Загрузка...
Учебная работа. Выделение и очистка белков сухожилий
2
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО (то есть программное обеспечение — комплект программ для компьютеров и вычислительных устройств) ОБРАЗОВАНИЮ
ПЕНЗЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им В.Г. БЕЛИНСКОГО
КАФЕДРА БИОХИМИИ
КУРСОВАЯ РАБОТА:
ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА БЕЛКОВ СУХОЖИЛИЙ, ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
Выполнил: студент группы БХ — 31
Бегутов М.М.
Проверил: проф. Генгин М.Т.
ПЕНЗА
2009
Содержание
Введение
1. Сухожилия, соединительная строением и выполняемыми функциями»>структура и типы коллагена
1.2 Растворимые фракции и агрегация коллагена в фибриллы
1.3 Данные ЯМР о структуре связанной воды в коллагене при помощи сканирующей калориметрии
2. методы иммобилизации коллагена из разных органов и тканей. Возможность внедрения в иммобилизации коллагенов сухожилий.
Заключение
Перечень литературы
Введение
Мед хирургия постоянно просит новейшие материалы. В 50-х годах прошедшего столетья такие материалы возникли благодаря интенсивному развитию химии полимеров. Некие синтетические материалы, к примеру, нейлон, капрон, лавсан, дакрон, тефлон и остальные, начали внедрять в мед практику из-за их кажущихся на 1-ый взор положительных свойств, до этого всего доступности, легкости производства, прочности, простоты стерилизации, относительной био инертности.
Традиционное понятие «био лучше искусственного» подвергли сомнению из-за лишнего увлечения полимерными материалами.
С скоплением опыта внедрения синтетических материалов возник обоснованный скепсис. Наиболее того, сложные препядствия восстановительной хирургии не решались совсем.
Инертные полимеры в живом организме оставались, к большенному огорчению, посторонним телом, они меняли свои физические характеристики, поддерживали приобретенную воспалительную реакцию; продолжительность функционирования протезов из полимеров приносила вред живому организму, в научной мед литературе возникли сведения о канцерогенной угрозы полимеров. Потому стали уделять больше внимания рассасывающимся материалам, которые в процессе регенерации равномерно замещались своими тканями живого организма.
1. Сухожилия, соединительная ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология), концевая структура поперечнополосатых мускул, при помощи которой они прикрепляются к костям скелета.
Сухожилие состоит из малогабаритных параллельных пучков коллагеновых волокон, меж которыми размещены ряды фиброцитов (тендоцитов). Почаще в формировании сухожилий участвует коллаген типа I, также встречаются волокна коллагена типов III и V. Пучки коллагена удерживаются вкупе протеогликанами. Параллельно ходу коллагеновых волокон размещены кровеносные сосуды, имеющие поперечные анастомозы. Благодаря собственной структуре сухожилия имеют высшую крепкость и низкую растяжимость.
Форма сухожилий различна — от цилиндрической (почаще у длинноватых мускул) до плоской, пластинчатой (апоневрозы широких мускул).
В соединительной ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) различают: МЕЖКЛЕТОЧНОЕ (ОСНОВНОЕ) ВЕЩЕСТВО, КЛЕТОЧНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ, ВОЛОКНИСТЫЕ СТРУКТУРЫ (коллагеновые волокна). Изюминка: межклеточного вещества еще больше, чем клеточных частей.
Фибриллярный белок коллаген составляет приблизительно третья часть всех полипептидов в организме звериных и человека [M.E. Nimni., 1988]. В сухожилиях содержание коллагена добивается 94, в коже — до 75, в костной ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) — около 50%. Коллаген характеризуется высочайшей степенью молекулярной упорядоченности и кристалличности.
В тканях подавляющая часть коллагена находится в составе коллагеновых волокон. В образовании их из фибрилл учавствуют протеогликаны и структурные гликопротеины, играющие роль интерфибриллярного цементирующего вещества, потому нужно дифференцировать коллаген как биохимическое понятие (молекулы, полимеризирующиеся в фибриллы) и гетерогенное с хим точки зрения коллагеновое волокно как морфологическое понятие. В биохимической и морфологической литературе о коллагене в одни и те же определения часто вкладывают различное содержание.
1.1 Молекулярная структура и типы коллагена
Главный структурной единицей коллагена являются стержнеобразные молекулы тропоколлагена, состоящие из 3-х спирализованных полипептидиых цепей, именуемых ?-цепями, которые скручены меж собой в одну общую спираль и стабилизированы водородными связями. Молекула коллагена имеет относительную молекулярную массу 300 000 дальтон, длину 280 нм и толщину 1,4 нм. Любая ?-цепь содержит в среднем около 1040 аминокислотных остатков. Отличительной индивидуальностью коллагена является присутствие оксипролина и оксилизина (хим маркеров коллагена), отсутствие триптофана, низкое содержание тирозина и метионина, высочайшее содержание глицина (около трети аминокислот), также пролина и оксипролина (четверть). Концевые участки а-цепей на N- и С-концах молекулы (телопептиды) имеют хороший от главный части аминокислотный состав. Они не содержат пролина и оксипролина и не имеют глицина в каждой третьей позиции и потому не образуют тройной спирали. Было показано [Wess T.J., Hammersley A.P., Wess L., Miller A., 1995], что структура коллагена формируется методом параллельной укладки трипептидных молекул тропоколлагена с продольным сдвигом на ~1/4 их длины. В продольном направлении (ось c структуры коллагена) концевые С- и N_группировки примыкающих трехспиральных молекул не соприкасаются, а величина промежутков, либо ?щелей?, составляет около 340 A в длину. Распределение схожих ?вакансий? поперечным сечением около 15 A в супрамолекулярной структуре коллагена является строго упорядоченным, что проявляется в форме соответствующей поперечной исчерченности коллагена с периодом с0 = 640 A, видимой на электронно-микроскопических снимках [2-4]. При окрашивании ?плотные? участки остаются светлыми, тогда как вакансионные, либо ?рыхловатые?, участки окрашиваются в черный цвет. Таковым образом, в направлении оси с в коллагене наблюдается постоянное чередование светлых, либо упорядоченных, участков размером 300 A и черных, либо разупорядоченных, (рыхловатых) участков размером 340 A, включающих обозначенные выше молекулярные вакансии, либо ?щели?.
Иммунологические исследования проявили наличие в молекуле коллагена 3-х разных групп антигенных детерминант: 1) терминальных, находящихся в телопептидах, 2) спиральных, локализующихся на поверхности молекул, и 3) центральных, находящихся в а-цепях и освобождающихся при частичной либо полной денатурации коллагена, т.е. при распаде трехспиральной спирали на отдельные цепи [Timpl R., 1976].
Важным достижением крайних лет является открытие гетерогенности коллагена. Из различных тканей выделены четыре на генном уровне разных типа коллагена. Они различаются композицией в трехцепочечной молекуле 5 ?-цепей [«1 (1); ?2; ?l(II), ?l(III) и ?l(IV)], которые кодируются разными генами и имеют некие индивидуальности первичной структуры [Trelstad R.L., 1974; 1977; Epstein E.H. et al., 1975; Gay S., Miller E.J., 1978]. Распределение типов коллагена в тканях приведено в табл. 5, составленной по данным биохимического анализа. Иммунологические отличия коллагена различных типов дозволили в крайние годы благодаря иммуноморфологическим способам с внедрением типоспецифических одной а2 цепи. Коллаген II типа [три ?l (II) цепи] выделен сначало из хрящевой ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология), но потом найден в стекловидном теле и остальных тканях глаза. P. Smith и соавт. (1976) проявили, что он синтезируется тканях, что и тип I в разных пропорциях с крайним. больше всего его в аорте и кишечном тракте, по-видимому, в связи с наличием там гладких мускул, которыми он синтезируется вместе с коллагеном типа I [Layman D.L. et al., 1977], также в строме внутренних органов, что разъясняется наличием ретикулиновых волокон, состоящих из коллагена III типа [Wick G. et al., 1978]. Коллаген IV типа, состоящий из 3-х al (IV) — цепей, выделен из базальных мембран и капсулы хрусталика [Kefalides N. А., 1975].
В истинное время обнаружены определенные индивидуальности коллагенов различного типа [Miller A., 1976; Trelstad R.L., 1977; Fessler J.H., Fessler L.J., 1978]. Коллагены III и IV типов различаются наиболее высочайшей степенью гидроксилирования пролина, также содержат цистин, по этому способны создавать доп дисульфидные связи. Тип II и в особенности IV тип содержат существенно больше оксилизина и углеводных остатков, что, может быть, выравнивает комплекс коллагенов с протогликанами. В коллагене IV типа молекулярная масса а-цепей выше, чем в остальных типах (120 000-180 000 дальтон), что расценивается как отсутствие отщепления концевых пептидов проколлагена, препятствующее образованию в базальных мембранах фибрилл с обычной периодичностью [Minor R.R. et al., 1975].
Следует указать также, что, кроме макрогетерогенности, существует и микрогетерогенность коллагена, т.е. наименее значительные отличия снутри типов в степени гидроксилирования пролина и лизина, содержании разных аминокислот и углеводных остатков [Prockop D. et al., 1976]. Это соединено с тканевой спецификой коллагена. к примеру, есть подвиды II типа для гиалинового и фиброзного хряща, I типа для кожи, сухожилия, роговицы, две разновидности IV типа [Bailey А. et al., 1979].
По-видимому, макро- и микрогетерогенность первичной структуры коллагена играет важную биологическую роль, определяя индивидуальности коллагеновых волокон на наиболее больших структурных уровнях и нрав взаимодействия их с иными компонентами соединительной ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) и с клеточными’ элементами, что в совокупы описывает многофункциональные индивидуальности разновидностей соединительной ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология).
1.2 Растворимые фракции и агрегация коллагена в фибриллы
Опосля секреции в межклеточное место и отщепления, пропептидов молекулы коллагена агрегируют в фибриллы, являющиеся первичной формой надмолекулярной структуры коллагена. Так как молекулярный механизм фибриллообразования в Организме не достаточно доступен для исследования, главные догадки получены на основании исследования агрегации молекул при осаждении их из смесей коллагена.
Типы растворимого коллагена можно поделить на две главные группы. К первой группы (нативные смеси) относятся растворимые фракции, получаемые прямой экстракцией из соединительной ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) юных звериных, у каких коллаген еще недостаточно скреплен межмолекулярными связями. Различаются кислоторастворимый и нейтральносолерастворимый коллаген, экстрагируемые соответственно кислыми буферами и нейтральными солевыми смесями. Ко 2-ой группы относятся смеси зрелого, нерастворимого коллагена, приобретенные опосля подготовительной ферментативной, хим либо механической обработки ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология) (солюбилизированный коллаген). Эта категория смесей была применена нами для сотворения целительных препаратов из коллагена.
Зависимо от критерий осаждения (рН, ионная сила, температура и др.) из раствора коллагена можно получить разные типы фибриллярных структур:
1) фибриллы с неупорядоченной структурой без периодичности;
2) кристаллы длиной 280 нм (SLS_сегменты), представляющие из себя параллельную агрегацию молекул бок в бок. В SLS обусловили 117 поперечных асимметричных полос, которые, подобно «отпечатку пальцев», охарактеризовывают распределение полярных и неполярных аминокислотных остатков;
3) фибриллы FLS с периодом 280 нм, в каких молекулы также агрегируют параллельно, но нацелены в примыкающих слоях в различные стороны (опозиционно), так что N_концы соединены с С-концами; Рис. 27. Вероятные пути внутриклеточного транспорта и секреции коллагена.
4) фибриллы нативного типа (т.е. надлежащие тканевым) с периодичностью 64-67 нм. Главный период в этих фибриллах состоит из светлой А-зоны и черной В-зоны, в особенности ясно видимыми при негативной расцветке фосфорно-вольфрамовой кислотой. Опосля положительного контрастирования в периоде находится 12 черных и 12 светлых доп полос, отражающих первичную структуру молекулы [Kuhn К., 1974].
Для исследования фибриллогенеза в организме наибольшее наличие периодичности. Начиная с 50_х годов был выдвинут ряд разных гипотез, из которых наибольшее
Позднее было установлено, что длина молекулы кратна не 4, а 4,4D (D — длина периода 64 нм). Молекулы, упакованные в фибриллу, в линейной проекции разбиты промежутком 0,6 D (зона «пустоты»), а примыкающие параллельные ряды молекул смещены относительно друг друга на величину периода D, при этом они перекрывают концы параллельных им молекул на 0,4 D (зона «перекрытий»). Таковым образом, вдоль фибриллы чередуются зоны «пустот» и «перекрытий», которые на плохо окрашенных электронограммах отражаются соответственно в черных и светлых полосах периода [Ktihn К., 1969; BrunsR. R., Gross J., 1974; Miller A., 1976]. Вся структура стабилизована за счет поперечных связей меж молекулами. Описанная картина укладывается в двухмерную модель упаковки молекул коллагена, исследование же трехмерной структуры связано со значительными трудностями. одной из более общепризнанных является модель J.W. Smith (1968), по которой 5 молекул, сдвинутых меж собой на ID, соприкасаясь боковыми поверхностями, уложены в цилиндрический филамент, при этом 5-ая молекула сдвинута по отношению к первой на 4D. Таковой филамент вырастает в длину за счет присоединения новейших молекул, а в ширину фибрилла вырастает лишь методом соединения филаментов меж собой. Снутри филамента молекулы свернуты в спираль [Piez К.А., 1975]. Близка к этому и модель A. Veis н соавт. (1967), в какой предусматривается, что филаменты состоят из 4 молекул коллагена. Необходимо подчеркнуть, что поперечник филаментов по сиим моделям (3,5 нм в сухом и 5 нм во мокроватом состоянии) совпадает с размерами малых филаментов (прото- либо микрофибрилл), найденных снутри тканевых коллагеновых фибрилл [Olsen В. R., 1963; Doyle В.В. et al., 1974; Brims R.R., 1976], также в поперечно исчерченных филдментарных агрегатах (см. раздел 2.2.6). По данным М. Bouteille, D. С. Pease (1971), J.H. Lillie и соавт. (1977), при «инертной» дегидратации, действии мочевины либо гуанидинхлорида происходит диссоциация фибрилл на филаменты шириной 3,5-4 нм, при этом выявляется спиралевидное скручивание этих филаментов. Спиральная структура коллагеновых фибрилл находится также при применении способа замораживания — раскалывания [Rayns R. et al., 1974; Belton J. С. et al., 1975], возможно, в итоге использования агентов, разрушающих водородные связи. В неких вариантах спиралевидная структура фибрилл отмечается и при обыкновенной заливке, к примеру в опухолях [Manabe Т., Kajikkawa V., 1976]. Подобные конфигурации были обнаружены в склере при резко выраженной близорукости. В заключение необходимо подчеркнуть, что пока не существует общепризнанной модели трехмерной структуры фибриллы, которая вполне отвечала бы рентгеноструктурным и электронно-микроскопическим данным. Дискуссируются способности тетрагональной и гексогональной сетки, цилиндрической (в форме вставленных друг в друга цилиндров из слоев молекул) и спиральной (закрученной в рулон) упаковки молекул в фибриллу [Miller A., 1976]. 1.3 Данные ЯМР о структуре связанной воды в коллагене при помощи сканирующей калориметрии
В состав нативного (неповрежденного) коллагена заходит сплетенная вода, составляющая около 2/3 (либо ?66%) от полной массы сухожилия. Установлено, что вода играет существенную роль в механизме самосборки молекул коллагена и образования фибрилл в цитоплазме коллагеноцитов, также в механизмах биохимической активности и функционировании коллагена во внеклеточном пространстве живого организма [1]. Но до реального времени принципный нрав гидратной структуры коллагена остается невыясненным. По данным 2Н ЯМР спектроскопии сухожилий хвоста крысы, обогащенной тяжеловодородной водой 2H2O, было установлено, что в ?плотных? участках структуры коллагена молекулы связанной воды (2Н2О) характеризуются константами квадрупольного взаимодействия (ККВ) ядер 2Н ~3 кГц (в интервале от +20° до ?+5 °C).
При отрицательных температурах ККВ растут, достигая значений ~8 кГц при -10 °C, и тенденция к повышению ККВ сохраняется при предстоящем снижении температуры. Относительно малая величина ККВ и ее плавные конфигурации типичны для действий диффузионной подвижности молекул воды в нанопористых системах цеолитового типа. Фазовые переходы в схожих системах, как правило, являются переходами типа порядок-беспорядок (близкими к фазовым переходам второго рода) и не сопровождаются резкими термическими эффектами.
В то же время по данным 2Н ЯМР аква подсистема коллагена в областях ?щелей? характеризуется весьма малыми значениями ККВ (близкими к нулевым), что показывает на сильную раз-упорядоченность подсистемы связанной воды в ?рыхловатых? участках структуры коллагена. Найдено также, что в округи температуры замерзания воды (?273 K) скачкообразным образом меняется диапазон 2Н ЯМР сухожилия. Насыщенная центральная линия, относимая нами к рыхловатым участкам структуры коллагена, становится ненаблюдаемой, что может указывать на фазовый переход первого рода. Этот факт косвенно свидетельствует в пользу модели, в согласовании с которой ?рыхловатые? участки структуры коллагена представляют собой тектогидрат, либо структуру, включающую непрерывный трехмерный основа из молекул воды с тетраэдрической координацией, соответствующей для льда и клатратных гидратов. В этом случае значение ККВ и ширина диапазона 2Н ЯМР должны возрастать на два порядка по сопоставлению с комнатной температурой, соответственно амплитуда сигнала обязана свалиться на два порядка, что согласуется с тестом. Но для прямого доказательства схожей модели расположения молекул воды нужно получить термодинамические свойства данного фазового перехода.
В данной работе был проведен анализ величины сокрытой теплоты фазового перехода в сухожилиях хвоста крысы с внедрением способа сканирующей калориметрии. Для исследовательских работ были взяты эталоны сухожилия RTT экспериментальных звериных полосы ?Вистар?, содержавшихся на обычном питании. возраст крыс составлял 6 месяцев, численность в группе — 3 звериных. Эталоны волокон сухожилий весом 100-150 мг изымали конкретно перед исследованием. Измерения проводили в интервале от комнатной температуры (+20 °С) до -30 °С, скорость конфигурации температуры 3 град./мин. при использовании автоматического калориметра ДСК_204 конторы Netzsch (Германия). Результаты измерений представлены в таблице.
Приобретенные данные можно сопоставить со справочными параметрами для сокрытой теплоты плавления незапятнанного льда: Qпл(лед) = 333,5 Дж/г [6]. При сопоставлении следует учесть, что в сухожилиях содержание коллагена добивается 94%, а содержание воды в нативном коллагене составляет ?66%. Распределение связанной воды меж плотными и рыхловатыми участками достоверно не установлено, но по данным ЯМР 2Н [5] в ?рыхловатых? участках коллагена содержится приблизительно половина общего содержания воды в сухожилии. Таковым образом, если структура подсистемы молекул воды в вакансионных участках нативного коллагена при отрицательных температурах соответствует структуре тектогидрата (клатратоподобного либо льдоподобного типа), то ожидаемая сокрытая теплота фазового перехода в данной подсистеме обязана составить
Qпер = ~(0,66?0,5?0,94)?Qпл(лед) = ?94 Дж/г,
что находится в неплохом согласии с измеренными значениями для 3-х образцов.
На кривых остывания наблюдаются пониженные значения Qпер, что является следствием значимого переохлаждения образцов при снижении температуры. Данный эффект дозволяет получить оценочное воды, испытывающей фазовый переход. В рамках обсуждаемой модели среднее температуры переохлаждения ?Т = (11,5 ± 0,7)° соотношением
?Qпep = ~(0,6?0,5?0,94)??ср?T,
где ?ср — разность меж теплоемкостью воды и льда. Если характеристики аква подсистемы, испытывающей фазовый переход в коллагене, соответствуют свойствам вольной воды и льда, то ?ср = 2,062 Дж/г (поблизости 0 °С [6]). Отсюда рассчитанная величина ?Qпер = ?6,69 Дж/моль; пониженное по сопоставлению с тестом воды и многофункциональных группировок в белковой структуре. Таковым образом, на высококачественном уровне величина сокрытой теплоты фазового перехода находится в согласии с моделью, согласно которой характеристики приблизительно половины связанной воды в структуре коллагена близки к свойствам вольной (либо большой) воды. Завышенные температура плавления льда связанной воды в коллагене и разница значений теплоемкости ?ср могут указывать на некую взаимосогласованность структур воды и фибриллярного белка, может быть, клатратного типа.
2. методы иммобилизации коллагена из разных органов и тканей. Возможность внедрения в иммобилизации коллагенов сухожилий
Для растворения коллагена употребляются разные методики, но большая часть из их основано на растворении в уксусной кислоте.
Энуклеированные замороженные глазные яблоки свиньи (-20°) размораживают при комнатной температуре, склера отделяется от остатков мускул, связок и пигмента и промыта прохладной водой. Приобретенная часть склеры, перебегают в раствор. Потом склеру отделяют от раствора на воронке Бюхнера и промывали 10 л дистиллированной воды. Для нейтрализации щелочи ткань (мед. система клеток и межклеточного вещества, объединённых общим происхождением, строением и выполняемыми функциями) обрабатывают 2%-м H3BO3 в течение 40 мин при перемешивании на магнитной мешалке. Обработку склеры веществом борной кислоты повторяют 4 раза до установления pH раствора 6.0. Опосля нейтрализации щелочи склеру 4 раза отмывают от H3BO3 и Na2SO4 дистиллированной водой (5 л), всякий раз в течение 40 мин при 20° при неизменном перемешивании на магнитной мешалке. Степень отмывки определяют по полному удалению (SO4) — (реакция с BaCl2). Получение раствора коллагена. К отмытой склере добавляют равное по размеру количество 0.3 M CH3COOH и выдерживают полученную гелеобразную полупрозрачную массу в течение 7-8 сут при 4° и слабеньком перемешивании. В этих критериях коллаген перебегает в раствор, и склера растворяется фактически без остатка. Приобретенный раствор гомогенизируют и фильтруют через стеклянный фильтр с размером пор 160 мкм, используя водоструйный насос. Концентрация коллагена в приобретенном растворе (по сухому остатку) составляет 2% по массе. часть приобретенного раствора разбавляли 0.2 М Na_ацетатным буфером с pH 3.44 до концентрации 8.6?10-6 и 8.6?10-7 М.
Определение концентрации. Содержание коллагена в пробах определяют измененным способом Лоури [18] с помощью реактива Фолина-Чиокалто. В качестве эталона употребляют раствор желатины известной концентрации. Регистрацию проводят спектрофотометрически при ? = 750 нм. Обскурантистская смесь состоит из 0.04 М CuSO4, 0.11 М Na2C4H4O6, 0.05М Na2CO3, 0.4 М NaOH, реактива Фолина-Чиокалто и коллагенового раствора. способ основан на регистрации окрашенного соединения, образующегося при содействии белка с реактивом Фолина [19].
Известен метод получения коллагена по патенту США (Соединённые Штаты Америки — оболочки сухожилий;
— размельчают материал;
— промывают размельченный материал физиологическим фосфатным буфером (PBS) (2 г хлористого калия КС1, 2 г однозамещенного фосфорнокислого калия KH2РО4, 80 г. хлористого натрия и 79,3 г двузамещенного фосфата натрия на 1 л раствора), рН 6,5-8,5, разбавленным 1:3-1:1; более эффективен разбавленный 1: 3 PBS с ионной силой 0,05 М (0,05 молярного) NaCl и 0,0022 М Na2HPO4 (6_кратная промывка по 2 ч);
— экстрагируют коллаген слабенькой кислотой (0,5-2 М уксусная кислота); желательно 0,5 М уксусная кислота с добавкой 4 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА);
— осаждают коллаген при помощи NaCl (0,6-1,8 М);
— выделяют осадок и растворяют его в уксусной кислоте;
— переводят раствор диализом в 0,01 М уксусную кислоту.
Данные методики не противоречат целям исследования ввиду того, что и склера и сухожилия построения одним и этим же типом коллагена, т.е. все обозначенные типы взаимодействия белка с реактивами применимы в обоих вариантах иммобилизации.
Заключение
Принципиальной индивидуальностью коллагена и остальных био полимеров является их способность создавать комплексы с разными фармацевтическими субстанциями для направленного деяния: усиливающих свертывание крови (внутренней средой организма человека и животных), стимулирующих восстановление соединительной ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология), противобактериальных и др. Таковым образом, открываются широкие перспективы для целительных препаратов пролонгированного воздействия, при этом коллаген либо остальные биополимеры играют для фармацевтического средства роль депо. Так, введение коллагеновых препаратов, содержащих линкомицин, показало, что антибиотик сохраняется в окружающих тканях 23-25 суток. На этом принципе на данный момент основаны лекарства с увеличенными сроками бактериального действия на микробную флору, применяющиеся при инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека).
Способность коллагена создавать комплексы с гепарином — веществом, препятствующим свертыванию крови (внутренней средой организма человека и животных) и появлению тромбов, закупоривающих просвет сосуда, послужила основанием для сотворения сосудистого протеза с антикоагулянтными — противосвертывающими — качествами. Таковой комбинированный сосудистый протез представляет собою тканую либо вязаную синтетическую трубку, поры которой заполнены коллагенгепариновой пленкой. Подобные имплантаты можно применять для замещения не только лишь пораженных в отличие от вен по которым образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>кровь (внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) движется к сердечку»> несущий кровь от сердца к органам (артерия — сосуд, несущий кровь от сердца к органам, в отличие от вен по которым медицины является отсутствие токсических и канцерогенных параметров, слабенькая антигенность, высочайшая механическая крепкость и устойчивость к тканевым ферментам, регулируемая скорость лизиса в организме, способность создавать комплексы с на биологическом уровне активными субстанциями, стимуляция регенерации собственных тканей организма.
Перечень литературы
1. В.В. Серов, А.Б. Шехтер — Соединительная объединённых общим происхождением (многофункциональная морфология и общая патология) — М, 1981
2. журнальчик структурной химии — С.П. Габуда, АА Гайдаш, В.А. Дребущак, С.Г. Козлова — Данные ЯМР о структуре связанной воды в коллагене при помощи сканирующей калориметрии — том 46, №6, 2005
3. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ — Л.В. Кухарева, Б.А. Парамонов, И.И. Шамолина, Е.Г. Семенова — метод получения коллагена для исцеления патологий тканей организма — СПб, 2003
4. Патент США (Соединённые Штаты Америки — медицина, 1974.
7. Никитин В.Н., Перский Е. Э» Утевская Л.А. Возрастная и эволюционная биохимия коллагеновых структур. — Киев.: Наукова думка, 1977.
8. Хилькин А.М., Шехтер А.Б., Истранов Л.П. Коллаген и его применение в медицине._М.: Медицина, 1976.
9. Bazin S., Lelous M., Delannay A. Collagen in granulation tissue. — Agent and Act., 1976, v. 6, p. 272-275
10. Bruns R. Supramolekular structure of polymorphic collagen fibrills. — J. Cell Biol., 1976, v. 68, p. 521-538
11. Gay S., Muller P., Meigel W., Kuhn K. Polymorphic des Kollagens: Neue Aspekte fur die Structur und Funktion des Bindegewebe.-Hautarzt, 1976, v. 27, p. 196-205
12. Gross J. Collagen biology: structure, degradation, and disease. — Harvey Lectures, 1974, v. 68, p. 351-432
13. Gross J. Aspects of the animal collagenases. — In: Biochemistry of collagen. New York, 1976, p. 275-317
14. Kefalldes N. Basement membranes: structural and biosynthetic considerations. — J. invest. Derm., 1975, v. 65, p. 85-92
15. Miller A. Molecular packing in collagen fibrils. — In: Biochemistry of collagen. New York, 1976, p. 85-136
16. Minor R., Clark C, Kefalides N. Synthesis and deposition of basement membrane procollagen. — J. Cell. Biol., 1975, p. 67, part 2, p. 287-899.
17. Piez K — The regulation of collagen fibril formation. — In: Extracellular matrix influences on gene expression. New York, 1975, v. 231-237.
18. Ratnachandran G., Ratnakrishnan C. Molecular structure of collagen. — In: Biochemistry of Collagen. New York, 1976, p. 45-84.
19. Reddi A. Collagen and cell differentiation. — In: Biochemistry of collagen. New York, 1976, p. 449-478
20. Trelstad R. Basement membrane collagens: isolation by heat gelation fractionation. — Upsala J. Med. Sci., 1977, v. 82, p. 157-162.
21. Weiss J. Enzymic degradation of collagen. — Intern. Rev. Connect. Tissue Res., 1976, v. 7, p. 101-157.