22 Ед/л

До 30 Ед/л

До 42 ЕД/л

Дамы

До 17 Ед/л

До 23 Ед/л

До 32 Ед/л

Контроль свойства

Допускается внедрение контрольных сывороток, активность АлаТ в каких определена (аттестована) данным способом.

Примечание

Ферментный реагент и субстрат содержат азид натрия (0,095%). Следует избегать их контакта с кожей и слизистыми оболочками!

определение аспартатаминотрансферазы

кинетический способ

Принцип способа: основан на последовательности ферментативных реакций:

L — аспартат+ 2 — оксоглутарат АЛТ ~ глутамат + оксалоацетат оксалоацетат + НАДН+ Н лдг ~ лактат + НАД +

Скорость уменьшения концентрации НАДН, который имеет максимум поглощения при 340 нм, пропорциональна активности АЛТ и измеряется фотометрически.

методика анализа:

Набор реагентов предназначен для ручного определения и для определения на автоматических и автоматических анализаторах.

Ручное определение:

Длина волны 340 им, температура измерений 37 С.

В кювету помещают 500 мкл рабочего реагента, прогревают 5 минут, потом добавляют 50 мкл исследуемого материала и перемешивают.

Инкубируют 1 мин при 37 С, определяют оптическую плотность раствора по отношению к воздуху либо воде. Буквально через 2 минутки повторяют измерение, вычисляют среднее изменение оптической плотности за 1 мин. (~А/мин)

]]>

Перейти и растаять в своей любимой социалке

Учебная работа. Биохимические маркеры развития парентеральных вирусных гепатитов

Учебная работа. Биохимические маркеры развития парентеральных вирусных гепатитов

Как? Вы еще не читали? Ну это зря...