Загрузка...
Учебная работа. Валидационная оценка методов качественного и количественного анализа ингредиентов лекарственного средства
Пятигорский филиал муниципального экономного образовательного учреждения высшего проф образования
Волгоградский муниципальный мед институт
Министерства здравоохранения Русской Федерации
Курсовая работа
Валидационная оценка способов высококачественного и количественного анализа ингредиентов фармацевтического средства Папаверина гидрохлорида 2% раствора для инъекций
Исполнитель: студент 5 курса 16 группы
Семенов Сергей Юрьевич
Управляющий: к. ф. н., старший педагог
А.Г. Курегян
Пятигорск, 2012
Содержание
Введение
Глава 1. анализ папаверина гидрохлорида в субстанции и в фармацевтических формах
1.1 методы анализа папаверина гидрохлорида в субстанции
1.1.1 Подлинность
1.1.2 Посторонние примеси
1.1.3 Количественное определение
1.2 способы анализа папаверина гидрохлорида в фармацевтических формах
1.2.1 Папаверина гидрохлорид в растворе для инъекций
1.2.2 Папаверина гидрохлорид в пилюлях
1.2.3 Папаверина гидрохлорид в суппозиториях
Глава 2. Валидация методик анализа папаверина гидрохлорида в растворе для инъекций 2%
2.1 Изготовление модельной консистенции
2.2 Линейность (linearity)
2.3 Корректность (accuracy)
2.4 Прецизионность (precision)
Перечень литературы
Введение
— это экспериментальное подтверждение того, что методика годна для решения предполагаемых задач.
Необходимость валидации всех аналитических методик не вызывает колебаний — это один из частей валидации всего процесса производства фармацевтических средств. Не считая этого, с практической точки зрения, валидация аналитических методик дает ряд существенных «вторичных» нужных эффектов.
Во-1-х, при проведении валидации в процессе разработки новейших методик можно вовремя выявить их недочеты и на ранешних стадиях значительно сделать лучше методику. Во-2-х, при хорошо и отменно выполненной работе возникает уверенность и в методике, и в качестве анализируемого продукта. В третьих, в процессе валидации непременно принимают практическое роль разные аналитические лаборатории. Практика валидационных тестов дает осознание сущности методики и понимание необходимости серьезного соблюдения ее характеристик. В итоге, при следующей эксплуатации валидированной методики существенно понижается возможность ошибок.
корректность (accuracy) —
близость получаемых результатов к настоящему значению, оценивается по погрешности определения;
специфика (specificity) — Расположено на /
способность определять буквально и селективно аналит (определяемое вещество) в присутствии компонент, которые могут ожидаться в матрице эталона (примеси, схожие хим соединения, продукты разложения, ингредиенты один отдельный признак, частое проявление какого-либо одной групп), также оценивается по погрешности определения;
точность (precision) — Расположено на /
мера сходимости результатов при неоднократном повторении аналитической процедуры.
Точность методики определяется 2-мя параметрами: сходимость и воспроизводимость.
сходимость (repeatability) — Расположено на /
близость результатов личных тесто в, когда процедура анализа повторяется на бессчетных пробах гомогенного эталона схожих проб в обычных критериях проведения анализа (время от времени переводится как повторяемость), аспектом является обычное отклонение параллельных определений;
воспроизводимость (reproducibility) — Расположено на /
степень сходимости результатов, приобретенных анализом одних и тех же образцов при разных обычных критериях теста — различные лаборатории, химики-аналитики, инструменты, партии реактивов, температура окружающей среды, различное время проведения анализов и т.п., также оценивается по обычному отклонению параллельных определений;
линейность (linearity) — Расположено на /
способность показать, что результаты теста сходу либо опосля определенной математической обработки пропорциональны концентрации аналита в образчике в границах данного интервала, определяется математической обработкой результатов теста образцов с разными концентрациями аналита в границах интервала, установленного для данного способа. Обычно делается расчет полосы регрессии способом меньших квадратов для результатов с разными концентрациями аналита. Наклон регрессионной полосы и его вариация дает математическую степень линейности. Для оценки степени линейности должны быть рассчитаны коэффициент корреляции, перекрывание оси Y, наклон регрессионной полосы и остаточная сумма отклонений;
интервал способа (range) оценивается проверкой того, как данный аналитический способ обеспечивает точность, корректность иРазмещено на /
линейность при определении образцов, содержащих аналит на границах интервала и снутри его. Определяется в процессе проведения испытаний по любому из перечисленных характеристик;
предел обнаружения (limit of Расположено на /
detection) — параметр предельных тестов — малая концентрация аналита в образчике, которая быть может найдена, но не определена количественно в критериях анализа. Определение предела обнаружения варьируется зависимо от типа способа (инструментальный либо неинструментальный). Для инструментальных способов в главном определяют отношение сигнал/шум либо определяют величину фонового сигнала, опосля что рассчитывают малый уровень (обычно принимают отношение сигнал/шум = 2:1 либо 3:1). Этот предел позже оценивается анализом ряда образцов с содержанием аналита близким к лимиту (настоящих либо специально приготовленных). Для неинструментальных способов предел обнаружения определяется анализом образцов с известными концентрациями аналита и установлением малого уровня аналита, при котором он быть может достоверно найден;
количественного определения (limit of Расположено на /
quantitation) — параметр количественного определения для низших уровней содержания веществ в пробе образцов, таковых как примеси либо продукты разложения. Это малая концентрация аналита в образчике, которая быть может определена с применимой точностью в критериях анализа. Выражается концентрацией аналита в образчике. Определение, так же как и в случае предела обнаружения, различается для инструментальных и неинструментальных способов. Процедура подобна, обычно употребляют
устойчивость (robustness) — Расположено на /
мера возможности не подвергаться действию маленьких, но запредельных отклонений характеристик методики — указывает точность и корректность в обычных критериях. Определяется проведением теста корректности при маленьких отклонениях характеристик методики либо параметров анализируемого объекта. Рассчитывается погрешность по сопоставлению с плодами, приобретенными в обычных критериях. Если наблюдается воздействие характеристик методики, это оговаривается в тексте методики.
Глава 1. анализ папаверина гидрохлорида в субстанции и в фармацевтических формах
Папаверин является алкалоидом, в первый раз выделенным из опия в 1884 г. Мерком. По хим структуре он относится к производным бензилизохинолина. В 1910 г. был осуществлен синтез папаверина. Природный и синтетический папаверины схожи в фармакологическом отношении.
Хим заглавие: 1-(3,4-диметоксибензил)-6,7-диметоксиизохинолин
Папаверина гидрохлорид субстанция представляет собой белоснежные либо практически белоснежные кристаллы либо белоснежный либо практически белоснежный кристаллический порошок без аромата[1]. Инъекционный раствор — прозрачная тусклая либо слегка желтая жидкость.
По физико-химическим свойствам папаверина г/хл является солью слабенького азотистого основания, владеет качествами восстановителя, что разъясняется наличием в структуре 2 ароматичных фрагментов, связанных метиленовой группой, также 4 метоксидных групп.[4] Т.пл. 147°C.
Папаверин растворим в хлороформе, равномерно растворим в воде, не много растворим в 96% этаноле, фактически нерастворим в эфире.[2]
1.1 методы анализа папаверина гидрохлорида в субстанции
1.1.1 Подлинность
Подлинность субстанции можно определять как хим, так и физическим способами.
Хим реакции подлинности основаны на его свойствах.
Для идентификации употребляют реакции со особыми реактивами на алкалоиды, действие которых основано на окислении папаверина:
· Под действием концентрированной азотной кислоты папаверина гидрохлорид приобретает желтоватое окрашивание, которое перебегает в оранжевое при нагревании на водяной бане
· Нагревание его с концентрированной серной кислотой приводит к возникновению фиолетового окрашивания.
· Окрашенные продукты также образуются при содействии с реактивом Марки. При следующем добавлении бромной воды и раствора аммиака возникает фиолетовый осадок, который опосля растворения в этаноле окрашивает раствор в фиолетово-красный цвет (реакция является специфичной для папаверина и употребляется в его фотоколориметрическом определении).
· Положительную реакцию дает папаверина гидрохлорид с реактивом Фреде, при его обработке уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой опосля нагревания на водяной бане возникает желтоватое окрашивание с зеленоватой флуоресценцией.
· С перманганатом калия в кислой среде папаверина гидрохлорид образует продукты, флуоресцирующие голубым светом.
Не считая того папаверина гидрохлорид дает некие реакции с осадительными реактивами:
v Бромная вода выделяет из раствора желтоватый осадок.
v Спиртовой раствор йода — красные кристаллы.
v С пикриновой кислотой появляется желтоватый осадок.
v Также выпадают осадки под действием реактивов Драгендорфа и Майера.
Субстанция дает соответствующую реакцию на хлориды[1].
Физико-химические способы:
ь -спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать рисунку диапазона папаверина гидрохлорида.[1]
ь -спектр поглощения 0,0005% раствора субстанции в 0,01 М растворе хлористоводородной кислоты в области от 230 до 270 нм должен иметь максимум при 251 нм[1].
ь УФ -спектр поглощения 0,0025% раствора субстанции в 0,01 М растворе хлористоводородной кислоты в области от 270 до 350 нм должен иметь максимумы при 285 и при 285нм и 09нм[1].
1.1.2 Посторонние примеси
Содержание сторонних примесей устанавливается способами тонкослойной хроматографии либо ВЭЖХ.
ТСХ. 0,25 г субстанции растворяют в 5 мл хлороформа.
0,5 мл испытуемого раствора разбавляют хлороформом до 100мл.
На линию старта пластинки со слоем силикагеля 60 F254 наносят 10 мкл (500 мкг) испытуемого раствора, 10 мкл (2,5 мкг) и 2 мкл (0,5 мкг) раствора сопоставления. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со консистенцией толуол — этилацетат — диэтиламин (7:2:1) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 20 минут и просматривают в УФ -свете при 254нм.
Пятно хоть какой сторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора по совокупы величины и интенсивности поглощения не обязано превосходить пятно на хроматограмме раствора сопоставления (0,5 мкг, не наиболее 0,1%). Суммарное содержание примесей, оцененное по совокупы величины и интенсивности поглощения их пятен на хроматограмме испытуемого раствора в сопоставлении с пятном на хроматограмме раствора сопоставления (2,5 мкг), не обязано превосходить 0,5%. Пятно на старте в расчет не принимают.
Результаты тесты числятся достоверными, если на хроматограмме раствора сопоставления (0,5 мкг) верно видно пятно.
1.1.3 Количественное определение
Папаверина гидрохлорид количественно определяют хим и физико-химическими способами:
Хим способы:
1. Способом неводного титрования в консистенции муравьиной кислот и уксусного ангидрида (фармакопейный способ — ФС 42-3149-95). Около 0,3 г продукта (четкая навеска) растворяют в 1мл кислоты муравьиной, добавляют 10 мл ангидрида уксусного и титруют 0,1 М веществом кислоты хлорной до ярко-желтого окрашивания (индикатор — раствор кристаллического фиолетового 0,15 мл). Параллельно проводят контрольный опыт.
2. Способом нейтрализации в спиртовой среде (фармакопейный способ — ГФ Х, с 356) Около 0,5 г продукта (четкая навеска) растворяют в 50 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды, добавляют 25 нейтрализованного по фенолфталеину спирта и титруют веществом натрия гидроксида 0,1 моль/л до розового окрашивания (индикатор фенолфталеин).
3. Аргентометрическим способом по хлорид-иону.
Физико-химические способы:
1) Экстракционно-фотометрическое определение. Основано на измерении светопоглощения всеохватывающего соединения с изотиоцианатом аммония и хлоридом железа(III), а так же на избирательном содействии с красителем оранжевым Ж.
2) Спектрофотометрическое определение. Проводят в тех же растворителях и при тех же длинах волн, что и подлинность, содержание рассчитывают по обычному эталону[2].
3) Экстракционно-титриметрическое определение с внедрением в качестве титранта лаурилсульфата натрия.
1.2 способы анализа папаверина гидрохлорида в фармацевтических формах
папаверин примесь хроматография
Папаверина гидрохлорид выпускается в нескольких фармацевтических формах, это пилюли, раствор для инъекций и суппозитории.
1.2.1 Папаверина гидрохлорид в растворе для инъекций
Подлинность:
1. Хим реакции:
o с кислотой азотной концентрированной: 1 мл продукта помещают в фарфоровую чашечку, выпаривают досуха, охлаждают, добавляют 2 капли конц. азотной кислоты; возникает желтоватое окрашивание, которое при нагревании на водяной бане перебегает в оранжевое.
o с серной кислотой концентрированной, кислотой пикриновой, с реактивами Марки, Фреде, Эрдмана, Драгендорфа, Майера.
2. Физико-химические способы:
· УФ -спектр раствора продукта, взятого в той же концентрации, что и для количественного определения в области от 270 до 359 нм, имеет максимумы поглощения при длине волны около 284±1 и 309±1 нм.
Примеси:
Содержание примесей определяют способом тонкослойной хроматографии (не больше 1%).
Количественное определение:
1) Способом УФ -спектрофотометрии в сопоставлении с РСО:
2 мл продукта помещают в мерную пробирку вместимостью 100 мл, доводят размер раствора 0,1 М веществом HCL до метки и перемешивают.
5 мл приобретенного раствора помещают в мерную пробирку на 100 мл, доводят размер раствора 0,1 М веществом HCL до метки и перемешивают.
Определяют оптическую плотность приобретенного раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 309 нм в кювете с шириной слоя 10 мм. Параллельно определяют оптическую плотность РСО папаверина. В качестве раствора сопоставления употребляют 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.
Содержание папаверина г/хл в 1 мл продукта в граммах вычисляют по формуле:
где D1 — оптическая плотность испытуемого раствора;
D0 — оптическая плотность раствора РСО папаверина г/хл;
а 0 — навеска РСО папаверина г/хл в граммах.
2) Способом неводного титрования в консистенции муравьиной кислот и уксусного ангидрида (фармакопейный способ — ФС 42-3149-95).
3) Аргентометрическим способом по хлорид-иону.
4) Способом нейтрализации в спиртовой среде (фармакопейный способ — ГФ Х, с 356).
1.2.2 Папаверина гидрохлорид в пилюлях
Подлинность:
1. Хим реакции
o См
2. Физико-химические способы:
· ИК -спектроскопия (см. в п. 1.1.3.)
· УФ -спектрофотометрия (см. в п. 1.1.3.)
· Хроматография в узком слое сорбента
· Экстракционно-фотометрический способ
Примеси:
Содержание примесей определяют способом тонкослойной хроматографии (см. в п. 1.1.2.).
Количественное определение:
1) Способом УФ -спектроскопии
2) Способом неводного титрования в консистенции муравьиной кислот и уксусного ангидрида (фармакопейный способ — ФС 42-3149-95).
3) Аргентометрическим способом по хлорид-иону.
4) Способом нейтрализации в спиртовой среде (фармакопейный способ — ГФ Х, с 356).
1.2.3 Папаверина гидрохлорид в суппозиториях
Подлинность:
Хим реакции:
o См
Физико-химические способы:
· Одну свечу помещают в пробирку вместимостью 50 мл, добавляют 10 мл воды, нагревают на водяной бане до расплавления, кропотливо взбалтывают, охлаждают до застывания базы и аква слой фильтруют. 2 мл фильтрата помещают в фарфоровую чашечку и выпаривают на водяной бане досуха. К остатку добавляют 8 капель кислоты азотной концентрированной; возникает желтоватое окрашивание, которое при нагревании перебегает в оранжево-красное.
· 2 мл фильтрата дают соответствующую ракцию на хлориды (ГФ XI, вып. 1, с 159)
Примеси:
Содержание примесей определяют способом тонкослойной хроматографии (см. в п. 1.1.2.).
Количественное определение:
1) Одну свечу помещают в пробирку вместимостью 50 мл, добавляют 10 мл воды, нагревают на водяной бане до расплавления, кропотливо взбалтывают, охлаждают до застывания базы и аква слой фильтруют в пробирку для титрования. Промывают пробирку и фильтр 5 мл воды, операцию повторяют снова. К фильтрату добавляют 2-3 капли индикатора фенолфталеина и титруют веществом натрия гидроксида 0,02 моль/л до розового окрашивания. Содержание папаверина гидрохлорида в одной свече обязано быть от 0,018 г до 0,022 г (по среднему результату 3-х параллельных определений).
2) Способом неводного титрования в консистенции муравьиной кислот и уксусного ангидрида (фармакопейный способ — ФС 42-3149-95).
3) УФ -спектрофотометрия
Глава 2. Валидация методик анализа папаверина гидрохлорида в растворе для инъекций 2%
2.1 Изготовление модельной консистенции
Около 0,05 г (четкая навеска) СО папаверина гидрохлорида помещают в мерную пробирку вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и доводят этим же растворителем до метки (раствор А).
2 мл приобретенного раствора переносят в мерную пробирку вместимостью 100 мл и доводят до метки этим же растворителем (раствор Б).
Изучают диапазон поглощения раствора Б на спектрофотометре в области 230 — 270 нм. Раствор имеет максимум при длине волны 251 нм.
2.2 Линейность (linearity)
В мерную пробирку вместимостью 100 мл заносят 0,05 г СО папаверина гидрохлорида растворяют в 50 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и доводят этим же растворителем до метки (раствор А).
В мерные пробирки вместимостью 100 мл поочередно заносят 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0 мл раствора А и доводят до метки этим же растворителем. Получают смеси с концентрацией 0,0005%, 0,001%, 0,0015%, 0,002%; 0,0025%.
Определяют оптическую плотность всякого раствора при длине волны 309 нм в кювете с шириной слоя 1 см. Раствор сопоставления — 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.
Строят градуировочный график зависимости оптической плотности от концентрации, рассчитывают Данные вносят в таблицу 1.
Таблица 1 — зависимость оптической плотности от концентрации
Размер раствора А, мл
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
Концентрация приобретенного раствора в %
0,0005
0,0010
0,0015
0,0020
0,0025
Оптическая плотность
0,098
0,235
0,310
0,425
0,489
2.3 Корректность (accuracy)
Раствор А1 (модельная смесь 1) Точную навеску модельной консистенции 0,375 г помещают в мерную пробирку вместимостью 25 мл, растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят сиим растворителем до метки.
Раствор А2 (модельная смесь 2) Точную навеску модельной консистенции 0,500 г помещают в мерную пробирку вместимостью 25 мл, растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят сиим растворителем до метки.
Раствор А3 (модельная смесь 3) Точную навеску модельной консистенции 0,625 г помещают в мерную пробирку вместимостью 100 мл, растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят сиим растворителем до метки.
Раствор Б1. В мерную пробирку вместимостью 100 мл заносят 2,5 мл раствора А1 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Раствор Б2. В мерную пробирку вместимостью 100 мл заносят 2,5 мл раствора А2 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Раствор Б3. В мерную пробирку вместимостью 100 мл заносят 2,5 мл раствора А3 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Смеси В1, В2, В3 . В три мерные пробирки вместимостью 50 мл заносят по 2 мл раствора Б 1 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Смеси В4, В5, В6 . В три мерные пробирки вместимостью 50 мл заносят по 2 мл раствора Б2 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Смеси В7, В8, В9 . В три мерные пробирки вместимостью 50 мл заносят по 2 мл раствора Б 3 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Определяют оптическую плотность всякого из 9 приготовленных смесей на спектрофотометре при длине волны 309 нм в кювете с шириной слоя 1 см.
Параллельно определяют оптическую плотность раствора СО папаверина гидрохлорида.
Около 0,05 г (четкая навеска) папаверина гидрохлорида растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят сиим растворителем до метки (раствор А).
2 мл приобретенного раствора переносят в мерную пробирку вместимостью 50 мл и доводят до метки этим же растворителем (раствор Б),
1 мл раствора Б содержит 0,00002 г папаверина гидрохлорида.
Расчет содержания папаверина гидрохлорида в процентах (открываемость R) проводят по формуле:
(1),
где: Ах — оптическая плотность исследуемого раствора;
Ао — оптическая плотность раствора СО папаверина гидрохлорида;
ах — масса навески исследуемого эталона папаверина гидрохлорида;
0,00002 — содержание папаверина гидрохлорида в г в 1 мл раствора СО.
Результаты вносят в таблицу № и рассчитывают обычное (SD) и относительное обычное отклонение (RSD).
Таблица 2 — Корректность
Разведение
В 1
В 2
В 3
В 4
В 5
В 6
В 7
В 8
В 9
Оптическая плотность
0,190
0,198
0,208
0,444
0,433
0,440
0,539
0,545
0,547
Содержание папаверина
2.4 Прецизионность (precision)
Приготовить раствор Б2 модельной консистенции.
Смеси В1, В2, В3. В три мерные пробирки вместимостью 50 мл заносят по 1 мл раствора Б2 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Смеси В4, В5, В6. В три мерные пробирки вместимостью 50 мл заносят по 2 мл раствора Б2 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Смеси В7, В8, В9. В три мерные пробирки вместимостью 50 мл заносят по 3 мл раствора Б2 и доводят до метки 0,1 М веществом кислоты хлористоводородной.
Определяют оптическую плотность всякого из 9 приготовленных смесей на спектрофотометре при длине волны 309 нм в кювете с шириной слоя 1 см.
Параллельно определяют оптическую плотность раствора СО папаверина гидрохлорида.
Расчет содержания папаверина гидрохлорида в граммах в 1 мл проводят по формуле:
(2),
где: Ах — оптическая плотность исследуемого раствора;
Ао — оптическая плотность раствора СО папаверина гидрохлорида;
0,00002 — содержание папаверина гидрохлорида в г в 1 мл раствора СО;
Va — размер аликвоты раствора Б, взятый для разведения, мл.
Результаты вносят в таблицу и рассчитывают обычное отклонение (SD) и относительное обычное отклонение (RSD).
Таблица 3 — Прецизионность
Разведение
В 1
В 2
В 3
В 4
В 5
В 6
В 7
В 8
В 9
Оптическая плотность
0,209
0,214
0,224
0,352
0,369
0,363
0,698
0,712
0,719
Содержание папаверина
Перечень литературы
1. ГФ 12. ФС 42-0267-07.
2. Беликов В.Г. Лекарственная химия
3. ФСП 42-0152-1850-01
4. Арзамасцев
]]>