Учебная работа. Влияние низкомолекулярной фракции кордовой крови на фагоцитарную активность нейтрофилов in vitro

Учебная работа. Влияние низкомолекулярной фракции кордовой крови на фагоцитарную активность нейтрофилов in vitro

21

Министерство образования и науки Украины

Харьковский государственный институт им. В.Н. Каразина

Био факультет

Кафедра физиологии (Физиология от греч. — природа и греч. — знание — наука о сущности живого) человека и звериных

Дипломная работа спеца

Воздействие низкомолекулярной фракции кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) на фагоцитарную активность нейтрофилов in vitro

студентки V курса

Остапенко Татьяны Владимировны

Научный управляющий:

к.б.н. Федосова С.Н.,

Харьков — 2009

Реферат

Работа изложена на страничках, содержит таблицы, рисунков и литературных источников.

Главные слова: трансфузионная лейкоцитарная масса, лейкоциты, нейтрофилы, фагоцитарная активность, низкомолекулярная фракция кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных), актовегин.

В данной работе представлены результаты сравнительного исследования воздействия низкомолекулярной фракции кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) и фармакологического продукта актовегина на фагоцитарную активность нейтрофилов трансфузионной лейкоцитарной массы, хранившейся при +4°С. Показано, что хранение трансфузионной лейкоцитарной массы приводило к понижению всех исследуемых характеристик. крови (внутренней средой организма человека и животных) наблюдалось увеличение активности кислород-зависимых антибактериальных устройств. Добавление 0,017% раствора низкомолекулярной фракции кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) оказывало стимулирующее воздействие на поглотительную и переваривающую способность нейтрофилов.

Перечень сокращений

ЛМ — лейкоцитарная масса

КК — кордовая крови (внутренней средой организма человека и животных)

ФА — фагоцитарная активность

ФИ — фагоцитарный индекс

ФЧ — фагоцитарное число

КЗФ — коэффициент завершенности фагоцитоза

НСТ — нитросиний тетразолий

ГМФШ — гексозомонофосфатный шунт

Введение

Для исцеления и профилактики ряда патологических состояний обширно употребляется лейкоцитарная масса (ЛМ) донорской крови (внутренней средой организма человека и животных) человека. Трансфузии лейкоцитов отыскали свое применение в всеохватывающей процесс бактериальных заразных осложнений гемодепрессии, профилактике и время в связи с расширением показаний к применению концентратов лейкоцитов, появилась неувязка сотворения их припасов.

Перенесение клеток целостного организма в условия жизни in vitro приводит к выходу из-под контроля нейрогуморальных причин. Клеточки и ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология), которые живут вне организма, характеризуются целым комплексом метаболических, морфологических и генетических черт, хороших от параметров клеток и тканей in vivo. Понятно, что в критериях in vitro лейкоциты стремительно теряют свою многофункциональную активность. Сохранение жизнеспособности клеток ЛМ при положительных температурах встречают значимые трудности в связи с резвым затуханием энергетического обмена, что, в свою очередь, соединено со сложной внутренней структурой клеток. Мембраны гранул лейкоцитов очень чувствительны к хоть какого рода действиям и при нарушении их целостности, находящиеся в гранулках гидролитические ферменты выходят в цитоплазму клеточки, вызывая ее смерть. В связи с сиим, целесообразным является подбор сред и критерий хранения ЛМ, сотворения сред реинкубации лейкоцитов перед трансфузией, с целью увеличения их многофункциональной активности.

Главным компонентом ЛМ является более бессчетный тип лейкоцитов — нейтрофилы, представляющие из себя систему полиморфонуклеарных фагоцитов, с расположенными в цитоплазме первичными азурофильными и вторичными специфичными гранулками. Образовавшись в костном системы животных, обычно расположенный в головном отделе тела и представляющий собой компактное скопление нервных клеток и их отростков) — центральный отдел нервной системы человека и звериных, через сосудистое русло нейтрофилы выходят в ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология), где и производят свою главную функцию — поиск, захват и разрушение микробов — фагоцитоз, осуществляющийся в несколько шагов. В задачку нейтрофилов заходит критическая работа дезинфекции очага воспаления и воплощение вторичной альтерации, с целю очищения очага от бактерий. При стимуляции нейтрофилы продуцируют комплекс хемокинов и провоспалительных цитокинов, активирующих остальные клеточки иммунной системы.

Активация энергетического обмена и теплопродукции нейтрофилов опосля связывания объекта фагоцитоза представляет собой метаболический взрыв. процесс фагоцитоза связан со «вспышкой гликолиза», что выражается в повышении продукции лактата и сопровождается возрастанием синтеза липидов в мембране фагосомы. Элементом полномаштабного метаболического взрыва в нейтрофилах является активация неметохондриальных оксидаз. В процессе оканчивающей стадии фагоцитоза осуществляется внутриклеточный киллинг: кислород-зависимый и бескислородный. Кислорд-зависимые механизмы киллинга важнее, чем бескислородные, т.к. активны в отношении микробов с неповрежденной клеточной стеной.

Беря во внимание, что настоящая активация нейтрофилов сопровождается метаболическим взрывом, неоднократно увеличивающим потребление энергии и увеличивающим Потребность клеток в кислороде, является целесообразным внедрение в качестве сред инкубации препаратов, действие которых направленно на восстановление вышеуказанных действий.

В медицинской практике уже длительное время удачно используются препараты, которые являются гемодиализатами, получаемыми из крови (внутренней средой организма человека и животных) молочных телят, такие как актовегин. Этот продукт вырабатывается на базе конкретно безбелковой низкомолекулярной фракции крови (внутренней средой организма человека и животных) (меньше 5 кДа), получаемой методом поочередных действий криогемолиза, ультрафильтрации, диализа и концентрации.

Было увидено, что клеточки различных клеточных и тканевых культур, также органов людей и звериных под воздействием этих препаратов наращивают потребление кислорода и глюкозы. Этот эффект, не зависимо от самого органа, приводит к увеличению энергетического статуса клеточки, которая в свою очередь влияет на ее многофункциональный метаболизм.

В истинное время в медицинской практике все большее внимание и применение находят препараты, приобретенные из природного сырья. Одним из таковых источников полифункциональных препаратов является кордовая причин, которые учавствуют в индукции, репрессии, оборотном ингибировании различных ферментов в клеточках [5].

Беря во внимание, что в медицинской практике уже издавна удачно используются препараты, которые по происхождению являются низкомолекулярными гемодериватами, получаемыми из остальных источников, является полностью целесообразным исследование био активности низкомолекулярных фракций (меньше 5 кДа) КК, подвергнутой криогемолизу и исследование способности разработки и внедрения сред реинкубации на их базе [8].

Исходя из этого, целью данной работы явилось:

— сравнительное исследование воздействия актовегина и НФКК на фагоцитарную активность нейтрофилов в опытах in vitro.

В связи с поставленной целью, предполагалось решить последующие экспериментальные задачки:

1. Провести сравнительное исследование ФИ,ФЧ, КЗФ и активности кислород-зависимых антибактериальных устройств в нейтрофилах трансфузионной лейкоцитарной массы, хронившейся при +4°С.

2. Изучить воздействие актовегина в концентрациях 0,017%, 0,033%, 0,17%, 033% на фагоцитарную активность нейтрофилах в опытах in vitro.

3. Изучить воздействие НФКК в концентрациях 0,017%, 0,033%, 0,17%, 033% на фагоцитарную активность нейтрофилах в опытах in vitro.

4. Изучить воздействие актовегина в концентрациях 0,017%, 0,033%, 0,17%, 033% на активность кислород-зависимых антибактериальных устройств в опытах in vitro.

5. Изучить воздействие НФКК в концентрациях 0,017%, 0,033%, 0,17%, 033% на активность кислород-зависимых антибактериальных устройств в опытах in vitro.

1. Обзор литературы

1.1 Фагоцитарная функция нейтофилов

Фагоцитоз — основная функция нейтрофилов, состоящая из цепи событий, которая, в широком смысле, быть может подразделена на каскад передвижения и каскад Киллинга.

Миграционный каскад включает:

· маргинацию,

· диапедез через сосудистую стену,

· хемотаксис;

Каскад Киллинга включает:

· определение,

· прикрепление,

· рецепторный эндоцитоз (погружение),

· слияние гранул,

· дегрануляцию в фагосоме, «метаболический взрыв», антибактериальный эффект (переваривание),

· экзоцитоз.

Понятно, что главную роль в процессе маргинации играет обоюдная экспрессия активированным эндотелием и нейтрофилом молекул клеточной адгезии, распознающих друг друга. Маргинация — личный вариант клеточной адгезии. Она просит обычной функции цитоскелета нейтрфилов — микротрубочек и микрофиломентов.

Диапедез через сосудистую стену включает перемещение нейтрофилов через соединение меж эндотелеоцитами и разрушение желатиназой нейтрофилов базальной мембраны эндотелия.

Хемотаксис нейтрофилов заключается в том, что эмигрировавшая из кровотока (тока внутренней среды организма) клеточка мигрирует к объекту фагоцитоза по концентрационному градиенту медиатора — хемоаттрактанта. Гидрокортизон и колхицин — in vivo — ингибирует его.

Каскад киллига развертывается полностью опосля прикрепления нейтрофила к объекту, содержащему хемоаттрактанты. Существенную роль в прикреплении играют бивалентные щелочноземельные катионы Mg+2 и Ca+2. В процессе опсонизации может проявляться направленная специфика фагоцитоза нейтрофилов млекопитающих, сплетенная со спецификой опсонических процесс фагоцитоза связан с «вспышкой гликолиза», что выражается в повышении продукции лактата и сопровождается возрастанием синтеза липидов в мембране фагосомы. Неотклонимый элеиент полномасштабного метаболического взрыва в нейтрофилах — активация немитохондриальных оксидаз, связанных с гексозомонофосфатным (ГМФШ) шунтом (дыхательная вспышка).

Энергия метаболического взрыва, овеществленная в восстановленной форме НАД и НАДФ, нужна для усиления продукции эндогенных окислителей — главных агентов киллинга при фагоцитозе. Закономерные энергозависимые конфигурации происходят в состоянии цитоскелета. Цитоскелет участвует в погружении объекта вовнутрь нейтрофила, перемещении гранул и, совместно с белками, в опорожнении содержимого этих производных лизосом и преоксисом в фагосому.

При оканчивающей стадии фагоцитоза — деградации его объекта — конечным результатом является действие на перевариваемую частичку всего комплекса агентов, содержащихся в обоих типах гранул.

Внутриклеточный Киллинг нейтрофилов бывает 2-ух категорий:

— кислородзависимый (свободнорадикальный);

— бескислородный (гидролазный либо «цитазный»).

Кислородзависимые механизмы килинга важнее, чем бескислородные, потому что активны в отношении микробов с неповрежденной клеточной стеной. Кислородзависимый внутриклеточный Киллинг в нейтрофилах сопровождается последующими проявлениями:

— завышенной активностью ГМФШ;

— возрастанием употребления кислорода;

— возрастанием удельной теплопродукции нейтрофилов;

— выработкой супероксид-аниона;

— продукцией перекиси водорода из супероксида под действием супероксиддисмутазы.

Бескислородные механизмы антимикробного Киллинга включают антибактериальное и антилитическое действие разных компонент их гранул.

1.2 Патологии фагоцитоза нейтрофилов

При разных патологиях основная функция нейтрофилов может нарушаться (табл. 1). Нарушения могут касаться, в большей степени, каскада киллинга, или каскада передвижения. При неких наследных и почти всех обретенных заболеваниях мучаются киллинг и миграция. Нарушения функции фагоцитов весьма всераспространены и несут ответственность за почти все случаи понижения иммунологической резистентности продолжительно и частоболеющих пациентов, хотя любая отдельная наследная аномалия фагоцитов не является частым болезнью. Большая часть нездоровых, имеющих разные многофункциональные недостатки нейтрофилов, обнаруживают чувствительность к какому-то виду микробов, но не ко всем. Наследные недостатки полиморфонуклеарного фагоцитоза, как правило, аутосомно-рецессивные, кроме приобретенного гранулематоза и недостатка глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы. Обретенные недостатки появляются при почти всех метаболических расстройствах аутоаллергических болезнях, гемобластозах, также могут провоцироваться ядовитыми веществами и лекарствами.

Таблица

Нарушение фагоцитоза

Нарушенная функция

Наследные недостатки

Обретенные недостатки

Фармацевтическая патология

Адгезия, агрегация, приводящая к поглощению микробов

Дефицитность лейкоцитарной адгезии 1 типа (недостаток Я-цепи интегринов),

2 типа (недостаток сенсора селектинов)

Новорожденность, сладкий диабет, последствия гемодиализа

Глюкокортикоиды, алкоголь, аспирин, ибупрофен, пироксикам, колхицин

Пластичность

—

Новорожденность, сладкий диабет, гиперрегенераторные сдвиги на лево, лейкозы

—

Локомоция и захват микробных клеток

синдром (совокупность симптомов с общим патогенезом) Чедиака Хигаши (недостаток микрофиламентов, актинсвязывающего белка), синдром (совокупность симптомов с общим патогенезом) Иова, недостаток специфичных нейтрофильных гранул

Новорожденность, сладкий диабет, онкологические работоспособности»> работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности), СПИД (синдром приобретённого иммунного дефицита — состояние, развивающееся на фоне ВИЧ-инфекции и характеризующееся падением числа CD4+ лимфоцитов, множественными оппортунистическими инфекциями, неинфекционными и опухолевыми заболеваниями), тяжкий комбинированный иммунодефицит, коллагенозы, голодание, грипп, герпес, скопление; — бег Дауна и Вискота-Олдрича, пародонтоз, недостаток б-маннозидазы,

энтеропатический акродерматит,

сепсис, ожоги

Фенилбутазон, напроксен, колхицин, глюкокортикоиды, индометацин,

ИЛ-2

Деградация объекта

синдром (совокупность симптомов с общим патогенезом) Чедиака Хигаши, приобретенный гранулематоз (недостатки НАДФ-оксидазы), недостаток специфичных нейтрофильных гранул

Новорожденность, сладкий диабет, сепсис, ожоги, СПИД (синдром приобретённого иммунного дефицита — состояние, развивающееся на фоне ВИЧ-инфекции и характеризующееся падением числа CD4+ лимфоцитов, множественными оппортунистическими инфекциями, неинфекционными и опухолевыми заболеваниями), спленэктомия, гемоцитопении, голодание

Колхицин,

циклофоофан, глюкокортикоиды

Метаболический взрыв: активация кислородзависимых и кислороднезависимых действий

Приобретенный гранулематоз, недостаток пируваткиназы, глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы

Пеллагра

Колхицин,

циклофоофан, глюкокортикоиды

Миелопероксидазная активность

недостаток миелопероксидазы

Острый миелоидный лейкоз

Колхицин,

циклофоофан, глюкокортикоиды, сульфоны

1.2.1 Применение лейкоцитарной массы

Трансфузии лейкоцитарной массы относительно обширно начали применяться с начала 60-х годов XX в., когда был предложен способ лейкоцитафореза [18]. Ранее в качестве средства терапии (терапия — процесс, для снятия или устранения симптомов и проявлений тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) нездоровых приобретенным миелолейкозом.

Лейкоцитарная масса как трансфузионная среда до сего времени не получила широкого распространения в целебной практике. Это соединено с лабильностью, низкой устойчивостью лейкоцитов, трудностями их выделения из крови (внутренней средой организма человека и животных), необходимостью наличия огромных доз для получения терапевтического эффекта, сложностью иммунологическою подбора пар донор — реципиент. Установлено, что у выделенных гранулоцитов стремительно нарушаются морфофункциональные характеристики.

Скопленный клиницистами опыт дозволил представить, что внедрение лейкоцитарной массы в всеохватывающей терапия от греч. [therapeia] — лечение, оздоровление) — процесс бактериальных заразных осложнений гемодепрессии может значительно сделать лучше результаты. Данные экспериментальных клинических исследовательских работ крайних лет внушительно показали положительную роль трансфузий гранулоцитов для исцеления и профилактики ряда патологических состояний. По воззрению Хигби и Бэрнетта [15], в истинное время уже не требуется обосновывать терапевтическую Ценность переливаний гранулоцитов. Нужно уточнить границы использования данной для нас дефицитной и дорогостоящей трансфузионной среды, уметь устанавливать степень необходимости и целебную перспективность трансфузий в любом определенном случае.

1.2.2 Хранение лейкоцитарной массы

Неувязка консервирования крови (внутренней средой организма человека и животных) и ее компонент занимает одно из ведущих мест в становлении и развитии трансфузиологии, в научных исследовательских работах и практической деятель. В связи с расширением показаний к применению хирургических способов, также фуррорами, достигнутыми в области гематологии, возросла потребность в неизменном наличии припасов настоящей крови (внутренней средой организма человека и животных) и ее компонент. В итоге широкого использования лучевой для снятия либо устранения симптомов и проявлений работоспособности»>заболевания (нарушения нормальной жизнедеятельности, работоспособности)«>терапии (неувязка купирования таковых осложнений, как иммуно- и гемодепрессии. Оказалось, что для исцеления обозначенных осложнений могут удачно применяться ядерные составляющие крови (внутренней средой организма человека и животных), костного мозга (центральный отдел нервной системы животных и человека), лимфоциты. Эти же клеточные суспензии могут быть полезны и в всеохватывающей процесс иммуно- и гемодепрессии другого происхождения, в том числе лучевой патологии.

В крайнее время предлагаются новейшие методы продления жизнеспособности, и многофункциональной полноценности клеток крови (внутренней средой организма человека и животных) в процессе их консервирования и разработаны новейшие способы, увеличивающие сроки хранения крови (внутренней средой организма человека и животных) и ЛМ при положительных и отрицательных температурах.

Для консервирования крови (внутренней средой организма человека и животных) употребляются два способа:

— консервирование при отрицательных температурах;

— консервирование при положительных температурах.

Хранение крови (внутренней средой организма человека и животных) при положительных температурах обычно происходит в бытовых комнатных холодильниках, которые обеспечивают поддержание температурного режима в границах от +2 до +4°С. При таковых температурах более нередко хранят консервированную цельную тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) претерпевает бессчетные конфигурации. Сначала конфигурации затрагивают клеточные элементы крови (внутренней средой организма человека и животных), которые в силу собственных морфологических и многофункциональных особенностей имеют различные сроки хранения.

Так, лейкоциты могут сохранять свои характеристики в течение нескольких часов. Это разъясняется тем, что лейкоциты — ядерные клеточки со сложными функциями, а при продолжительном хранении сначала конфигурации затрагивают ядро клеточки. Но конфигурации происходящие с клеточкой не ограничиваются лишь морфологическим нюансом, сразу с сиим происходит изменение биохимических и физико-химических параметров клеток и, как следствие, их многофункциональной активности.

Единственным настоящим способом длительного хранения лейкоцитов является замораживание при температурах ниже 0СС. Считают [15], что успешное криоконсервирование гранулоцитов (в том числе миелолейкозных) дозволит решить препядствия, связанные с применением этих клеток в поликлинике. Известные способы криоконсервирования гранулоцитов пока не могут быть признаны хорошими.

В цельной крови (внутренней средой организма человека и животных) при обыденных методах консервирования и хранения нарушается многофункциональная активность гранулоцитов, а именно, уже через 48 часов исчезает способность к фагоцитозу.

Таковым образом, в связи с необходимостью использования лейкоцитарной массы в медицинской практике, но при всем этом отсутствием в большинстве лабораторий специального оборудования, имеет смысл проводить исследования по продлению сроков ее хранения с внедрением низких положительных температур. Потому животрепещущей является задачка усиления энергетического статуса клеточки опосля гипотермического хранения.

1.3 Механизм деяния продукта актовегин

жизни in vitro приводит к их выходу из-под контроля нейрогуморальных причин и обретению клеточками ряда особенностей, зависимых как от самого факта отторжения, так и от определенных критерий существования in vitro. Клеточки и ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология), которые живут вне организма, характеризуются целым комплексом метаболических, морфологических и генетических черт, хороших от параметров клеток и тканей in vivo.

Одним из основных направлений прикладных исследовательских работ является разработка действенных технологий длительного хранения био объектов и решение заморочек сотворения ресуспендирующих и питательных сред, способных оказывать содействие резвому восстановлению энергетических действий в клеточке опосля ее выхода из холодового анабиоза.

В истинное время в медицинской практике понятно применение продукта актовегин. Являясь гемодиализатом, кроме неорганических электролитов и остальных микроэлементов, он содержит 30% органических веществ, таковых, как пептиды, аминокислоты, нуклеозиды, промежные продукты углеводного и звериного обмена, липиды и олигосахариды. Молекулярный вес органических соединений составляет наименее 5000 дальтон. Согласно наблюдениям, применение Актовегина целенаправлено в разных областях медицины для корректировки состояния органов и тканей при патологических состояниях.

Было увидено, что клеточки разных клеточных и тканевых культур, также органов людей и звериных под действием актовегина наращивают потребление кислорода и глюкозы. Этот эффект, независящий от самого органа, ведет к повышению энергетического статуса клеточки, что, в свою очередь, оказывает воздействие на ее многофункциональный метаболизм.

Активная фракция, изолированная от гемодиализата, увеличивает транспорт 3-0 метилглюкозы зависимо от дозы в 5 раз, не вызывая роста цитохолазина-В во фракции плазмы мембраны.

Активная фракция, разумеется, действует независимо от перемещения глюкозы. Стимуляция транспорта происходит через модуляцию внутренней активности носителя глюкозы (Odermaer-Kusser и др., 1989). Это разъясняет самостоятельное инсулиноподобное действие актовегина на транспорт и внедрение глюкозы, что выражается в улучшении энергетического статуса клеточки.

1.4 Структурно-функциональные индивидуальности кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных)

В истинное время все большее внимание исследователей и клиницистов завлекают внимание фармацевтические препараты, приобретенные из природного материала, одним из которых является кордовая крови (внутренней средой организма человека и животных) плода [5,13]. КК, являясь внутренней средой возрастающего организма, обеспечивает доставку к разным тканям и органам на биологическом уровне активных веществ, продуцируемых плацентой и фетальными тканями. Эти соединения, разные по собственной природе и источнику происхождения, определяют рост и дифференцировку тканей плода, регулируют его метаболизм.

При обсуждении различий состава и параметров кордовой и донорской крови (внутренней средой организма человека и животных) недозволено не коснуться системы переноса кислорода. Эритроциты кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) имеют целый ряд структурно-функциональных особенностей отличающих их от эритроцитов взрослого человека [13, 16]. Кордовая кровь (внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) содержит, основным образом, фетальный гемоглобин, который, несколько отличаясь от обычного гемоглобина взрослых, имеет завышенное сродство к кислороду.

Согласно современным представлениям, регулятором кислородосвязывающих параметров гемоглобина является уровень содержания в эритроцитах 2,3-ДФГ. Установлено, что фетальный гемоглобин владеет наименьшим сродством к 2,3-ДФГ, а, соответственно и огромным сродством к кислороду [15]. По данным литературы содержание фетального гемоглобина в крови (внутренней средой организма человека и животных) новорожденных намного больше, чем в периферической крови (внутренней средой организма человека и животных) взрослого человека (табл. 1).

Таблица 1

Содержание неких компонент кордовой и донорской крови (внутренней средой организма человека и животных) человека (в норме).

Характеристики

Единицы измерения

кордовая донорская образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>кровь (внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов)

GM CSF (гранулоцит-макрофаг-колоние-стимулирующий фактор)

U/ml

40,8 ± 2,8

—

G-CSF (гранулоцит-колоние-стимулирующий фактор)

U/ml

19,9 ± 5,2

2,5 ± 1,5

Лейкоциты

В 1 мкл

4,0-30,1 х 103

4-10 х 103

Тромбоциты

В 1 мкл

136 — 524 х 103

150-300 х 103

количество эритроцитов

млн/мл

5,2 х 103

4,9 х 103

Уровень гематокрита

о. %

49,4±9,5

43,4 ± 5,3

Содержание гемоглобина

г/л

155,5±27,3

140 ± 21,2

КОЕ-ГМ

млн/мл

3,4±4,0х103

Вязкость крови (внутренней средой организма человека и животных)

mPas

1.05 ± 0.07

1.34 ± 0.08

Плазменный активатор-ингибитор

U/ml

0.846 ± 1.44

7,652 ± 0.764

Фибриноген

мг/мл

156,05 ± 91,68

344,00 ± 55,25

Общий белок

г/л

47-65

68-85

Пролактин

нг/л

до 200

0,001 — 0, 025

Лептин

нг/мл

до 8

3,8

Витамин (низкомолекулярное органическое соединение относительно простого строения, ноебходимое для всего живого) Е

мкг/л

2,76 — 2,83

0,64 — 0,73

Витамин (низкомолекулярное органическое соединение относительно простого строения, ноебходимое для всего живого) А

мкг/л

2,67 — 27,2

0,53 — 2,1

Так же на насыщение кислородом может влиять деформабильность эритроцитов. Отмечено, что эритроциты кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) имеют огромную степень деформабильности, чем эритроциты взрослого организма. Предполагается, что это наращивает транспортные характеристики эритроцитов кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) [19, 25].

Иммунные характеристики эритроцитов КК исследованы недостаточно, но имеющиеся в литературе данные молвят о значимой иммунной стойкости этих клеток. Было отмечено, что для их лизиса требуется намного больше гемолизина, чем для разрушения эритроцитов взрослого человека. Эти данные разрешают возлагать, что эритроциты кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) сумеют довольно продолжительно работать в русле крови (внутренней средой организма человека и животных) опосля трансфузии [17, 29].

Очередной индивидуальностью фенотипа лимфоцитов КК, характеризующей их как клеточки со специфичной иммунореактивностью, является отсутствие сенсора к интерлейкину-2, в то время как около 4% лимфоцитов крови (внутренней средой организма человека и животных) малышей от 3 до 12 лет уже имеют этот сенсор [29]. Не считая того уже около 30% лимфоцитов КК отнесены к так именуемым «нулевым» клеточкам из-за отсутствия маркеров каких-то иммунокомпетентных клеток на их поверхности [25].

Одним из неповторимых различий КК от донорской будет то, что кордовая крови (внутренней средой организма человека и животных) владеют неповторимыми качествами — они не воспринимаются организмом как чужеродные и не требуют личного подбора, как при переливании донорской крови (внутренней средой организма человека и животных) и пересадке органов.

По содержанию веществ в плазме, кордовая человека и животных) взрослого организма фактически по всем характеристикам. На нынешний денек обнаружены различия меж содержанием в плазме крови (внутренней средой организма человека и животных) взрослого организма и в плазме кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) разных белков, гормонов, нейропептидов, низкомолекулярных соединений [8] (см. таб.1). Кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) присущ высочайший уровень витаминов, микроэлементов.

Чертами кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных), а именно ее сыворотки является наличие наиболее 60 специфичных плацентарных белков, выполняющих роль ферментов, гормонов, гемопоэтинов, адаптогенов, рецепторов, причин роста, иммунорегуляторных агентов; содержание целого ряда пептидов — структурных аналогов нейропептидов головного мозга (центральный отдел нервной системы животных и человека), опиоидных пептидов (эндорфинов и энкефалинов) [11].

Понятно, что в КК по сопоставлению с донорской существует завышенный уровень веществ, играющих роль в антиоксидантной системе: каротиноидов, аскорбиновой кислоты, токоферролов и др. Таковой завышенный уровень антиоксидантов в кордовой плазме может заносить вклад в повышение резистентности плазмы КК к Cu2+ индуцированному перекисному окислению липидов [24]. Для КК типично наиболее высочайшее содержание ряда микроэлементов, участвующих в разных действиях клеточного метаболизма: калия, кальция, магния, фосфора, железа. Содержание никеля, хлора, цинка в КК и в материнской крови (внутренней средой организма человека и животных) практически идиентично. Посреди низкомолекулярных веществ выявлялись глюкоза, лактат, креатин, цитрат, аминокислоты и кетоновые тела. Плацентарная плазма имела схожий состав, кроме того, что выше был уровень бетаина, также отсутствовали цитрат, ацетон, ацетоацетат и некие липопротеины [13].

1.5 Индивидуальности состава кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) и ее применение в медицинской практике

На нынешний денек в научной и медицинской практике накоплена широкая информация о положительном воздействии кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных), как на разные органы, системы и клеточные культуры, так и на организм в целом. На базе кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) сделаны и употребляются в медицинской практике такие препараты, которые относят к группе биогенных стимуляторов. Основное отличие кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) как биогенного катализатора заключается в том, что она имеет в своём составе равновесный комплекс на биологическом уровне активных веществ, которые учавствуют в индукции, репрессии, обратимой ингибиции разных ферментов в органах и тканях реципиента, по этому может быть действие на метаболизм не только лишь хворого, да и относительно здорового организма без выраженной патологии [7, 8, 20].

В ряде экспериментальных исследовательских работ была проведена сравнительная оценка донорской и кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) человека. А именно показано, что имеются значимые отличия реологических характеристик [5], системы коагуляции [17], переноса кислорода, иммунологических черт. Значительные различия наблюдаются и в содержании белковых компонент сыворотки кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) при сопоставлении ее с донорской [11].

Исходя из обозначенных выше особенностей эритроцитов КК, создатели [9] сочли вероятным употреблять фетальные эритроциты при томных формах геморрагического шока, сопровождающегося вторичной тканевой гипоксией. Было установлено, что инфузия взвеси фетальных эритроцитов в критериях постгеморрагической гипотензии сопровождается наиболее выраженной нормализацией характеристик кислотно-щелочного состояния, напряжения кислорода в мышце, гемодинамики и дыхания по сопоставлению с инфузией взвеси эритроцитов взрослого человека.

В работе [8], показано, что опосля трансфузии КК у пациентов с кровью (внутренней средой организма) в легких и происходила нормализация газообмена в тканях, что показывает на большее сродство фетальных эритроцитов к кислороду, чем эритроцитов крови (внутренней средой организма человека и животных) взрослого организма.

КК различается от крови (внутренней средой организма человека и животных) взрослых также и по своим реологическим свойствам. Это становится в особенности животрепещущим при нередком предназначении разных компонент крови (внутренней средой организма человека и животных) новорожденным при интенсивной крови (внутренней средой организма человека и животных) взрослых, а различием компонент плазмы. Как видно, тут имеет

Фенотипические индивидуальности мембранных структур Т-лимфоцитов могут указывать на сниженную способность этих клеток КК к иммунному ответу по традиционному пути [25].

В истинное время энтузиазм ученых завлекает неувязка использования КК как альтернативного источника гемопоэтических стволовых клеток-предшественников [19].

Таковым образом, невзирая на завышенное содержание почти всех био- и иммуностимуляторов в КК, эти вещества находятся в равновесных концентрациях и представляют собой на биологическом уровне активный комплекс, нужный для развивающегося организма, и нормализующий обмен веществ при попадании во взрослый организм [8].

Вследствие обозначенных выше особенностей клеточного состава, КК и приобретенные из нее препараты, находят в крайнее время все большее применение в медицинской практике [5, 28]. При этом в целительных целях употребляется как цельная КК, так и отдельные ее составляющие.

кордовый крови (внутренней средой организма человека и животных) (ХОЦСК), заготовленной по обычной методике ХОЦСК и хранившейся не наиболее 12 часов при температуре +4°С опосля фракционирования крови (внутренней средой организма человека и животных).

Нативную лейкоцитарную массу получали методом отстаивания цельной донорской крови (внутренней средой организма человека и животных). Плазму отобрали, оставив 20 мл над осевшими клеточками. Верхний слой клеток, содержащий лейкоциты с примесью эритроцитов, переводили во флакон, содержащий 6% раствор декстрана в 0,9% растворе NaCl в соотношении 2:1. Аккуратненько размешивали в течение 10 мин и оставляли на 30-40 мин для оседания эритроцитов. Надосадочную жидкость переводили во флакон и центрифугировали при 1 тыс. о/мин в течение 10 мин. отбирали надосадочную жидкость, остаток ресуспендировали в плазме крови (внутренней средой организма человека и животных). Содержание лейкоцитов доводили плазмой до 30-50 тыс. в 1 мкл.

Низкомолекулярную фракцию кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) КРС (НФКК) получали при помощи способа ультрафильтрации с внедрением ультрафильтрационного оборудования компании «Sartorius» (Германия). Для этого цельную КК дефибринировали, потом производили криодеструкцию методом помещения сырья в морозильную камеру с температурой -800С. Для получения низкомолекулярных фракций, приобретенные эталоны размораживали при комнатной температуре, центрифугировали при 10000g, с целью удаления больших частиц. Опосля этого криогемолизированную образованная водянистой соединительной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»> образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>кровь

(внутренняя среда организма, образованная жидкой соединительной тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) подвергали предфильтрации, для что употребляли фильтр многоразового использования, который задерживает частички с молекулярной массой наиболее 100 кДа. Приобретенный фильтрат пропускали через ультрафильтрационный модуль, с показателем номинальной молекулярной массы, которая отделяется, 5 кДа.

Избранный способ ультрафильтрации в тангенциальном потоке, в сопоставлении с иными видами низкомолекулярного разделения молекул соединяет воединыжды внутри себя довольно высшую эффективность фильтрации, возможность фильтрации огромных размеров и многоразовое внедрение мембраны [13].

Приобретенные низкомолекулярные пептиды подвергали лиофилизации.

В качестве продукта сопоставления употребляли актовегин (коммерческий продукт компании NYCOMED, Австрия; 40 мг/мл сухого веса).

количество ядросодержащих клеток подсчитывали в камере Горяева. Концентрацию клеток постоянно доводили до 2х107/мл в плазме крови (внутренней средой организма человека и животных). Воздействие низкомолекулярной фракции (до 5 кДа) кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) КРС и актовегина, на клеточки лейкоцитарной массы, оценивали по фагоцитарной активности и одноклеточнае микроорганизмы»>антибактериальной активности (НСТ-тест) нейтрофилов. Препараты в каждой серии тестов вносили в суспензию клеток в объеме 10% от среды до конечных концентраций 0,17 — 0,33 — 1,7 — 3,3 мг/мл (исходя из расчета разведения продукта с начальной концентрацией 40 мг/мл).

Понятно, что фагоцитарная активность (ФА) является главной физиологической функцией нейтрофилов. Для оценки ФА объектом фагоцитоза служила дневная инактивированная минут. Опосля что готовили мазки средней плотности, фиксировали их эозин-метиленовым голубым веществом (по Май-Грюнвальду) в течение 1 минутки и окрашивали азур-эозин веществом (по Романовскому) в течение 1 минутки. Окрашенные мазки смотрели под иммерсией (х100, о. 10). Определяли процент фагоцитирующих нейтрофилов — фагоцитарный индекс (ФИ) и среднее количество микробных тел на один нейтрофил — фагоцитарное число (ФЧ) опосля 45 и 120 минут инкубации, также коэффициент завершенности фагоцитоза (КЗФ) — отношение фагоцитарного числа опосля 45 мин инкубации к фагоцитарному числу опосля 120 мин инкубации. Данный показатель охарактеризовывает последнюю стадию фагоцитоза, деградацию объекта фагоцитоза (переваривающую активность нейтрофилов).

Для оценки одноклеточнае микроорганизмы»>антибактериальной активности нейтрофилов в составе лейкоцитарной массы донорской крови (внутренней средой организма человека и животных) проводили индуцированный НСТ-тест. О метаболической активности судили по поглощению клеточкой нитросинего тетразолия (НСТ) и восстановлению его в диформазан, выявляемый в виде гранул голубого цвета в цитоплазме нейтрофила. Активацию клеток производили дневной инактивированной культурой Staphylococcus aureus штамм №209 (2 миллиардов. кл./мл, в физиологическом растворе). Для постановки теста в лейкоцитарную массу вносили ФКК либо Актовегин соответственной концентрации в объеме 10% от среды, Staphylococcus aureus, соблюдая соотношение лейкоцит-стафилококк 1:50, и 0,2% раствор НСТ. В контрольные пробы заместо продукта добавляли изотонический раствор. Лейкоцитарную массу инкубировали при +37°С в течение 45 минут. Опосля что все пробы центрифугировали 10 мин при 1500 о./мин, из осадков готовили мазки средней плотности, фиксировали 10%-ным веществом формалина в течение 30 мин. Процент диформазан-положительных нейтрофилов определяли при микроскопичном исследовании препаратов, окрашенных 0,1%-ным веществом сафранина (на базе 1% уксусной кислоты), под иммерсией (х100, о. 10) с зеленоватым светофильтром.

3. Статистическая обработка результатов

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили, используя аспект Стьюдента.

Результаты и их обсуждение

3.1 Оценка ФА нейтрофилов опосля 45 и 120 минут инкубации в среде содержащей смеси актовегина и НФКК

Понятно, что лейкоциты играют важную роль в иммунной системе организма человека. Одними из основных клеток прирожденного иммунитета являются нейтрофилы, осуществляющие первую линию защиты от инфекции (Термин означает различные виды взаимодействия чужеродных микроорганизмов с организмом человека). В базе их защитной функции лежит фагоцитарный процесс, который заключается в их возможности распознавать, всасывать, убивать и переваривать микробные клеточки. Фагоцитарная активность — одна из физиологических функций нейтрофилов, является принципиальной составляющей частью общей резистентности организма. При перенесении клеток целостного организма в условия жизни in vitro приводит к их выходу из под контроля нейрогуморальных причин.

Как понятно, лейкоциты чувствительны к действию низких температур, что выражается в структурных конфигурациях в цитоплазме и плазматических мембранах, митохондриях, лизосомах, понижении в 7-10 раз интенсивности биохимических действий в клеточках, что в свою очередь ведет к исчезновению возможности данных клеток к фагоцитозу.

Согласно литературным данным лейкоциты донорской крови (внутренней средой организма человека и животных) различных сроков и критерий хранения характеризуются низким уровнем фагоцитарной активности (ФА), о чем свидетельствует незначимый процент фагоцитирующих клеток, также число микробов захваченных одной клеточкой опосля гипотермического хранения. Понижение фагоцитарной активности лейкоцитов свидетельствует о том, что клеточка истощается, а означает и понижается ее энергетический статус. Т. к. фагоцитоз — это энергозависимый процесс, главный задачей при хранении лейкоцитов является поддержание и восстановление их энергетического потенциала. В связи с сиим, в критериях in vitro при гипотермическом хранении лейкоцитов акцентируется внимание на компонентах реабилитирующих сред, которые содействуют восстановлению клеток. В данном направлении проведено огромное количество исследовательских работ, направленных на внедрение для культивирования клеток различных сывороток крови (внутренней средой организма человека и животных) и их фракций.

действие низкомолекулярного деривата крови (внутренней средой организма человека и животных) молочных телят — актовегина более выражен при гипоксическом нраве повреждения клеток и тканей. В критериях внутриклеточной дефицитности кислорода клеточка поддерживает собственные энерго потребности за счет активации действий анаэробного гликолиза. В итоге источниками энергии служат эндогенные припасы АДФ и аденозина. Истощение энергетических резервов ведет к деструкции клеточных мембран и цитолизу. Основой фармакологического деяния актовегина является повышению употребления и транспорта кислорода и глюкозы, что приводит к активации действий аэробного окисления увеличивая энергетический статус клеточки и оказывает воздействие на ее многофункциональный метаболизм.

Понятно, что кордовая образованная водянистой соединительной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) является неповторимым источником на биологическом уровне активных веществ, а ее диапазон деяния и состав имеет ряд преимуществ по сопоставлению с донорской кровью (внутренней средой организма) и кровью (внутренней средой организма) молочных телят. Хотя высокомолекулярные составляющие кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) отыскали обширное применение в медицинской практике и остальных областях науки, био активность низкомолекулярной фракции не исследована. Тем наиболее, что в современной клеточной биотехнологии одной из основных задач есть разработка всепригодных сред для культивирования и хранения клеток, не содержащих сыворотку крови (внутренней средой организма человека и животных), которая имеет ряд недочетов.

3.1.1 Определение ФИ нейтрофилов опосля 45 и 120 минут инкубации ЛМ в среде содержащей смеси актовегина и НФКК

Проведенная нами сравнительная оценка ФА нейтрофилов донорской крови (внутренней средой организма человека и животных) опосля хранения при температуре +4°С, как общая черта многофункционального статуса лейкоцитов, показала, что актовегин и НФКК в разных концентрациях по различному влияют на степень активации лейкоцитов.

Рис. 1 Воздействие 45 минутной инкубации лейкоцитарной массы в средах, содержащих разные концентрации актовегина и низкомолекулярной фракции кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) на фагоцитарный индекс нейтрофилов

На рис. 1 представлена динамика фагоцитарного индекса (ФИ) нейтрофилов, отражающего процент клеток вступивших в реакцию со стафилококком, т.е. количество фагоцитирующих клеток. В наших опытах было установлено, что при гипотермическом хранении ЛМ происходит понижение количества нейтрофилов вступивших в реакцию (рис. 1, 2). При инкубации ЛМ в течении 45 мин. в среде содержащей 0,17% раствор актовегина, наблюдалось незначимое увеличение данного показателя до 50,12±3,62% по сопоставлению со значениями ФИ нейтрофилов трнсфузионной лейкоцитарной массы, которое составляло 42,71±1,03%. При добавлении в среду инкубации исследуемых концентраций ФНКК увеличение ФИ не наблюдалось.

Опосля 120 мин. инкубации ЛМ повышение процента фагоцитирующих нейтрофилов было записанно в среде содержащей наибольшие смеси исследуемых препаратов по сопоставлению с нейтрофилами хранившимися при +4°С, при всем этом данный показатель достоверно не различался от значений нативных нейтрофилов (рис.2). При инкубации лейкоцитов в средах содержащих 0,017%, 0,033%, 0,17%, 0,33% смеси исследуемых препаратов значимого роста ФИ нейтрофилов не происходило.

Рис. 2 Воздействие 120 минутной инкубации лейкоцитарной массы в средах, содержащих разные концентрации актовегина и низкомолекулярной фракции кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) на фагоцитарный индекс нейтрофилов

3.1.2 Определение ФЧ нейтрофилов опосля 45 и 120 минут инкубации ЛМ в среде содержащей смеси актовегина и НФКК

При исследовании фагоцитарного числа (ФЧ), характеризующего количество поглощенных бактерий (рис. 3, 4) была отмечена совершенно другая динамика данного показателя. Как показано на рисунке 3, гипотермическое хранение лейкоцитов содействовало понижению ФЧ исследуемых клеток. Захват стафилококка нейтрофилами опосля 45 и 120 мин. инкубации ЛМ составил 7,15±0,84 ед. ед. и 6,89±0,55 ед., соответственно, по сопоставлению с ФЧ интактных нейтрофилов опосля их инкубации в протяжении такового же времени. Значимые отличия по сопоставлению с нейтрофилами трансфузионной лейкоцитарной массы были отмечены при инкубации в течении 45 мин. ЛМ в среде содержащей минимальную концентрацию НФКК (рис. 3). количество поглощенных микробных тел при 45 мин. инкубации лейкоцитов с НФКК в концентрации 0,017% составляло 19,19±1,29 ед., в то время как в группе нейтрофилов трансфузионной ЛМ данный показатель не превосходил 7,15±0,84 ед. добавление наиболее больших концентраций НФКК (0,033%, 0,17%, 0,33%) приводило к понижению захвата нейтрофилами микробных тел. При добавлении к трансфузионной массе лейкоцитов актовегина в таковой же концентрации, значения ФЧ оставались на уровне необработанных нейтрофилов. К увеличению поглотительной возможности нейтрофилов, приводила инкубация лейкоцитов в среде, содержащей актовегин, но в наиболее больших концентрациях — 0,033% и 0,17% до 18,6±1,13 ед. и 13,07±0,7 ед. Наибольшее повышение поглотительной возможности нейтрофилов, превосходящее значения нативных клеток, наблюдалось ри добавлении в среду инкубации малых концентраций НФКК (рис. 3).

Среднее количество микробных тел поглощенных одним нейтрофилом при инкубации ЛМ в течении 120 мин. с 0,017% веществом НФКК, не глядя на значения данного показателя при 45 мин. инкубации, было сниженным и не превышало значения нативных нейтрофилов (рис. 4). Инкубация исследуемых клеток с наиболее высочайшими концентрациями НФКК не оказывала важного воздействия на данный показатель.

Рис. 3 Воздействие 45 минутной инкубации лейкоцитарной массы в средах, содержащих разные концентрации актовегина и низкомолекулярной фракции кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) на фагоцитарное число нейтрофилов

Добавление актовегина к суспензии лейкоцитов в вышеуказанной дозе также не содействовало увеличению данного показателя. Более выраженное увеличение ФЧ в при инкубации ЛМ в течении 120 мин. было записанно при добавлении в среду 0,033% раствора актовегина и составило 15,96±1,06 ед., в то время как у интактных нейтрофилов ФЧ достигало только 11,3±0,26 ед. При увеличении концентрации актовегина было отмечено ингибирование характеристик ФЧ нейтрофилов.

Рис. 4 Воздействие 120 минутной инкубации лейкоцитарной массы в средах, содержащих разные концентрации актовегина и низкомолекулярной фракции кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) на фагоцитарное число нейтрофилов

Невзирая на то, что исследование поглотительной возможности нейтрофилов при инкубации в течении 120 мин. в среде содержащей 0,017% раствор НФКК привело к низким значениям, их переваривающая способность была на высочайшем уровне. Подобная закономерность наблюдается и при добавлении к среде инкубации трансфузионной ЛМ 0,17% раствора актовегина, т. е. в концентрации в 10 раз большей по сопоставлению с НФКК.

Исходя из вышесказанного, можно прийти к выводу о том, что низкомолекулярная фракция кордовой крови (внутренней средой организма человека и животных) КРС увеличивала фагоцитарную активность лейкоцитов в значително наименьшей концентрации по сопоставлению с актовегином, что свидетельствует о ее наиболее выраженной био активности.

3.1.3 Оценка КЗФ нейтрофилов опосля инкубации ЛМ в среде содержащей смеси актовегина и НФКК

О оканчивающей стадии фагоцитоза судят по деградации его объекта. Для этого в данной работе явилось целесообразным исследование основного показателя, по которому можно судить о полноценности фагоцитоза — это КЗФ. Данный показатель охарактеризовывает способность нейтрофилов переваривать оккупированные бактерии, т. е. степень деградации объекта фагоцитоза. Приобретенные результаты представлены на рисунках 5 и 6.

Рис. 5 Воздействие разных концентраций актовегина, содержащихся в среде инкубации лейкоцитарной массы на коэффициент завершенности фагоцитоза нейтрофилов

Из рисунков следует, что хранение трансфузионной лейкоцитарной массы при +4°С приводит к понижению КЗФ нейтрофилов в 1. 5 раза, что составляет 1,56±0,02 ед., по сопоставлению со значениями нативных нейтрофилов 1,06±0,02 ед. При добавлении в среду инкубации ЛМ 0,017%, 0,033% и 0,33% смесей актовегина КЗФ оставался в границах единицы и составлял 1,07±0,05 ед., 1,11±0,05 ед., 1,02±0,03 ед., соответственно. Что согласно данным литературы [] соответствует критичному уровню, когда скорость поглощения микробных тел нейтрофилами превосходит скорость их переваривания. Но при добавлении в лейкоциты среду инкубации содержащую 0,17% раствор актовегина КЗФ существенно возрастает и составляет 1,61±0,01 ед., что добивается значений, соответствующих для нативных нейтрофилов (рис.5)

Рис. 5 Воздействие разных концентраций актовегина, содержащихся в среде инкубации лейкоцитарной массы на коэффициент завершенности фагоцитоза нейтрофилов

При инкубации трансфузионной массы лейкоцитов со средами, содержащими исследуемые концентрации НФКК (рис. 6) наблюдалась другая динамика конфигурации переваривающей возможности нейтрофилов. Наибольшая способность к деградации объекта фагоцитоза происходила при инкубации ЛМ в среде, содержащей самую низкую концентрацию НФКК (0,017%). Добавление к суспензии лейкоцитов исследуемой фракции в данной концентрации приводило к повышению КЗФ нейтрофилов в 1,8 раза по сопоставлению с КЗФ нейтрофилов хранившихся при +4°С и в 1.2 раза по сопоставлению нативными нейтрофилами. При добавлений в среду инкубации ЛМ остальных концентраций актовегина и НФКК не приводило к увеличению данного показателя, о чем свидетельствует КЗФ находящийся на критичном уровне.

Исходя из приобретенных данных фагоцитарной активности нейтрофилов, можно сказать, что многофункциональный статус нейтрофилов трансфузионной ЛМ, хранившейся при +4°С, восстанавливается при использовании исследуемых препаратов. Более выраженное восстановление ФА, а как следует и многофункциональных особенностей нейтрофилов наблюдается при инкубации нейтрофилов в 0,017% растворе НФКК и 0,17% растворе актовегина.

3.2 Активность кислород-зависимых антибактериальных устройств нейтрофилов опосля инкубации ЛМ в среде содержащей смеси актовегина и НФКК

В крайние годы накоплен значимый материал, который дозволяет разглядывать конфигурации функционально-метаболической активности лейкоцитов крови (внутренней средой организма человека и животных). А именно внутриклеточный киллинг нейтрофилами, который бывает 2-ух типов: кислород-зависимый (свободнорадикальный) и бескислородный (гидролазный либо цитазный). Кислород-зависимые механизмы киллинга важнее, чем бескислородные, потому что активны в отношении микробов с неповрежденной клеточной стеной.

Одним из звеньев цепи фагоцитоза является генерация активных форм кислорода (АФК) нейтрофилами. Посреди различных видов клеток более массивными генераторами (АФК) являются фагоциты — гранулоциты и моноциты. Генерация ими АФК — супероксидного анионракдикала, синглентного кислорода, гидроксильного радикала и перекиси водорода — и поглощение кислорода (О2) в особенности резко растут при активации и фагоцитозе, что получило заглавие «респираторный взрыв» фагоцитов, сущность которого сводится к резвому образованию и выбросу во внеклеточную среду огромных количеств супероксидного анион-радикала (О2-) и перекиси водорода. Это событие является защитной реакцией иммунокомпетентных клеток в борьбе с чужеродными элементами. Особо важную роль в механизме генерации АФК фагоцитами играет активация НАДФ·Н2-оксидазы и остальных оксидаз, которые содействуют переносу электрона на кислород, инициируя его восстановление. Одним из инструментов исследования АФК (определение степени генерации О2-) является реакция восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) — НСТ-тест. НСТ-тест отражает кислород-зависимый метаболизм, до этого всего функцию гексозомонофосфатного шунта (ГМФШ) и связанную с ним наработку вольных радикалов. НСТ-тест не только лишь дозволяет выявить фагоцитирующие нейтрофилы, но может охарактеризовывать и состояние их ферментных систем, употребляться для дифференциального отклонении в состоянии здоровья обследуемого либо о причине погибели»> отклонении в состоянии здоровья обследуемого или о причине смерти»>диагноза (краткое медицинское заключение об имеющемся заболевании (травме), отклонении в состоянии здоровья обследуемого или о причине смерти) бактериальных и вирусных зараз, также для оценки запасной функции фагоцитоза.

]]>