Учебная работа. Анализ в кабинете врача и на дому

Учебная работа. Анализ в кабинете врача и на дому

анализ в кабинете доктора и на дому

Введение

Более принципиальной тенденцией, в диагностической медицине за крайние 10 лет, по-видимому, является уменьшение толики анализов, проводимых в центральных клинических лабораториях. Все большая часть исследовательских анализов в истинное время производится либо во вспомогательных лабораториях, либо в кабинете доктора, также просто на дому.

Эти конфигурации обоснованы несколькими факторами. Технические новаторства дозволили упростить и убыстрить проведение анализов при одновременном увеличении надежности и легкости интерпретации приобретенных результатов. Не считая того, есть и экономические предпосылки децентрализации диагностики. к примеру, в США (Соединённые Штаты Америки — программка провоцирует проведение обследования пациента в маленьких клиниках и кабинетах докторов. Не считая того, так как эта программка предугадывает полностью разумную оплату за выполняемые на месте диагностические анализы, то лаборатория в кабинете доктора становится возможным источником доходов. В то же время современные технические заслуги разрешают внедрять способы анализа в кабинете доктора без значимых издержек на приобретение оборудования и обучение (педагогический процесс, в результате которого учащиеся под руководством учителя овладевают знаниями, умениями и навыками) персонала.

Рост количества анализов, выполняемых конкретно на дому, обоснован в большенный мере желанием строже смотреть за своим здоровьем. Повсевременно усиливается тенденция к пониманию значимости задачи здоровья, в особенности в тех вариантах, когда потенциальные работоспособности»> работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) соединены с образом жизни. Экономические тенденции также содействуют развитию производства аналитических систем для самодиагноза. к примеру, желание почти всех работающих дам повременить с рождением малыша, непременно, провоцирует Энтузиазм к тестам для пророчества овуляции и ранешнего обнаружения беременности. Рынок наборов для анализов на дому, который 10 лет вспять в главном был ограничен выпуском диагностикумов для контроля за диабетом, в наиблежайшее десятилетие в валютном выражении составит около 1-го млрд баксов.

Самодиагностику и диагностику в кабинете доктора можно условно подразделить на три главные группы в согласовании с определяемыми симптомами (симптом — одна отдельная конкретная жалоба больного) либо заболеваниями. 1-ая группа включает контроль за приобретенными болезнями. Ко 2-ой группе относятся испытания для диагностики симптоматических болезней либо состояний, к примеру беременности либо ангины. В третью группу входят испытания для определения асимптоматических состояний, таковых, как рак либо овуляция. В почти всех из этих тестов используются способы иммуноанализа, в то время как для определения, к примеру, глюкозы употребляют остальные способы.

Почти все анализы производятся и в лабораториях при кабинете доктора, и на дому; нередко они основаны на одних и тех же либо весьма близких способах. Как правило, но, аналитические системы, для самодиагноза не предусмотрены для оценки критерий, связанных с угрозой для жизни человека. Исключение составляет определение глюкозы в крови (внутренней средой организма человека и животных) нездоровых диабетом, когда приобретенные результаты могут употребляться в инсулиновой для снятия либо устранения симптомов и проявлений терапии (случае самодиагноза для получения проб, как правило, употребляются неинвазивные способы, т.е. отбор проб мочи либо фекалий. Моча почаще всего употребляется в домашних диагностикумах. И опять исключение составляет контроль глюкозы у нездоровых диабетом, где проба крови (внутренней средой организма человека и животных) отбирается из пальца при помощи укола. Напротив, в лабораториях при кабинете доктора для отбора проб крови (внутренней средой организма человека и животных) из вены, ректальных, генитальных либо горловых мазков могут быть применены разные инвазивные способы.

Связанные с отбором проб ограничения непременно сказываются на диапазоне анализов, осуществляемых при помощи домашних аналитических систем. Обычно не представляет задачи вынудить себя проколоть палец для отбора пробы крови (внутренней средой организма человека и животных), но весьма немногие из нездоровых сумеют для себя создать ректальный либо уретральный мазок. Не считая того, так как результаты анализа на некие заразные работоспособности»> работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) в весьма большенный степени зависят от корректности выполнения процедуры отбора пробы, то выполнение данной процедуры недозволено доверять даже самым храбрым клиентам.

1. Методология

Децентрализация лабораторных анализов привела к разработке новейших способов, более много соответственных новеньким условиям выполнения анализов. На примере 1-го старенького и 3-х новейших способов проиллюстрируем ниже главные тенденции развития данной области иммуноанализа.

1.1 Агглютинация

Реакция агглютинации, т.е. сшивание антиген-сенсибилизированных клеток либо частичек при помощи соответственных определения как антигена, так и антитела зависимо от того, какой реагент связывается с жесткой фазой. Известен прямой и конкурентноспособный варианты реакции.

Большая часть домашних аналитических систем для обнаружения беременности основано на ингибировании реакции гемагглютинации. В таковых тестах соединяют эритроциты, сенсибилизированные hCG, специальные антитела и пробу мочи, в какой нужно найти hCG. При наличии в пробе hCG неаттлютинирующие клеточки скатываются по стенам пробирки вниз и образуют на деньке красноватое кольцо. При отрицательном итоге клеточки за счет агглютинации остаются в суспензии.

Агглютинационные испытания весьма отлично подступают как для самодиагноза, так и для лабораторий при кабинете доктора, так как они весьма ординарны и не требуют никакого оборудования. Но по чувствительности они очень уступают иммуноферментным способам анализа, потому что в их сигнал не усиливается. К тому же интерпретация приобретенных данных достаточно лична, а сами агглютинационные испытания подвержены случайным механическим действиям, сотрясениям, которые могут разрушать образующиеся структуры и приводить к неверным результатам. Не считая того, при наличии в пробе ревматоидного фактора либо молекул типа белка А вероятна неспецифическая агглютинация. Подобные белку А вещества более небезопасны при диагностике заразных болезней, так как они имеются на поверхности почти всех обыденных микробов.

Иммунофильтрация. Под иммунофильтрацией соображают определение вещества способом иммуноанализа опосля его выделения из пробы фильтрацией через полупроницаемую мембрану. В более ординарном варианте антиген удерживается мембраной неспецифически, лишь благодаря определенному размеру ее пор. Дальше его определяют при помощи конъюгата фермент — антитело. Этот способ применен для определения ассоциатов вирусов с клеточками, но он не применим к растворимым антигенам либо вольным вирусам. В этом случае нужный антиген специфично связывают с антителами на мембране.

Принцип иммунофильтрации применен в наборе Icon™ для определения hCG. Набор включает полипропиленовый цилиндр с найлоновой мембраной, в центре которой иммобилизованы антитела. Мембрана лежит на диске из пористого целофана. Снутри цилиндр заполнен адсорбентом, к примеру ацетатом целлюлозы. Поначалу мембрану смачивают буферным веществом. Потом наносят пробу, которая проходит через мембрану и улавливается адсорбентом. Присутствующий в пробе hCG связывается с иммобилизованными антителами; его обнаруживают добавлением конъюгата фермент — антитело. Опосля отмывки излишка конъюгата добавляют раствор субстрата; при наличии в пробе антигена наблюдается цветная реакция. При положительном итоге анализа в центре мембраны возникает голубое пятно.

По сопоставлению с пассивной сорбцией на жесткой фазе в иммунофильтрации связывание антигена с антителом ускоряется приблизительно в 10 раз и кинетика действий практически не различается от кинетики реакций в смесях. к примеру, если определение hCG с чувствительностью 50 ед./л по ингибированию агглютинации занимает около 1 ч, то при помощи набора Icon™ это время сокращается до 5 мин. чувствительность аналитических систем, основанных на принципе иммунофильтрации, зависит от размера наносимой пробы, времени инкубации с коныогатом и субстратом. На чувствительность не влияет концентрация конъюгата, так как он берется в большенном излишке по отношению к определяемому веществу.

Для обеспечения специфики в анализе употребляют два типа моноклональных антитела к альфа-субъединице, то на мембране не считая hCG также будут специфично сорбироваться остальные гормоны, альфа-субъединицы которых дают перекрестную реакцию с альфа-субъединицей hCG. В этом случае специфика определения hCG не поменяется, но благодаря «хук» — эффекту может оказаться заниженной. Это явление обосновано тем, что при больших концентрациях остальные гормоны могут конкурентно занимать активные центры антитела против бета-субъединицы иммобилизовать на мембране, а антитела против альфа-субъединицы конъюгировать с’ ферментом.

В литературе описано несколько остальных вариантов способа иммунофильтрации. В одном из их антитела иммобилизуют не конкретно на мембране, а на гранулках, расположенных на поверхности либо снутри мембраны (рис. 3). Гранулки с иммобилизованными антителами могут быть помещены на фильтр заблаговременно либо конкретно перед проведением анализа. Преимуществом крайнего варианта является возможность смешивания и подбора разных реагентов и фильтров.

Иным преимуществом способа иммунофильтрации является простота положительного контроля. Контроль быть может зависимым либо независящим от определяемого вещества. В первом случае hCG просто иммобилизуют на определенном участке мембраны для регистрации положительной активности конъюгата. Во 2-м случае на каком-либо участке мембраны иммобилизуют антитела против фермента, с которым конъюгированы 2-ые антитела к определяемому веществу; тут связывание фермента с этими антителами не обязано влиять на его активность. Преимуществом положительного контроля, не зависящего от определяемого вещества, является возможность подбора таковых определения hCG. В ее состав входят два эталона и считыватель Icon.

1.2 Ферментативная иммунохроматография

Ферментативная иммунохроматография также потенциально может обширно применяться для диагностики на дому и в кабинете доктора. Этот способ предназначен для определения гаптенов, которые в истинное время в главном определяют при помощи конкурентных способов иммуноанализа. Ферментативная иммунохроматография припоминает иммуноанализ с ферментативным усилением, но меж ними есть и значительные отличия.

В способах типа EMIT гаптен и конъюгатгаптен — фермент соперничают меж собой за ограниченное количество антител против определяемого соединения. Связывание конъюгата с антителом приводит к изменению ферментативной активности. В общем случае вольный конъюгат активен, а в комплексе с антителом неактивен. Таковым образом, чем больше определяемого соединения находится в образчике, тем большая толика конъюгата остается несвязанной и тем наиболее высочайшей будет ферментативная активность.

В ферментативной иммунохроматографии также употребляются конъюгат фермента с определяемым веществом и специальные антитела против крайнего. Но в отличие от EMIT тут определение не соединено с конфигурацией активности конъюгата в комплексе с антителом. Принцип способа ферментативной иммунохроматографии представлен на рис. 6.4. Определенный размер пробы соединяют с веществом, содержащим конъюгат фермент — гаптен и соответственный ферментный реагент. В рассматриваемом примере сопряженным ферментом является пероксидаза из корней хрена, а ферментным реагентом — глюкозооксидаза. Глюкозооксидаза при окислении глюкозы генерирует пероксид водорода — субстрат пероксидазы, в итоге чего же отпадает необходимость включать в состав наборов нестабильные пероксидные реагенты. Сухую полоску фильтровальной бумаги с иммобилизованными на ней антителами против определяемого вещества помещают в раствор пробы и остальных реагентов. Реагирующие вещества под действием капиллярных сил поднимаются по полоске ввысь. Глюкозооксидаза распределяется по длине полосы умеренно, а высота подъема определяемого вещества и конъюгата зависит от их относительных концентраций. Опосля инкубации в течение нескольких минут полоску переносят в проявляющий раствор, состоящий из глюкозы и хромогенного индикатора. В процессе ферментативной реакции появляется окрашенная зона, высота которой пропорциональна концентрации определяемого вещества в пробе. Как следует, тут конъюгат употребляется лишь в качестве маркера для определения длины пробега определяемого вещества по полоске, а активность фермента при связывании конъюгата с антителом не меняется.

Для определения теофиллина при помощи ферментативной иммунохроматографии требуется около 15 мин. чувствительность, специфика и точность анализа сравнимы с надлежащими чертами способа EMIT. Для проведения анализа не требуется никаких устройств, окрашенная полоса размеренна в течение года при хранении в мгле. Способ можно использовать для анализа проб крови (внутренней средой организма человека и животных), если к первому раствору добавить агент, агглютинирующий эритроциты, к примеру антисыворотку барана. По сей день положительный контроль в таковых аналитических системах не применялся.

1.3 Иммуноанализ с самоудерживанием

Для диагностики на дому и в кабинете доктора применяется также так именуемый иммуноанализ с самоудерживанием. Как и в иммунофильтрации, в нем использованные воды остаются в устройстве для анализа, но в отличие от крайнего в ИАСУ нет необходимости в бессчетных стадиях прибавления реагентов и промывки. Принцип ИАСУ, разрабатываемый компанией Biotope Inc. под торговой маркой BioMAT-EIA™, представлен на рис. 6.5. Основой этого способа являются несмешивающиеся смеси реагентов, расположенные слоями и обеспечивающие последовательное проведение реакций и отделение связанных реагентов от несвязанных in situ. Описана также модификация BioMAT™ с внедрением радиоиммуноанализа.

В обычном гетерогенном анализе самый верхний слой содержит связанные с антителами гранулки, за ранее смешанные с ферментным конъюгатом. Гранулки поперечником несколько микрометров разрешают существенно убыстрить реакцию антиген — антитело по сопоставлению с трубками либо гранулками огромных размеров. Реакцию начинают, вводя пробу в анализатор через самоуплотняющуюся мембрану. Опосля инкубации для обеспечения специфичного связывания анализатор недолго центрифугируют, заставляя гранулки пройти через не смешивающийся с водой слой. На данной стадии от гранул отделяется несвязавшийся конъюгат. Дальше гранулки попадают в нижний слой, содержащий проявляющий для данной ферментной метки раствор. Возникновение цвета наблюдается лишь в нижней части пробирки. Интенсивность расцветки можно оценить зрительно либо при помощи специального колориметра. Стадия центрифугирования занимает не наиболее 1 мин, а все нужные для анализа реагенты находятся уже в пробирке. В анализатор добавляют лишь изучаемую пробу. В принципе вероятен и внутренний контроль, если в анализатор ввести гранулки, с которыми соединено определяемое вещество, при этом плотность этих гранул обязана различаться от плотности гранул с антителами. Тогда опосля центрифугирования на иной высоте покажется еще одна окрашенная полоса.

Если центрифугирование по любым причинам не нужно, то для разделения можно применять намагниченные гранулки и магнитное поле. способ BioMAT можно адаптировать и для остальных, наиболее чувствительных, систем обнаружения, к примеру методом измерения флуоресценции с временным разрешением. В способе BioMAT-FIA™ антитела могут содержать лантанидные метки, которые опосля связывания с определенными хелатирующими агентами флуоресцируют особенно длительное время. Таковым образом, можно подавить воздействие своей флуоресценции пробы. Но наивысшую интенсивность флуоресценции лантанидные комплексы проявляют в неводном окружении, потому в обыденных способах вводят доп стадию перевода пробы в неводную среду. Эта операция в BioMAT-FIA™ исключается за счет использования экстракционных материалов в гидрофобном слое анализатора.

2. Перспективы и тенденции развития

2.1 Улучшение методологии

На примере обрисованных выше подходов и способов можно выделить ряд причин, существенных для предстоящего развития аналитических систем для самодиагноза и анализов в кабинете доктора. Эти системы должны включать внутренний контроль, давать просто интерпретируемые результаты, не добиваться четкого пробоотбора и серьезного контроля по времени.

Для таковых систем внутренний контроль в особенности важен, так как тут невозможны контроль свойства анализов и особые проверочные схемы. Внутренний контроль обеспечивает пользователю как надежность результата анализа, так и данные о сохранности реагентов.

В неких вариантах, к примеру при диагностике беременности либо заразных болезней, довольно высококачественного результата. В наборах Test Pack™ конторы Abbot на hCG и стрептококки группы А символ «плюс» соответствует хорошему результату, а символ «минус» — плохому результату. Отсутствие какого-нибудь знака свидетельствует о неверном проведении анализа.

В истинное время интенсивно разрабатываются аналитические системы, не требующие четкой дозы реагентов. Приспособление для отбора проб в наборе BioMAT™, позволяющее делать количественное определение, по-видимому, является более броским примером данной тенденции. В остальных аналитических системах, в каких применим высококачественный либо полуколичественный итог, для дозы реагентов употребляются флаконы-капельницы и некалиброванные пипетки.

Независимость конечного результата от продолжительности отдельных операций в особенности принципиальна в кабинете доктора, так как обслуживающий персонал может делать несколько функций и для него тяжело буквально выдерживать время каждой операции. Беря во внимание этот фактор, КомпанияBiofope разработала измененный вари-‘ ант анализатора BioMAT™, в каком продолжительность операций инкубации и промывки находится под термоконтролем. Материал промывочного слоя в этом анализаторе жесткий при комнатной температуре, но плавится при нагревании до 37°С и таковым образом открывает доступ к плотным гранулкам. Такие фазовые конфигурации разрешают заавтоматизировать стадии инкубации, промывки и цветной реакции, при этом необходимость в переносе каких-то частей системы либо водянистой фазы отпадает, а время операций определения регулируется самой аналитической системой.

2.2 Этические задачи

Предстоящее развитие самодиагноза и отклонении в состоянии здоровья обследуемого либо о причине погибели»> отклонении в состоянии здоровья обследуемого или о причине смерти»>диагноза (краткое медицинское заключение об имеющемся заболевании (травме), отклонении в состоянии здоровья обследуемого или о причине смерти) в кабинете доктора соединено с решением бессчетных вопросцев этики и сохранности. лица, не имеющие специальной подготовки, могут безоглядно положиться на результаты применяемых ими наборов для самодиагноза in vitro. При всем этом неверный плохой результат приведет к тому, что нездоровой не получит впору соответственной квалифицированной мед помощи. Неверный хороший результат может оказать воздействие на психическое состояние пациента. Таковым образом, наборы для самодиагноза не избавляют принципных различий меж самотестированием и самодиагностикой.

Возрастает ответственность и докторов, которые на основании результатов анализа при помощи собственных аналитических систем выбирают тот либо другой путь исцеления хворого. Ранее, если нездоровому был нанесен вред в итоге неверного анализа, ответственность возлагалась на лабораторию, в какой этот анализ был выполнен.

Развитие рынка аналитических систем для на дому в ближнем будущем, по-видимому, будет находиться под все наиболее серьезным контролем. В США (Соединённые Штаты Америки — in vitro, созданные для внедрения на дому и в кабинете доктора, как, вообщем, и все остальные наборы, должны получить разрешение Управления по контролю за качеством пищевых товаров, медикаментов и косметических средств. Не считая того, в регулировании реализации и внедрения этих аналитических систем огромную роль играют остальные проф организации, группы по защите интересов потребителей и, может быть, даже сами фирмы-производители. Не так давно на заседании Американской лекарственной ассоциации была рассмотрена резолюция, призывающая к распространению домашних наборов для самодиагноза in vitro лишь через аптеки. Резолюция была отклонена в главном из-за неких неоднозначностей в терминологии. К наборам для отклонении в состоянии здоровья обследуемого либо о причине погибели»> отклонении в состоянии здоровья обследуемого или о причине смерти»>диагноза (краткое медицинское заключение об имеющемся заболевании (травме), отклонении в состоянии здоровья обследуемого или о причине смерти) in vitro можно отнести разные устройства, к примеру указатель температуры, на который действие резолюции не обязано распространяться. Тем не наименее, по последней мере одна большая компания решила распространять выпускаемые наборы для in vitro лишь через так именуемые ответственные центры, т.е. магазины, специализирующиеся на продаже предметов мед предназначения, персонал которых поможет пользователю грамотно избрать и применять нужные наборы.

В истинное время дискутируется вопросец о способности широкого распространения аналитических систем для заразных болезней на дому и в кабинете доктора. Высказывалось Мировоззрение о цел ее образности наборов для самодиагноза венерических болезней, но создатели данной статьи считают, что диагностирование таковых болезней обязано осуществляться в поликлинике либо специальной лаборатории. Из-за отсутствия прямой связи меж результатом тестирования и способом исцеления работоспособности»> работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) до сего времени остается неясным будущее аналитических систем для на дому даже тех заразных болезней, которые не нуждаются в регистрации, к примеру воспаления мочевого тракта и ангины.

2.3 Правовые нюансы

В Соединенных Штатах будущее аналитических систем для кабинета доктора, по-видимому, также отчасти попадет под контроль федеральных правовых актов, которые будут ограничивать рост цен и виды анализов, проводимых по системе гарантированной оплаты.

Практика скрининга наркотиков уже отыскала обширное применение в неких секторах общества и стремительно распространяется на остальные. До недавнешнего времени анализы на наркотики в главном проводились в армии США (Соединённые Штаты Америки — время около 18% фармакологических компаний разрабатывают программки по скринингу наркотиков, и ожидается, что еще почти все остальные компании присоединятся к сиим исследованиям. Президентская комиссия по борьбе с организованной преступностью рекомендовала всем федеральным агентствам учесть программки скрининга наркотиков и заключать федеральные договоры лишь с таковыми личными фирмами, которые производят подобные программки. Эта рекомендация будет содействовать разработке соответственных тестов для проведения анализа на рабочем месте. Будущее аналитических систем для обнаружения наркотиков на дому и в кабинете доктора будет в главном определяться соответствием разработанных программ скрининга юридическим нормам.

Заключение

Технические новаторства и экономические причины привели к тому, что центр масс в проведении анализов двигается от огромных централизованных лабораторий к анализам на дому либо в кабинете доктора. Этот сдвиг ускоряется за счет развития новейших способов, позволяющих делать анализы при помощи наиболее обычных операций и включающих системы внутреннего контроля для проверки корректности результатов анализа и работоспособности всех компонент систем при наибольшей простоте крайних. В предстоящем для пользователя более полезными будут способы, дозволяющие найти огромное количество соединений.

Кроме технических задач децентрализация проведения анализов породила разные этические задачи, связанные с сохранностью и применением наборов для in vitro. Такие наборы в дальнейшем будут контролироваться строже, в особенности если они предусмотрены для самостоятельного внедрения. В частности, предполагается создать законы, обеспечивающие увеличение свойства выпускаемых наборов, также ряд правовых актов, направленных на усиление контроля за стоимостью мед обеспечения и охрану штатских прав.

]]>