Учебная работа. Биохимические маркеры развития парентеральных вирусных гепатитов
УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «ВИТЕБСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени П.М. МАШЕРОВА»
Факультет Био
Кафедра Экологии и охраны природы
КУРСОВАЯ РАБОТА
по дисциплине Биохимия
БИОХИМИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ развития ПАРЕНТЕРАЛЬНЫХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ
Карпова Наталья Михайловна,
3 курс 33(2) БФ ОЗО
Витебск, 2015
Реферат
Список определений: Парентеральные вирусные гепатиты, гепатит В, С, Д, маркеры парентеральных вирусных гепатитов (HBsAg, HCV, дефектный-HDV), лактатдегидрогеназа, аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, билирубин, щелочная фосфатаза.
Предмет исследования: биохимические маркеры парентеральных вирусных гепатитов.
объект исследования: сыворотка крови (внутренней средой организма человека и животных), направленная на исследование в клинико-диагностическую лабораторию УЗ «Могилевский областной лечебно-диагностический центр».
Цель данной работы: выявить главные биохимические аспекты диагностики парентеральных вирусных гепатитов.
задачки работы:
1. Сформировать общее представление о природе .
2. Классифицировать данные по применению биохимических маркеров для диагностики парентеральных вирусных гепатитов.
3. Изучить высококачественные и количественные способы определения маркеров парентеральных вирусных гепатитов.
4. На основании экспериментальных данных, прийти к выводу о главных способах диагностики парентеральных вирусных гепатитов посреди населения, применяемых в медицинской практике.
способы исследования: описательно-аналитический, сравнительно-сопоставительный, статистический, лабораторные способы диагностики маркеров парентеральных вирусных гепатитов. Теоретическая и практическая значимость: в работе представлена и систематизирована главная информация по биохимическим аспектам диагностики парентеральных вирусных гепатитов.
Введение
Глобальная организация здравоохранения объявила 28 июля Глобальным Деньком борьбы с гепатитами для увеличения осведомленности и вербования к данной нам дилемме внимания людей во всем мире. Установлено, что вирусные гепатиты — это группа всераспространенных и небезопасных для человека заразных болезней, которые достаточно существенно различаются меж собой, вызываются различными вирусами, но все таки имеют общую черту — это работоспособности, которое поражает сначала печень человека и вызывает ее воспаление (Воспаление — сложная местная реакция организма на повреждение). Печень является самым большим непарным органом в организме человека. Она размещается в правом подреберье под диафрагмой. Это огромная хим лаборатория, которая делает в организме человека около 500 актуальных функций, к примеру: обезвреживает посторонние вещества, перерабатывает вещества в энергию и «строй материалы», продуцируют желчь, которая помогает организму переваривать еду, хранит огромное количество витаминов (А, B, C.К, РР, фолиевая кислота и др.) и микроэлементов (железо, медь, цинк, марганец, молибден), сахаров и почти все другое.
За крайнее время с неувязкой парентеральных вирусных гепатитов (дальше ПВГ) столкнулись миллионы людей. В мире насчитывается около 240 млн. приобретенных носителей вируса гепатита В и около 700 млн. носителей вируса гепатита С, т.е. любой 6 обитатель нашей планетки. Это обширно распространённая патология посреди населения, Раз в год 1,5 млн. обитателей планетки гибнут от острых и приобретенных действий, обусловленных вирусами гепатитов.
Парентеральные вирусные гепатиты в протяжении ряда крайних лет продолжают оставаться обширно всераспространенным заразным болезнью посреди населения. Раз в год регистрируются, в среднем, около 300-350 случаев ПВГ. В 94% случаев обнаружения маркеров вируса парентеральных гепатитов происходит при воззвании за мед помощью по иным причинам, т.к. почти всегда болезнь протекает бессимптомно, только в 3-5% развивается острое клинически выраженное социально полезной деятель»>болезнь. Исцеление парентеральных гепатитов долгое и дорогостоящее, при приобретенном течении может длиться всю жизнь.
Неувязка вирусных гепатитов является одной из самых животрепещущих и в нашей стране, потому Министерством здравоохранения Республики Беларусь в целях усиления профилактической работы и вербования внимания общественности поддержана инициатива Интернационального Альянса по борьбе с гепатитами объединяющего наиболее 200 ассоциаций нездоровых гепатитами по всему миру. В Беларуси с 2010 года организуются мероприятия в рамках Интернационального денька борьбы с гепатитами. [ 3]
В истинное время учеными разработаны действенные вакцины против вирусных гепатитов А и В. Потому преждевременное выявление нездоровых гепатитом и вакцинация являются на нынешний денек главными способами предотвращения этих болезней.
Предмет исследования: биохимические маркеры парентеральных вирусных гепатитов.
объект исследования: сыворотка крови (внутренней средой организма человека и животных), направленная на исследование в клинико-диагностическую лабораторию УЗ «Могилевский областной лечебно-диагностический центр».
Цель данной работы: выявить главные биохимические аспекты диагностики парентеральных вирусных гепатитов.
задачки работы:
1. Сформировать общее представление о природе .
2. Классифицировать данные по применению биохимических маркеров для диагностики парентеральных вирусных гепатитов.
3. Изучить высококачественные и количественные способы определения маркеров парентеральных вирусных гепатитов.
4. На основании экспериментальных данных, прийти к выводу о главных способах диагностики парентеральных вирусных гепатитов посреди населения, применяемых в медицинской практике.
вирус гепатит болезнь маркер
1. Общее представление о заболеваемости
1.1 систематизация ПВГ
Парентеральный вирусный гепатит — это воспалительное социально полезной деятель»>болезнь печени, которое вызывают вирусы, проникающие в организм человека через нарушения и повреждения целостности дерматологических и слизистых покровов. Инфицирование наступает при контакте с зараженной кровью (внутренней средой организма) либо иными био жидкостями. К группе парентеральных вирусов относятся вирусы гепатита В, D, С, F, G, TTV, Sen V.В истинное время детально индетифицировано и включено в международную систематизацию вирусов 5 гепатотропных вирусных возбудителей: вирус гепатита А ( HAV ), вирус гепатита В ( HBV ), вирус гепатита С ( HCV ), вирусгепатита D ( HDV ) и вирус гепатита E ( HEV ).
А — энтеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HAV)
В — парентеральный (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-HBV)
С — парентеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HCV)
D — парентеральный (дефектный-HDV)
E — энтеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HEV)
Предполагается, что есть и остальные гепатотропные вирусы ещё недостаточно изученные.
G ( GB ) — парентеральный (РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-HGV)*
ТТ — парентеральный (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-TTV)*
SEN — парентеральный (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-SENV)*
*не утверждены по таксономии и номенклатуре вирусов.
Устойчивость вирусов в окружающей среде очень высочайшая — при комнатной температуре на предметах и поверхностях инфекционность вирусов сохраняется от 3 до 6 месяцев, в замороженном виде — 15-25 лет.
Источником инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) парентерального вирусного гепатита является человек — нездоровой острым, приобретенным гепатитом либо носитель вируса, у которого клинические проявления заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) отсутствуют. вирус содержится во всех био жидкостях источника инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека): крови (внутренней средой организма человека и животных), сперме, вагинальном секрете. В наименьших концентрациях — в слюне, моче, грудном молоке, поте, желчи. Для инфецирования довольно мельчайшей капли крови (внутренней средой организма человека и животных) (10-6 — 10-7 мл.крови (внутренней средой организма человека и животных)), иногда даже невидимой невооруженным глазом. Инфецирование происходит естественными и искусственными способами. Естественные пути реализуются при половом контакте, от мамы к ребенку (внутриутробно через плаценту либо во время родов при прохождении через родовые пути). Принципиальное пространство имеет контактно-бытовой путь передачи инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). Контактно-бытовой путь реализуется:
а) при использовании общих с нездоровым предметов личной гигиены (бритвенных устройств, маникюрных принадлежностей, мочалок, расчесок, постельных принадлежностей);
б) при соприкосновении с хоть какими поверхностями помещений и предметов, грязными кровью (внутренней средой организма) (при наличии у контактных порезов и микротравм);
в) может быть инфецирование и во время уличных стычек;
Искусственные пути передачи в истинное время почаще всего реализуются при проведении немедицинских парентеральных вмешательств, а именно — во время инъекционного введение наркотиков с внедрением общих шприцев, игл либо уже инфицированного наркотика.
Существует риск инфецирования во время проведения татуировок, пирсинга, маникюра и педикюра грязным инструментарием.
Некий риск инфецирования существует и при проведении мед манипуляций: при переливании крови (внутренней средой организма человека и животных), во время гемодиализа, при разных хирургических вмешательствах. Но в нашей стране этот риск сведен к минимуму, т.к. для проведения инъекций и манипуляций употребляются разовые стерильные шприцы, инструментарий и перевязочный материал, а для предупреждения инфецирования через донорскую тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) при каждой кроводаче исследуется на маркеры ПВГ.
работоспособности может протекать в клинически выраженной и бессимптомной форме. Инкубационный период (период от момента инфецирования до первых клинических проявлений) в среднем составляет от 6 недель до 6 месяцев. В течение этого времени вирус плодится и его концентрация в организме возрастает. Наступает преджелтушный период (4-10 дней), в течение которого возникает чувство общей беспомощности, вялости, возникает тошнота (тягостное ощущение в подложечной области и глотке), рвота (рефлекторное извержение содержимого желудка), усугубляется аппетит, прямо до его отсутствия, тревожат кожи, моча темнеет и становится «цвета пива», кал обесцвечивается. время от времени может появляться сыпь типа «крапивницы». И, в конце концов, наступает желтушный период, продолжительностью от 2 недель до 1,5 месяца. Сначала желтеют глаза, слизистая оболочек твердого неба и уздечки языка, позже окрашивается кожа. Желтуха сопровождается дерматологическим зудом и ухудшением общего состояния, нарастают признак — один отдельный признак интоксикации (боль в голове, сонливость (наличие избыточной продолжительности сна), увеличение температуры). Возникает чувство тяжести и ноющие либо приступообразные диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) на основании обнаружения завышенной активности в крови (внутренней средой организма человека и животных) АЛТ, ACT и остальных гепатоспецифическихэнзимов высочайшей концентрации в крови (внутренней средой организма человека и животных): HBsAg и HBeAg, анти-HBsAg, IgM, ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-вируса. Дальше желтуха равномерно потухает и наступает период излечения. Но острая прионами»>зараза у части нездоровых перебегает в носительство маркеров ПВГ или в приобретенный гепатит. Если для гепатита В свойственна хронизация процесса в 5-10% случаев, для гепатита В+Д — в 60% случаев, то для гепатита С — в 80-90% случаев. Развитие цирроза печение и гепатоцеллюлярной карциномы — результат долгого персистирования вируса в организме.
Основой профилактических мероприятий по предотвращению инфицирования вирусом гепатита Вявляется вакцинация. В Республике в рамках приказа Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 05.12.2006 №913 «О совершенствовании организации проведения профилактических прививок» прививаются против гепатита В:
· новорожденные детки
· 13-летние дети
· детки и взрослые, в семьях которых есть носитель HBsAg, нездоровой острым либо приобретенным гепатитом В.
· детки и взрослые часто получающие лица, у каких произошел контакт с материалом, контаминированным вирусом гепатита В.
· мед работники, имеющие контакт с кровью (внутренней средой организма) и иной био жидкостью человека.
· лица, занятые в производстве иммунобиологических препаратов из донорской и плацентарной крови (внутренней средой организма человека и животных).
· студенты мед институтов и учащиеся средних мед учебных заведений.
· пациенты перед плановой операцией, ранее не привитые
К весьма принципиальным профилактическим мероприятиям относятся меры по предупреждению рискованного поведения:
· нужно избегать случайных половых связей, иметь 1-го надёжного полового партнёра.
· применять презерватив при половом контакте;
· никогда не экспериментировать и не употреблять наркотики;
· косметические процедуры (татуировки, пирсинг, маникюр, педикюр) проводить лишь в особых учреждениях, имеющих лицензию на их проведение.
· воспользоваться лишь персональными предметами личной гигиены: бритвенными и маникюрными принадлежностями, ножницами, расческами, мочалками, полотенцами.[5,1,13]
· Главным резервуаром вируса гепатита В являются вирусоносители, которых по данным ВОЗ насчитывается наиболее 300 млн. человек. Не считая вирусоносителей, резервуаром вируса являются нездоровые наточенными и приобретенными формами гепатита В, в том числе нездоровые циррозом печени.
По данным Глобальной организации здравоохранения около 1-ого млрд человек в мире инфицировано вирусом гепатита С. Вирус гепатита Сявляется однонитевым РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) — вирусом и по структуре генома относится к флавивирусам. Для вируса гепатита С свойственна высочайшая частота мутаций. Инфецирование вирусом гепатита С в 80-85% случаев происходит парентерально, то — есть также как гепатитами В и D . Вирусный гепатит D ( HDV ) как правило наблюдается в ассоциации с вирусным гепатитом В ( HBV ), но существенно пореже, чем остальные вирусные гепатиты. Вирусным гепатитом D нередко заражаются при переливании крови (внутренней средой организма человека и животных) либо её компонент, изредка при половых контактах[6,18]
1.2 смерти) ПВГ
Диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) вирусного гепатита основывается на данных опроса, осмотра и лабораторного обследования пациента. С помощью лабораторной диагностики оценивают глубину повреждения печени, выявляют тип вируса и стадию процесса. Не считая медицинской картины диагностическую Ценность имеют общий клинический анализ крови (внутренней средой организма человека и животных), в каком во время заболевания определяется увеличенное содержание лимфоцитов, также замедленная скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и анализ мочи, в каком с первых дней заболевания наблюдается положительная реакция на уробилин и желчные пигменты. Информативным является УЗИ (Ультразвуковое исследование — неинвазивное исследование организма человека или животного с помощью ультразвуковых волн) печени, показывающее ее повышение и уплотнение. Делая упор лишь на осмотр и общие клинические способы обследования, достаточно трудно установить тип вирусного гепатита. Косвенно представить тип вируса можно, если установлена связь с источником поражения, также по продолжительности периодов заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности).[8]
другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) вирусного гепатита С: базирована на выявлении специфичных антитела IgM к вирусу гепатита С ( HCV ), определяемые иммуноферментным способом являются подтверждением во-1-х инфицирования HCV , во-2-х — свидетельствуют о остроте гепатита либо обострении приобретенного гепатита, невзирая на отсутствие гиперферментемииАлТ и АсТ и симптомов гепатита. Определение РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) вируса гепатита С полимеразной цепной реакцией (ПЦР) дозволяет достоверно найти наличие либо отсутствие HCV в крови (внутренней средой организма человека и животных) пациента, найти вирусный генотип, количество РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) (его генокопий) в 1мл. крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого. нужно создать: биохимическое исследование крови (внутренней средой организма человека и животных) на АлТ, АсТ, холестерин (органическое соединение, природный жирный, липофильный спирт, содержащийся в клеточных мембранах всех живых организмов за исключением безъядерных) билирубин, УЗИ (Ультразвуковое исследование — неинвазивное исследование организма человека или животного с помощью ультразвуковых волн) органов брюшной полости. Все нездоровые переболевшие хоть какой формой гепатита С должны быть на диспансерном учёте и 2-3 раза в году проходить лабораторное обследование.
другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) гепатита В: вирус гепатита B является ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-содержащим вирусом.
Он имеет 4 антигена:
HBsAg — поверхностный антиген, имеет специальные нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри, при помощи которых вирус цепляется за клетки-мишени, этот антиген быть может заблокирован антителами анти-HbsAg. Является более частым маркером вируса гепатита B.
HBcorAg — сердцевинный антиген, связывается крепко с ядрами клеток-мишеней, в крови (внутренней средой организма человека и животных) фактически не определяется. антитела к нему могут определяться всю жизнь, но защитной способностью они не владеют.
HBeAg — антиген инфекциозности. Обнаружение свидетельствует о размножении вируса в организме.
HBxAg — антиген, кодируемый определенными генами. Этот антиген отвечает за начало развития онкологического процесса, т.к. через подавление белка р-53 он активирует протоонкогены.
другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) гепатита В:
Для диагностики вирусного гепатита В (и вероятного гепатита Д) употребляют их специальные маркеры:
— ИФА (иммуноферментный анализ) определение в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) антигенов (HBsAg, HBeAg) и кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса гепатита В (по предназначению доктора — быть может высококачественное и количественное). Для начала проводится высококачественное определение, потом по мере необходимости — количественное (оно наиболее дорогостоящее).
При гепатите В более достоверным является отслеживание вируса по антигену HBsAg способом ИФА (иммуноферментный анализ).
Плюсы способа ИФА:
— доступность методики, распространенность в лабораториях, — показатель достоверно отражает уровень зараженных клеток печени, — изменение динамики соответствует уровню иммунного ответа организма на вирус, — исчезновение антигена HBsAg является более надежным показателем полного исцеления пациента.[9,11]
Лабораторная другими словами заключения о сути заболевания и состоянии пациента»>диагностика (процесс установления диагноза, то есть заключения о сущности болезни и состоянии пациента) гепатита Д (ГД) вирус гепатита Д (ВГД) — это дефектный вирус, содержащий одно-спиральную РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов), которому для репликации нужно помощь вируса ГВ для синтеза оболочечных белков, состоящих из HBsAg, который употребляется для инкапсуляции генома ВГД. ВГД не принадлежит ни к одному из узнаваемых семейств вирусов звериных, по своим свойствам ВГД более близок к вироидам и сателлитным вирусам растений. Лабораторная смерти) осуществляется методом обнаружения серологических маркеров ВГД, включая наличие антигена, антител к нему и РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) ВГД. Обнаружение антигена ВГД и РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) ВГД в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) либо ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) печени свидетельствует о наличии активной ГД-инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека), но, необходимо подчеркнуть, что эти маркеры могут не обнаруживаться в сыворотке нездоровых фульминантным ГД. Маркером активной репликации ВГД также является анти-ВГД класса IgМ. Серологические маркеры инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) ГД зависят от того, как был приобретен вирус — в виде коинфекции с ВГВ (у большинства нездоровых социально полезной деятель»>болезнь имеет острое течение и завершается выздоровлением) либо суперинфекции у нездоровых с приобретенной ГВ-заразой (протекает тяжелее, чем коинфекция — в 10% развивается фульминантный гепатит). При коинфекции почти всегда антитела — анти-ВГД класса IgМ и IgG — обнаруживаются в течение работоспособности»>человек был когда-либо инфицирован ВГД. антиген ВГД определяется лишь у 25% нездоровых и обычно исчезает совместно с исчезновением HВsAg. При суперинфекции у нездоровых с приобретенной ГВ-заразой серологическая картина имеет последующие соответствующие индивидуальности: — титр HBsAg понижается к моменту возникновения антигена ВГД в сыворотке; — антиген ВГД и РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-ВГД продолжают определяться в сыворотке, потому что обычно у большинства пациентов с суперинфекцией ГД (70-80%) развивается приобретенная простейшими»>, в отличие от случаев коинфекции; — определяются высочайшие титры время. Серологические маркеры вируса ГД определяют способом иммуноферментного и радиоиммунного анализа, а РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-ВГД — способом полимеразной цепной реакции. Русскими и забугорными промышленными биотехнологическими предприятиями выпускаются диагностические наборы, включающие все нужные составляющие и реактивы для постановки теста. В исследовательских продуктах употребляют дельта-антиген, приобретенный из печени сурков, экспериментально зараженных ГД; антиген, выделенный из печени погибших носителей ВГД; дельта-антиген, приобретенный генно-инженерным методом.[12,11]
2. Способы определения маркеров ПВГ
Результаты проведенных лабораторных исследовательских работ играют существенную, если не ведомую, роль для доказательства вирусного гепатита и установления его этиологии.
Главным диагностическим маркером ВГВ является HBsAg. Определение HBsAg осуществляется способами ИФА, ФИА, МФА, также мембранным экспресс-методом. антитела к HBsAg (дальше ~ антиHВS) являются маркером, свидетельствующим о ранее перенесенной инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) или наличии поствакцинального иммунитета.
В вариантах первичного обнаружения HBsAg, анти-НВsАg способами ИЛА либо ФИА нужно проведение конфирматорного теста.
Для выявления HBeAg употребляются способы ИФА и ФИА, также мембранный экспресс-способ. Первично-положительные по HВеАg результаты исследования подтверждаются конфирматорным тестом. HBeAg представляет собой диагностический маркер, ассоцированный с высочайшей инфекционностью крови (внутренней средой организма человека и животных), активной репродукцией вируса гепатита В и риском перинатальной передачи возбудителя.
Выявление наличие HBcAg в гепатоцитах свидетельствует о активной репродукции вирусных частиц.
антитела к HBcAg класса М (дальше ~ анти-НВс IgM) возникают через 1 — 2 недельки опосля возникновения HBsAg и циркулируют крови (внутренней средой организма человека и животных) от 2 до 18 месяцев у пациентов с острым вирусным гепатитом В и пациентов с приобретенным вирусным гепатитом В — при реактивации инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека).
Суммарные антитела к HBcAg и составляющие их антитела класса G возникают опосля анти-НВс IgM и продолжительно (нередко на всю жизнь) определяются у переболевших острым вирусным гепатитом В, пациентов с приобретенной формой кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса гепатита В способом ПЦР показывает на наличие и репродукцию в организме возбудителя.
Количественное обнаружение ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса гепатита В способом ПЦР (определение вирусной перегрузки) дозволяет оценить активность репликации вируса и эффективность антивирусной для снятия либо устранения симптомов и проявлений терапии (заболевания). Способ IЦР употребляется также для определения генотипов вируса гепатита В целью выбора хорошей схемы исцеления работоспособности»>заключения о сущности болезни и состоянии пациента) маркеров ВГD проводится у лиц, имеющих маркеры вируса гепатита В.[14]
Выявление серологических маркеров вирусных гепатитов
Установить вирусную природу гепатита и получить информацию о его этиологии может быть лишь методом выявления серологических маркеров вирусов гепатита. К таковым маркерам относят вирусные белки (антигены), специфичные антитела, вырабатываемые организмом в ответ на заразу, и нуклеиновые кислоты вируса (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) либо РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)), представляющие его геном.
совокупа способов, позволяющих выявлять в био тканях и жидкостях специальные вирусные либо бактериальные белки (антигены) либо антитела, вырабатываемые в организме владельца в присутствии того либо другого возбудителя, относят к иммунологическим способам лабораторного анализа. За крайние несколько десятилетий иммунологические способы исследования получили повсеместное распространение. Предпосылкой этого явилось тесное слияние иммунологии и биотехнологии, которое позволило создать и ввести в практику широкий диапазон тест-систем, основанных на содействии антиген — антитело. Применительно к вирусным гепатитам, иммуноферментный анализ относится к непрямым способам обнаружения возбудителя, позволяющим установить этиологию работоспособности»>заболевания.
Сравнимо не так давно в практику клинико-диагностических лабораторий вошли способы генодиагностики, дозволяющие обнаруживать и охарактеризовывать гены либо несмысловые последовательности ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) и/либо РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов). Своим развитием эти способы должны разработкой в 1983 г принципа полимеразной цепной реакции (ПЦР). 1-ые сообщения по практическому применению ПЦР возникли в 1985 г и с того времени количество публикаций, где ПЦР употребляется в качестве 1-го из способов исследования, занимает одно из первых мест в мировой научной литературе. Эти подходы приложимы для обнаружения и исследования геномов заразных агентов, обнаружения маркеров онкологических болезней, выявления генетических конфигураций в геноме человека, связанных с теми либо другими многофункциональными нарушениями. В отличие от ИФА, ПЦР-анализ относится к прямым способам обнаружения возбудителя в клиническом материале, что дозволяет оценить активность вирусного процесса и проследить процессы распространения возбудителя в разных органах и тканях.
Серодиагностика вирусного гепатита В.
Вирус гепатита В (hepatitis B Virus, HBV) относится к семейству Hepadnoviridae. Геном вируса представлен отчасти сдвоенной круговой молекулой ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) размером 3200 п.н. При световой микроскопии HBV смотрится сферической частичкой поперечником 42 нм (частичка Дейна), состоящей из ядра — нуклеоида, имеющего форму икосаэдра поперечником 28 нм, снутри которого находится двуцепочечная ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов), концевой белок и фермент ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-полимераза. В состав нуклеоидного белка входят HBcAg и HBeAg. Наружная оболочка (шириной 7 нм) образована поверхностным антигеном HBV — HBsAg (рис. 2, 3). вирус гепатита В является псевдоретровирусом, т. е. его ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) может отчасти встраиваться в геном гепатоцитов. При ОВГ и обострении ХГ вирусные частички можно найти в гепатоцитах и сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого. При интегративной форме ХГ В и в стадии ремиссии HBV в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) не выявляется.Основой лабораторной диагностики инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV является определение серологических маркеров инфицирования вирусом: HBsAg, HВeAg, анти-НВс класса IgM и IgG, анти-НВе и анти-HBs, HBV ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) и активности вирусной ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) — полимеразы. Зависимо от течения вирусного гепатита В диапазон конфигурации серологических маркеров смотрится по-разному
HBsAg — главный маркер инфицирования HBV. При остром вирусном Вв большинстве случаев (90-80 %) HBsAg удается выявить в инкубационном периоде, начиная с 3-5-й недельки инфецирования. Средняя длительность циркуляции антигена — 70-80 дней. Резвое исчезновение HBsAg (в 1-ые деньки желтухи) с возникновением антиНВs — нехороший прогностический признак. При приобретенном гепатите ВHBsAg может циркулировать в крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого в протяжении почти всех лет. Необходимо подчеркнуть, что применяющиеся в истинное время способы определения HBsAg, в том числе ИФА, имеют порог чувствительности. Потому при наличии клинических признаков гепатита и отсутствии HBsAg в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных) нужно изучить остальные маркеры инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV. Наличие HBsAg в крови (внутренней средой организма человека и животных) свидетельствует о присутствии вируса в печени и с большенный толикой вероятности в крови (внутренней средой организма человека и животных). Не всякая сыворотка, содержащая HВsAg, содержит вирус гепатита В. В ряде всевозможных случаев ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) вируса встраивается в ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) гепатоцита не на сто процентов, а отчасти, лишь тем участком, который шифрует синтез HBsAg. В этих вариантах синтезируются HBsAg без остальных компонент вириона, (другими словами без остальных антигенов). Считают, что таковая ситуация возникает при «здоровом» носительстве HBsAg.HBeAg вируса гепатита В охарактеризовывает высшую инфекционность крови (внутренней средой организма человека и животных), являясь показателем активной репликации HBV. HBeAg циркулирует в крови (внутренней средой организма человека и животных) хворого лишь в присутствии HBsAg. В первую недельку желтушного периода он выявляется у 85-95 % нездоровых. Выявление HBeAg в течение 2-ух и наиболее месяцев служит прогностическим признаком развития приобретенного гепатита. У большинства нездоровых приобретенным гепатитом с высочайшей активностью процесса HBeAg сохраняется на долгий срок (до нескольких лет).Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В класса M (анти-НВcIgM) — маркер активной репликации НВV и острой инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). Выявляются через 1-2 недельки опосля обнаружения HBsAg и сохраняются в протяжении 2-18 месяцев. У 4-20 % нездоровых острым гепатитом В анти-HBcIgM являются единственным маркером инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). При ХГ В анти-НВсIgM могут быть выявлены у неких нездоровых в наименьших титрах, чем при острой инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека), при этом титр антител отражает тяжесть гепатита. антитела к HBcAg класса G (анти-НВсIgG) возникают фактически сразу с анти-НВсIgM. Как првило, они остаются у всех лиц, переболевших гепатитом В, на всю жизнь. У 95 % носителей HBsAg вместе с HBsAg циркулируют и анти-НВсIgG. антитела к HBsAg (анти-НВs) свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) либо о наличии поствакцинального иммунитета (защитный уровень — 10 МЕ/мл). Они возникают в период излечения, через 4 недельки опосля исчезновения HBsAg, достигая наибольшей концентрации через 1-2 года, с следующим постепенным понижением уровня, труднодоступного выявлению современными способами диагностики. В неких вариантах анти-HВs могут циркулировать на всю жизнь. Возникновение анти-HBs на фоне клинического улучшения у хворого гепатитом В является неплохим прогностическим признаком. Принципиально отметить, что в динамике острой инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV имеется «окно», когда HBsAg уже не определяется, а анти-HBs еще не возникли. При всем этом выявляются анти-HBcIgM и IgG. Из этого следует вывод о необходимости обследования нездоровых ОВГ на анти-HBcIgM даже при отрицательных результатах исследования HBsAg и анти-НВs. антитела к HBeAg (анти-НВе) возникают в крови (внутренней средой организма человека и животных) опосля элиминации HBeAg и окончания репликации вируса. К концу 9-й недельки острого периода гепатита В наиболее 90 % нездоровых имеют анти-НВе. В период излечения анти-НВе могут исчезать. Но, наличие анти-НВе не является показателем отсутствия инфекционности определенной сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных). Показано, что у ряда нездоровых в процессе развития гепатита В (около 10%) под воздействием «иммунного давления» на вирус появляются мутантные формы, которые «избегают» иммунного надзора и не элиминируются. У носителей анти-HBe был выделен мутант, неспособный продуцировать HBeAg из-за изъянов в области precore и получивший обозначение HBeAg-отрицательного. Возникновение HBeAg-отрицательного мутанта приводит к прогрессированию поражения печени при продолжающейся репликации вируса (наличие ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных)). При первичном инфицировании HBeAg-отрицательным мутантом значительно увеличивается риск развития фульминантного гепатита. Описанные маркеры гепатита В исследуются способом ИФА. Диапазон антигенов (HBsAg, HBeAg) дозволяет установить диагноз (медицинское заключение об имеющемся заболевании) гепатита В и найти стадию работоспособности»> работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности) (таблица 1). Недочетом данного способа является невозможность его использования при инфецировании мутантными формами вируса, при иммуносупрессии (нездоровые онкологическими болезнями, наркоманы и т.д.) и для количественной оценки присутствующего в организме возбудителя. Решение этих задач сделалось вероятным в итоге внедрения молекулярно-биологических способов в практику клинико-диагностических лабораторий.
Таблица 1. Разные сочетания серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В и их интерпретация
HBsAg
HBeAg
антиНВc IgM
антиНВ c сумм
антиНВе
антиНВs
HBV ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)
Трактовка результата
+
+
+
+
—
—
+
Острый гепатит В. Одичавший штамм
+
—
+
+
—
—
+
Острый гепатит В. Мутантный штамм
+
—
+/-
+
+
—
-/+
Разрешившийся острый гепатит В.Сероконверсия.
+
+
+/-
+
-/+
—
+
Приобретенный активный гепатит В
+/-
-/+
-/+
+
+/-
—
+/-
Приобретенный интегративный гепатит В
+
—
—
+
—
-/+
—
«Здоровое» носительство
—
—
—
+
-/+
+
—
Перенесенный вирусный гепатит В
—
—
—
—
—
+
—
состояние опосля иммунизации
Способы генодиагностики, к которым относится ПЦР, значительно расширяют способности лабораторной диагностики вирусного В, позволяя конкретно выявить возбудитель, установить тканевую и внутриклеточную локализацию HBV, выявить и охарактеризовать мутантные формы вируса, оценить уровень виремии в течение процесс.
В истинное время существует широкий диапазон исследовательских тест-систем для выявления ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в лабораторных критериях, основанных на способах ПЦР — компании «Roche», НПФ «Литех», «ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) разработка«, LCR (лигазная цепная реакция) — компания «Abbott», bDNA (способ «развлетвленных» ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) зондов) — компания «Chiron». Эти тест-системы разрешают проводить высококачественное определение наличия возбудителя в био материале: сыворотке либо плазме крови (внутренней средой организма человека и животных), ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) печени, мононуклеарах. Одним из вариантов высококачественного определения ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV является разработка ПЦР insitu (в гистологических срезах), позволяющая установить внутриклеточную локализацию вируса в гепатоцитах.
Единственная коммерческая тест-система дифференциальной диагностики НВеAg-отрицательного гепатита В сотворена компанией «Abbot» с внедрением LCR. Значимым недочетом данной нам системы является выявление лишь одной из почти всех мутаций, приводящих к отсутствию синтеза НВеAg вирусом. Выявление всей совокупы генетических конфигураций, соответствующих для НВеAg-отрицательных вирусов гепатита В, может быть пока лишь прямым секвенированием ПЦР-амплифицированных фрагментов вирусного генома.
Численная черта содержания ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в клинических образчиках принципиальна для оценки эффективности антивирусной для снятия либо устранения симптомов и проявлений терапии ( оздоровление»>терапия — процесс, для снятия или устранения симптомов и проявлений работоспособности»>заболевания) и имеет прогностическое значение для определения хронизации HBV. При начально низком уровне виремии (ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV наименее 500 фг/мкл) процент хронизации острого гепатита В близок к нулю, при концентрации HBV ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) от 500 до 2000 фг/мклхронизация процесса наблюдается у 25-30% нездоровых, а при высочайшем уровне виремии у пациента (наиболее 2000 фг/мкл) острый гепатит В почаще всего перебегает в приобретенный.
Известные коммерческие тест-системы оценки концентрации ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV реализуют принцип конкурентноспособного ПЦР-анализа с следующей гибридизационной схемой определения товаров амплификации (компания «Roche», НПФ «Литех»). Этот подход основан на внесении в клинический эталон внутреннего эталона известной концентрации, отменно отличающегося от определяемой матрицы. Опосля ПЦР концентрация ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV в исследуемом материале рассчитывается на основании известной концентрации внутреннего эталона и соотношения скопления товаров амплификации внутреннего эталона и определяемой матрицы.
В реальный момент развитие способов лабораторной диагностики гепатита В идет по направлению сотворения коммерческих тест-систем для идентификации клинически важных мутантных штаммов HBV, также использованию новейших оптических устройств (биосенсоров) для всеохватывающей диагностики инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека) HBV (вирусных белков, антител к ним и ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) HBV)
Серодиагностика гепатита С
вирус гепатита С (hepatitis C virus, HCV) является РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) содержащим гепатотропным и лимфотропным вирусом, относящимся к семейству Flaviviridae. Геном вируса представлен одноцепочечной молекулой (+) РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) размером около 9500 оснований, кодирующей структурные и неструктурные белки.К структурным белкам относят белок сердцевины (кор) и гликопротеины оболочки (Е1 и Е2). Неструктурную область представляет комплекс белков с ферментативной активностью, сначала РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-зависимая — РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) полимераза. Кроме вирусных белков, снаружи вирион покрыт липидной оболочкой состоящей из липопротеинов организма владельца низкой плотности. До 1990 г. ХГ ни-А-ни-В с парентеральным методом передачи диагностировали на основании завышенной активности АЛТ сыворотки в течение 6 месяцев, при отсутствии остальных узнаваемых маркеров вирусных гепатитов. Но у части нездоровых ХГ С уровень АЛТ не увеличивается. В современной диагностике гепатита С главная роль отводится определению кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) HCV.
В отличие от гепатита В, при котором могут быть определены антигены вируса и антитела к ним, при гепатите С способом ИФА улавливаются лишь антитела. Антигены HCV, если и попадают в кровь (внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов), то в количествах, которые фактически не улавливаются. Они могут быть обнаружены лишь в ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) печени при использовании иммунногистохимических способов исследования. Это значительно ограничивает возможность оценки течения и активности заразного процесса.
Анти-HCV не свидетельствуют о продолжающейся репликации вируса, и могут являться признаком как текущей, так и перенесенной инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). Приходится также учесть, что у реципиентов, которым была перелита инфицированная образованная водянистой соединительной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов), могут обнаруживаться анти-HCV донора, не непременно свидетельствующие о инфецировании HCV. У нездоровых ХГ С анти-HCV обнаруживаются в крови (внутренней средой организма человека и животных) не только лишь в вольной форме, да и в составе циркулирующих иммунных комплексов. антитела образуются к любому из вирусных белков, расположенных в структурной и неструктурной области вирусного генома. Сиим определяется их разная специфика и, соответственно, различная диагностическая информативность. Для скрининга гепатита С употребляют способ ИФА, а в качестве подтверждающего теста — способ иммунноблота (RIBA). Существует несколько поколений исследовательских тест-систем для выявления анти-HCV, различающихся собственной чувствительностью и спецификой (таблица 2).
Таблица 2. Сопоставление различных поколений исследовательских иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВГС.
тест-система
Шифр фрагментов
Белок, содержащий данный фрагмент
Эффективность
1 поколение
С100-3
NS3 и NS4
до 82,2%
2 поколение
С100-3, С22, С33с
NS4, кор, NS3
до 97,5%
3 поколение
С100-3, С22, С33с, NS5
NS4, кор, NS3, NS5
до 99,7%
4 поколение*
С100-3, С22, С33с, NS5
NS4, кор, NS3, NS5
до 99,7%
RIBA-3
С100-3, С22, С33с, NS5, e1, e2
NS4, кор, NS3, NS5, E1, E2
до 99,6%
*тест-системы 4-го поколения содержат синтетические и рекомбинантные вирусные антигены, размеры которых могут различаться от фрагментов 3-го поколения.
В заключении следует упомянуть о необходимости всеохватывающего обследования хворого с привлечением новейших достижений мед и био науки для правильной диагностики вирусных гепатитов и предназначения адекватной процесс нездоровому.[2,4,7,21]
Биохимический анализ крови (внутренней средой организма человека и животных)
Биохимический анализ крови (внутренней средой организма человека и животных) пациентов издавна вошел в практику клинических лабораторий. совокупа получаемых данных о показателях обмена биллирубина, сывороточных белках и ферментах разрешают найти воспалительные процессы, происходящие в организме человека и представить их локализацию. Эти аспекты не специфичны и не охарактеризовывают этиологию вирусных гепатитов, совместно с тем существенны для оценки многофункционального состояния печени.
характеристики обмена билирубина.
Оценить у пациента состояние обмена билирубина можно на основании биохимического анализа крови (внутренней средой организма человека и животных), мочи и кала. Вольный билирубин является производной гемоглобина, высвобождающегося в процессе гемолиза эритроцитов. В физиологических критериях любые день гемолизируется приблизительно 1% циркулирующих эритроцитов, из которых появляется 200-250 мг билирубина. Основная часть билирубина поступает в кровяное русло из клеток системы мононуклеарных фагоцитов селезенки и костного мозга (центральный отдел нервной системы животных и человека). Билирубин нерастворим в воде, потому в крови (внутренней средой организма человека и животных) его перенос производят неспецифические транспортные белки — альбумины. Вольный билирубин является ядовитым соединением, способным просачиваться через гемато-энцефалический барьер, вызывая энцефалопатии. Детоксикация билирубина происходит в клеточках печени, где к нему присоединяется глюкуроновая кислота, образуя глюкурониды билирубина. Эти соединения уже не токсичны и водорастворимы, что упрощает их выведение из организма в составе желчи. В кишечном тракте под действием бактериальных ферментов образуются две группы товаров распада билирубина — уробилиногены и стеркобилиногены, основная часть которых выводится с калом. В обычных физиологических критериях почки в выведении билирубина не участвуют. Билирубин в крови (внутренней средой организма человека и животных) здорового человека содержится в концентрации 1,7 — 17,1 мкмоль/л и представлен 2-мя фракциями: нерастворимый билирубин, связанный с альбумином — непрямой билирубин, и растворимые глюкорониды билирубина — прямой билирубин. В норме их соотношение составляет 3:1. При гепатитах повреждаются клеточки печени и, вследствие этого, понижается продукция желчи. Не считая того, в итоге повреждения паренхимы печени желчь поступает не только лишь в желчные канальцы, да и в образованная водянистой соединительной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»> образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>кровь (внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов). Эти процессы приводят к повышению общего билирубина крови (внутренней средой организма человека и животных) за счет обоих его фракций. Отмечено, что уже в конце преджелтушного периода у части нездоровых на фоне обычного общего билирубина начинает расти фракция прямого билирубина, что является ранешным показателем цитолитических действий в печени. В моче начинают выявляться билирубин и уробилины, а концентрация стеркобилина в кале резко понижается (таблица 3).
Таблица 3. Соотношение характеристик обмена билирубина в норме и при развитии печеночной желтухи.
характеристики
Обычные значения
Печеночная желтуха
Общий билирубин сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных)
1,7 — 17,1 мкмоль/л
Существенное увеличение
Прямой билирубин сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных)
до 3,4 мкмоль/л
Увеличение
Непрямой билирубин сыворотки крови (внутренней средой организма человека и животных)
1,7 — 12,7мкмоль/л
Увеличение
Реакция мочи на билирубин и уробилин
Отрицательная
Положительная
Реакция кала на стеркобилин
Положительная
Отрицательная
Необходимо подчеркнуть, что характеристики обмена билирубина для диагностики вирусного гепатита играют роль лишь при развитии желтухи. Безжелтушная форма и преджелтушная фаза вирусных гепатитов в собственном большинстве остаются нераспознанными.
Оценка активности ферментов.
Определение активности аминотрансфераз сыворотки (аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ)) является высокочувствительным показателем цитолиза гепатоцитов, что описывает ее ведомую роль в диагностике гепатитов различной этиологии. При цитолитическом процессе, развивающимся в печени хворого вирусным гепатитом, преобладает «вымывание» АЛТ, степень увеличения АСТ значительно меньше (таблица 4).
Таблица 4. Определение активности ферментов в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных)
Фермент
Обычные* значения
Значения при гепатитах
Специфика для гепатоцитов
Аланинаминотрансфераза (АлАТ)
до 40 Ед/л
повышение
—
Аспартатаминотрансфераза (АсАТ)
до 40 Ед/л
повышение
—
Сорбитдегидрогеназа (СДГ)
до 17 Ед/л
повышение
+
Фруктозо-1-фосфатальдолаза (Ф1ФА)
до 1 ЕД
повышение
+
Урокиназа
до 1ЕД
повышение
+
Щелочная фосфатаза (ШФ)
31-115 Ед/л детки: до 350 Е/л
повышение
—
* значения приведены в согласовании с советами исследовательских тест-систем, применяемых в КДЛ НПФ «Литех»
Для доп доказательства гепатогенной природы ферментемии можно найти активность печеночно-специфических ферментов — сорбитдегидрогеназы, фруктозо-1-фосфатальдолазы, урокиназы и др. Они локализуются в большей степени в гепатоцитах и их выявление в крови (внутренней средой организма человека и животных) совершенно точно соединено с патологией печени. Вкупе с тем, эти испытания уступают по чувствительности определению активности АЛТ. Активность АЛТ и АСТ отражает выраженность воспаления в печени, но не этиологию гепатита.
Белковые пробы
При острых вирусных гепатитах общее содержание белков плазмы крови (внутренней средой организма человека и животных) и их состав фактически не меняются. Исключение представляет тимоловая проба, в норме имеющая значения до 4 ЕД и растущая до 6-8 ЕД при гепатитах.
При ХГ на стадии ЦП могут наблюдаться уменьшение концентрации альбумина в сыворотке крови (внутренней средой организма человека и животных), понижение протромбинового индекса (наименее 70%), уменьшение концентрации остальных причин свертывания крови (внутренней средой организма человека и животных) в рамках синдрома печеночно-клеточной дефицитности. Доп показателями активности гепатита являются убыстрение СОЭ (і15 мм/ч), увеличение концентрации гамма-глобулинов сыворотки.[10,16,19]
определения лактатдегидрогеназы.
Принцип способа:
Измененный способ в согласовании с советами Скандинавского Комитета по Ферментам (СКФ).
ЛДГ
Пируват + НАДН + Н+ ? Лактат + НАД+
Состав набора:
1. Буферный раствор:
ТRIS-буфер (рН 7,4) 50ммоль/л
Пируват 1,5ммоль/л
2. Субстратный раствор:
НАДН 0,8ммоль/л
Подготовка и стабильность реагентов
способ работы с персональными реагентами. Реагенты готовы к применению. Реагенты, даже опосля вскрытия флаконов, могут сохраняться при 2-8 С до обозначенного срока годности. Буферный раствор нужно хранить в защищённом от света месте. Следует избегать загрязнения реагентов!
Способ работы с рабочим реагентом. Для изготовления рабочего реагента следует: Осторожно — смешать реагент 1 (Буферный раствор) и 2 (Субстрат) в соотношении 4:1 Рабочий реагент можно хранить в течение 3 недель при 2-80С либо 3 денька — при 15-25С. Рабочий реагент следует хранить в защищённом от света месте.
Исследуемый материал:
Сыворотка, гепарин- либо ЭДТА-плазма.
Не применять гемолизированные пробы!
Падение активности в течение 3 дней
при 2-8С — 8%, при 15-25°C — 2%.
Схема проведения анализа:
Длина волны: Hg 334 им, 340 нм, Hg 365 нм
Длина оптического пути: 1 см
температура: 25С, 30С либо 37С
Измерение: относительно воздуха (уменьшение поглощения). Реагенты и кюветы прогреть до нужной температуры. Температуру в течение анализа поддерживать неизменной (±О.5С).
Схема пипетирования *
Таблица 5 способ работы с персональными реагентами
В кюветы пипетировать
25С, 30С
37С
Проба
20мкл
10мкл
Буферный раствор
1000мкл
1000мкл
Перемешать, инкубировать 1-5 минут при нужной температуре
Субстрат
250мкл
250мкл
Перемешать, через 1минуту измерить поглощение и сразу включить секундомер. Буквально через 1,2,3 мин повторить измерение.
Таблица 6 способ работы с рабочим реагентом
В кюветы пипетировать
25С, 30С
37С
Проба
20мкл
10мкл
Рабочий раствор
1000мкл
1000мкл
Перемешать, через 1минуту измерить поглощение и сразу включить секундомер. Буквально через 1,2,3 мин повторить измерение.
* При использовании микрокювет объемы можно уменьшить в два раза
Расчёт
Высчитать среднюю величину конфигурации поглощения за минуту (*А/мин) и её подставить в формулу:
Активность ЛДГ (Ед/л) = *А/мнн Х F Использовать последующие причины:
Таблица 7 способ работы с персональными реагентами:
Значение фактора F
Hg334нм
340нм
Hg 365нм
F(25С, 30С)
10275
10080
18675
F (37С)
20390
2000
37060
Таблица 8 способ работы с рабочим реагентом:
Значение фактора F
Hg334нм
340нм
Hg 365нм
F(25С, 30С)
8250
8095
15000
F (37С)
16345
16030
29705
Фактор пересчета результатов, выраженных в классической системе единиц (Ед/л), в Международную систему единиц (кат/л):
1 Ед/л =16,67х10-3 мккат/л, 1 мккат/л=60 Ед/.
Эксплуатационная черта
Линейность: Если изменение адсорбции за минуту составляет *A/min=0,150 при Hg 334 нм, 340 нм либо 0,070 при Hg 365 нм, нужно 100 мкл пробы смешать с 900 мкл физ. раствора (0,9% NaCl) и повторить определение. Приобретенный итог помножить на 10.
Таблица 9 Спектр референтных величин
температура
25С,Ед/л
30С,Ед/л
37С,Ед/л
Взрослые
120-140
160-320
225-450
Малыши (до года)
До 500
Определения аланинаминотрансферазы
Кинетический способ.
Кат №~ 001.017.01 Ферментный реагент 1* 80мл
Субстратный раствор 1*20мл
Kaт №~ 001.017.10 Ферментный реагент 1* 800мл
Субстратный раствор 2*100мл
Kaт № 001.017.11 Ферментный реагент 4* 80мл
Субстратный раствор 2*40мл
Принцип способа
Измененный, оптимизированный кинетический способ в согласовании с советами Интернациональной Федерации Медицинской Химии (IFCC), без активации пиридоксальфосфатом:
АЛАТ
2-0ксоглутарат + L-Аланин ~ L-Глутамат + Пируват
ЛДГ
Пируват + НАДН +Н+ —- L -Лактат + НАД+
Состав набора
1. Ферментный реагент:
ТРИС-буфер (рН 7,5) 150 ммоль/л
L -Алании 750 ммоль/л
ЛДГ ?1,2 кЕд/л
2. Субстратный раствор:
2-0ксоглугарат 90 ммоль/л
НАДН 0,9 ммоль/л
Подготовка и стабильность реагентов
При работе с персональными реагентами: Реагенты готовы к использованию и устойчивы, даже опосля вскрытия флаконов, до обозначенного срока годности при хранении при-2 — 8 С в защищенном от света месте. Следует избегать загрязнения реагентов.
При работе с рабочим реагентом для изготовления рабочего реагента следует:
Осторожно смешать реагент 1 (Ферментный) и 2 (Субстрат) в соотношении 4:1 Рабочий реагент можно хранить в течение 4-х недель при 2-80С и 5 дней при 15-250С.
Исследуемый материал:
Сыворотка, ЭДТА- либо гепарин-плазма. Гемолиз мешает проведению анализа! Утрата активности в течение 3 дней при 4°С: <10%, при 20-250С: <17%
Схема проведения анализа
Длина волны: 340нм либо Hg 334 нм, 365 нм
длина оптического пути: 1 см
температура измерения: 25°С, 30°С, 37С
Измерение: против воздуха (понижение поглощения). Перед измерением реагенты и кюветы прогреть до нужной температуры и в течение измерения Поддерживать температуру неизменной
(± 0,50С).
Схема пипетирования*
Таблица 10 способ работы с персональными реагентами
В кюветы пипетировать
25С, 30С
37С
Проба
200мкл
100мкл
Ферментный реагент
1000мкл
1000мкл
Перемешать, инкубировать 5 минут при нужной температуре
Субстрат
250мкл
250мкл
Перемешать, через 1минуту измерить поглощение и сразу включить секундомер. Буквально через 1,2,3 мин повторить измерение.
Таблица 11 способ работы с рабочим реагентом
В кюветы пипетировать
25С, 30С
37С
Проба
200мкл
100мкл
Рабочий раствор
1000мкл
1000мкл
Перемешать, через 1минуту измерить поглощение и сразу включить секундомер. Буквально через 1,2,3 мин повторить измерение.
*Полумикрометод; для макрометода объемы удвоить
Расчет
Высчитать среднюю величину конфигурации поглощения за 1минуту (А/мин) и применять ее в расчете:
Активность АлаТ (ед/л) = А/мин х
При изменении поглощения за минуту (А/мин) 0,06-0,08 (Hg 365нм) либо 0,12-0,16 (Hg 334нм и 340нм) следует принимать во внимание результаты измерения лишь в 1-ые 2 минутки (1 мин инкубировать и 2мин определять). Использовать последующие значения фактора F/
Таблица 12 Способ работы с персональными реагентами:
Hg334нм
340нм
Hg 365нм
F(25С, 30С)
1173
1151
2132
F (37С)
2184
2143
3971
Таблица 13 способ работы с рабочим реагентом:
Значение фактора F
Hg334нм
340нм
Hg 365нм
F(25С, 30С)
971
952
1765
F (37С)
1780
1745
3235
Фактор пересчета результатов, выраженных в классической системе единиц (Ед/л), в Международную систему единиц (кат/л):
1Ед/л = 16,67 х 10-3 мккат/л
1 мккат/л = 60 Ед/л
Таблица 14 Эксплуатационная черта
А/мин
25С, 30С
37С
Hg 365нм
0,080
170 Ед/л
320 Ед/л
Hg334нм/340нм
0,160
190Ед/л
350Ед/л
При таковой активности /поглощении либо выше нужно 0.1 мл пробы смешать с 0,9 мл раствора NaCl (0,9%) и повторить определение, а итог помножить на 10. Высокоактивные сыворотки могут демонстрировать очени низкие величины исходного поглощения, потому что большая часть НАДН будет израсходована до начала измерения. В этом случае нужно провести разведения, как описано выше.
Таблица 15 Спектр референтных величин
25С
30С
37С
Мужчины
До 22 Ед/л
До 30 Ед/л
До 42 ЕД/л
Дамы
До 17 Ед/л
До 23 Ед/л
До 32 Ед/л
Контроль свойства
Допускается внедрение контрольных сывороток, активность АлаТ в каких определена (аттестована) данным способом.
Примечание
Ферментный реагент и субстрат содержат азид натрия (0,095%). Следует избегать их контакта с кожей и слизистыми оболочками!
определение аспартатаминотрансферазы
кинетический способ
Принцип способа: основан на последовательности ферментативных реакций:
L — аспартат+ 2 — оксоглутарат АЛТ ~ глутамат + оксалоацетат оксалоацетат + НАДН+ Н лдг ~ лактат + НАД +
Скорость уменьшения концентрации НАДН, который имеет максимум поглощения при 340 нм, пропорциональна активности АЛТ и измеряется фотометрически.
методика анализа:
Набор реагентов предназначен для ручного определения и для определения на автоматических и автоматических анализаторах.
Ручное определение:
Длина волны 340 им, температура измерений 37 С.
В кювету помещают 500 мкл рабочего реагента, прогревают 5 минут, потом добавляют 50 мкл исследуемого материала и перемешивают.
Инкубируют 1 мин при 37 С, определяют оптическую плотность раствора по отношению к воздуху либо воде. Буквально через 2 минутки повторяют измерение, вычисляют среднее изменение оптической плотности за 1 мин. (~А/мин)
]]>