Учебная работа. Влияние перекисных условий на показатели функциональной активности нейтрофилов перифирической крови человека

РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов) — рибонуклеиновая кислота

ФНО — фактор некроза опухолей

ФП — фагоцитарный показатель

ФЧ — фагоцитарное число

цАМФ — повторяющийся аденозинмонофосфат

Введение

Представления о повреждающем действии свободнорадикальных либо радикалообразующих товаров одноэлектронного восстановления кислорода в био системах являются доминирующими в течение крайних 3-х десятилетий. Основное внимание завлекают такие формы активированного кислорода, как супероксидный радикал, перекись водорода Н2О2, синглетный кислород О., гидроксильный радикал ОН., также липидные радикалы, образующиеся в водянистой фазе при распаде гидроперекисей липидов ROOH. [1,2]

В бессчетных исследовательских работах было внушительно показано, что окислительные деструктивные процессы, вызываемые завышенными уровнями активированных форм кислорода в конденсированной аква фазе, также липидными радикалами и гидроперекисями, могут лежать в базе клеточной патологии и сопряженных с нею болезней. В целом, результаты этих исследовательских работ можно разглядывать как развитие задачи свободнорадикальной патологии и перекисного окисления в био структурах. [3] С этих позиций в истинное время интерпретируются механизмы сердечно-сосудистой патологии и атеросклероза (атеросклероз — хроническое заболевание артерий эластического и мышечно-эластического типа) [4], дегенеративных болезней нервной системы [5], аутоиммунных и приобретенных воспалительных болезней [6], старения, злокачественного роста [7] и др.

Не наименее необходимыми, но существенно наименее изученными, являются представления о био роли кислородных радикалов и действий перекисного окисления в критериях физиологической нормы. Меж тем, скапливается все больше фактов, указывающих на важную роль этих активных товаров и действий в обычной жизнедеятельности.

Регуляторное роль активированных форм кислорода в жизнедеятельности клеточки в норме установлено в действиях клеточного деления [8], экспрессии генов и апоптоза [9], a также в реакциях неферментативной регуляции окислительного стресса, обновлении состава и изменении многофункциональных параметров биомембран, участии в энергетических действиях, синтезе на биологическом уровне активных веществ.

Главным механизмом образования эндогенной перекиси водорода в организме является реакция дисмутации, осуществляемая методом восстановления супероксиддисмутазами супероксидного анионрадикала. Источниками супероксидных анионрадикалов являются разные оксидазные системы, посреди которых особенное пространство занимает НАДФН_оксидазная реакция, лежащая в базе «респираторного» взрыва, реализующегося в процессе фагоцитарной реакции. Генерация активных форм кислорода является одной из главных цитотоксических функций нейтрофилов. Понятно, что недостающая продукция перекиси водорода нейтрофилами в процессе фагоцитоза при приобретенном гранулематозе тянет за собой нарушение антивосполительных устройств.[10]

По данным литературы перекись водорода эндогенного происхождения провоцирует скопление в клеточке цAMФ и цГМФ, вызывает скопление ионов Са2+ в цитозоле и активацию главных протеинкиназ сигнальных путей и ингибирование протеинфосфатаз; что приводит к активации транскрипционного фактора NF-kB, а это, в свою очередь, вызывает секрецию провоспалительных цитокинов и индуцирует иммунный ответ, также содействует синтезу и секреции белков острой фазы.

Разумеется, что роль эндогенной перекиси водорода в иммунной системе обширнее, чем предполагалось ранее и имеет крови (внутренней средой организма человека и животных) происходит на фоне «праймированного» состояния. Праймирующий стимул вызывает метаболическую перестройку, не приводящую к активации клеточки, следствием его воздействия является усиление ответа на следующую активацию. время находится в стадии формирования. Предполагается, что праймирование реализуется в итоге перекрестного содействии сигнальных путей, задействованных в первичной сборке и активации NADPH оксидазы. [10, 11]

Ввиду трудности регуляции функций нейтрофилов возникает большенный энтузиазм к выяснению обстоятельств появления патологических действий, связанных с нефункциональностью действий дегрануляции и усиленной генерации АФК полиморфноядерными гранулоцитами.

исследование эффектов физиологических медиаторов на функционирование нейтрофилов, а именно, перекиси водорода эндогенного либо экзогенного происхождения представляется животрепещущим для выработки в предстоящем целенаправленного подхода к терапевтической корректировки нарушений их многофункциональной активности.

Целью данной работы было исследование воздействия окислительных уловий на многофункциональную активность полиморфноядерных гранулоцитов периферической крови (внутренней средой организма человека и животных) человека in vitro.

Для реализации данной цели были поставлены последующие задачки:

1. Изучить воздействие моделированных окислительных критерий на динамику конфигурации поглотительной возможности и фагоцитарной активности нейтрофилов на разных стадиях протекания фагоцитарной реакции.

2. Изучить воздействие моделированных окислительных критерий на кинетику ферментативных реакций внутриклеточного кислород-зависимого киллинга нейтрофилов в тестах спонтанного и индуцированного восстановления нитросинего тетразолия.

3. Изучить воздействие моделированных окислительных критерий на ферментативную активность миелопероксидазы нейтрофилов в тестах спонтанного и индуцированного окисления ортофенилендиамина.

4. Изучить воздействие моделированных окислительных критерий на способность нейтрофилов к спонтанной и индуцированной адгезии.

1. Обзор литературы

1.1 Молекулярные механизмы и физиологическая роль фагоцитарной реакции, осуществляемой нейтрофилами

Фагоцитоз — явление поглощения и переваривания нейтрофилами корпускулярного материала (микробов, больших вирусов, отмирающих собственных клеток организма либо чужеродных клеток) (набросок 1). Случайный либо обусловленный сенсорами контакт микробной клеточки с фагоцитом (макрофагом, нейтрофилом) приводит к образованию выростов мембраны — псевдоподий, окружающих чужеродную клеточку. Сформировавшаяся вакуоль (фагосома) в 10-20 раз больше пиносомы. Она погружается в клеточку, где опосля слияния с лизосомами образует фаголизосому. Конкретно в ней за счет активности гидролитических ферментов происходит полное либо частичное разрушение патогена. часть разрушенных компонент микробной клеточки удаляется в экстрацеллюлярную среду, иная остается на поверхности фагоцитирующей клеточки.

Набросок 1 — Механизм фагоцитарного процесса

1-ая стадия — хемотаксис (набросок 2). В качестве хемоаттрактантов выступают продукты, выделяемые микробами и активированными клеточками в очаге воспаления (цитокины, лейкотриен В4, гистамин), также продукты расщепления компонент комплемента (С3а, С5а), протеолитические фрагменты причин свертывания крови (внутренней средой организма человека и животных) и фибринолиза (тромбин, фибрин), нейропептиды, фрагменты иммуноглобулинов и др. Но, «проф» хемотаксинами служат хемокины. Главным хемокином, управляющим миграцией нейтрофильных лейкоцитов, служит интерлейкин-8 (ИЛ-8). В очаге воспаления главными продуцентами ИЛ-8 являются макрофаги и клеточки эндотелия. Сигналом для вывода циркулирующих лейкоцитов из кровеносного русла в объединённых общим происхождением при воспалении является их взаимодействие с ИЛ-8, экспонированным на поверхности микроваскулярного эндотелия. Хемотаксис инициируется низкой концентрацией (10-8 — 10-10 М) веществ, в то время как их огромные концентрации (10-6 10-7 М) вызывают прекращение хемотаксиса и активацию секреторных действий, сопровождающуюся переходящим увеличением в 10-50 раз содержания внутриклеточного Са2+.

Набросок 2 — Хемотаксис нейтрофилов

Ранее остальных клеток в очаг воспаления мигрируют нейтрофилы, значительно позднее поступают макрофаги. [15]

Адгезия обоснована наличием на поверхности фагоцитов рецепторов для молекул, представленных на поверхности объекта (собственных либо связавшихся с ним). При фагоцитозе микробов либо старенькых клеток организма владельца происходит определение концевых углеводных групп — глюкозы, галактозы, фукозы, маннозы и др. Определение осуществляется лектиновыми сенсорами соответственной специфики, сначала маннозосвязывающим белком и селектинами (набросок 3).

Набросок 3 — Пространственная организация лектиновых рецепторов

Специфичное определение подлежащего фагоцитозу объекта осуществляется с помощью рецепторов к опсонинам. Принципиальная роль принадлежит Fc- рецепторам. Fc-нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри 1, 2А, 3А типов обеспечивают положительную регуляцию фагоцитоза. Fc- сенсор 2В типа обеспечивает нехорошую регуляцию фагоцитоза. Fc-рецептор 3В типа способен запускать Са- сигнальный путь и вызывать полимеризацию актина, но до конца его роль не исследована. Не считая этого активирующую функцию делают нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри к компонентам комплемента (CR1, 3, 4). [16]

Нейтрофил способен распознавать бактерии без подготовительной их опсонизации, через TLR (Toll-Like Receptors) (набросок 4).

Набросок 4 — Пространственная организация Toll-like рецепторов

Интегрины нейтрофила Mac-1 (CD11b/CD18) и p150 (CD11c/CD18) также участвуют в прямом распознавании и связывании ряда микробов (набросок 5).

Набросок 5 — нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри клеточной адгезии

Последующий шаг — активация мембраны и образование фагосомы.

На данной для нас стадии осуществляется подготовка объекта к погружению. Происходит активация протеинкиназы С, выход ионов кальция из внутриклеточных депо. Огромное месте контакта возникает участок плотного геля. Дальше из-за роста концентрации Са2+ гель под воздействием гельзолина преобразуется в наиболее водянистый золь. Это обуславливает «проваливание» объекта вовнутрь фагоцита.

Происходит обволакивание объекта вследствие конфигурации состояния цитоскелета и физико-химической структуры цитоплазмы. Низкомолекулярный G-актин преобразуется в полимеризованный F-актин в процессе поочередной активации ферментативного каскада. F-актин заходит в состав цитофиламентов, которыми богата псевдоподия, создаваемая фагоцитом при контакте с объектом. Псевдоподия растягивается в направлении объекта и прилипает к нему. Вследствие сокращения актиновых волокон и конфигурации вязкости цитоплазмы объект на сто процентов охватывается мембраной фагоцита, которая впоследствие замыканется по механизму «молнии». [18]

В цитозоле фагосомы соединяются с первичными лизосомами, образуя фаголизосомы. Первичные лизосомы, образованные аппаратом Гольджи, содержат ряд гидролаз, способных разрушать органические молекулы в кислой среде: протеиназы, фосфатазы, эстеразы, ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов)-азы, РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов)-азы. Низкое действие и создаёт лучшую среду для активации лизосомальных гидролаз. В итоге деяния этих ферментов разрушаются полимерные молекулы и образуются аминокислоты, моносахариды, нуклеотиды, которые поступают в цитозоль и могут употребляться клеточкой. Большая часть мембранных компонент и непереваренные субстраты локализуются в остаточных тельцах, которые путём экзоцитоза ворачиваются на поверхность плазматической мембраны фагоцитов, при всем этом значимая часть мембранных компонент может утилизироваться и в самой мембране. [16]

Выделяют 2 главных механизма киллинга: кислородозависимый и кислородонезависимый. [10]

Кислородзависимый механизм. Принципиальным компонентом является фермент НАДФH+-оксидаза. НАДФH+-оксидаза является частью биохимического пути, регулирующего поток электронов к разным субстратам. Фермент состоит из 5 белковых субъединиц, образующих комплекс НАДФH+-оксидазы и регуляторного белка Rac-2. В состав НАДФ-оксидазного комплекса входят: гликопротеины gp91 (91 кД, ген gp91phox) и p22 (22 кД, ген p22phox) — мембранные составляющие комплекса; цитоплазматические составляющие — белки p47 (47 кД, ген p47phox), p67 (67 кД, ген p67phox) и p40 (набросок 6).

Сигнальные действия на клеточной поверхности приводят к связыванию ГТФ с Rac-2 в цитоплазме. Rac-2 потом связывает и выравнивает цитоплазматический белок p67, который фосфорилируется протеинкиназой C. Фосфорилирование p47 ведёт к его взаимодействию с цитоскелетом и транслокации в мембрану. [14]

В активированном нейтрофиле мембранные белки gp91phox и p22phox ведут взаимодействие с цитоплазматическими компонентами комплекса — 47 кД (p47phox) и 67 кД (p67phox). Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (G6PD) преобразует глюкозо-6-фосфат в 6-фосфоглюконолактон, генерируя НАДФH и H+ из НАДФ+.

Набросок 6 — Функционирование НАДФ оксидазного комплекса

Ферментный комплекс мембраны фагосом — NADPH-оксидаза восстанавливает О2, образуя супероксидный анион:

2 О2 + NADPH > 2 O2- + NADP+ + H+

Супероксидный анион спонтанно либо при участии фермента супероксиддисмутазы преобразуется в пероксид водорода:

О2- + О2- + 2Н+ > Н2О2 + О2

2-ой кислородзависимый механизм разрушения микробов осуществляется при участии миелопероксидазы, которая катализирует развитие токсического действия на разные мельчайшие организмы; перекиси водорода; супероксидного аниона; синглетного кислорода и гидроксильных радикалов, атомарного хлора (Сl). [39] Под действием миелопероксидазы, проникающей в фагосому при её слиянии с лизосомой, из пероксидов в присутствии галогенов (йодидов и хлоридов) образуются доп ядовитые окислители — гипойодид и гипохлорид.

Н2О2 + Cl- + H+ > НОС1 + H2O

В целом кислородзависимый механизм представлен на рисунке 7.

Набросок 7 — Кислородзависимый механизм киллинга при фагоцитозе

Резкое повышение употребления кислорода фагоцитирующей клеточкой именуется «респираторным взрывом». Активные формы кислорода инициируют свободнорадикальные реакции, разрушающие липиды клеточных мембран поглощённых фагоцитами микробов. Некие устойчивые мельчайшие организмы остаются жизнестойкими снутри фагоцитов, и их антигены вызывают в месте скопления фагоцитов клеточный иммунный ответ и формирование гранулём. [14]

Антибактериальное действие в нейтрофилах оказывает и оксид азота (NO). Оксид азота в этих клеточках появляется под действием фермента NO- синтазы из аргинина (набросок 8). [17]

Супероксид-анион образует с NO соединения, владеющие большенными антибактериальными качествами, чем сам NO:

NO + О2- > ONOO- > ОН* + NO2

Пероксинитрил (ONOO-), оксид азота, диоксид азота, радикал гидроксила вызывают окислительное повреждение белков, нуклеиновых кислот и липидов бактериальных клеток. Оксид азота может конкретно вести взаимодействие с железосерными белками ЦПЭ, ингибируя дыхание и синтез АТФ в микробах. При содействии NO с О2 образуются нитриты, которые преобразуются в нитраты, также владеющие токсическим действием.

Набросок 8 — Работа NO- синтазы

Вспышка метаболической активности нейтрофила завершается его смертью.

1.2 Активные формы кислорода: физиологические и био функции

В истинное время понятно, что в норме АМК (перекись водорода, гипохлорит ион, кислородные радикалы — супероксидный и гидроксильный) играют важную роль в почти всех актуально принципиальных действиях в организме. Воздействие АМК проявляется в обновлении состава и обеспечении многофункциональных параметров биомембран, участии в энергетических действиях, клеточном делении, синтезе на биологическом уровне активных веществ.

Перекись водорода ( Hydrogenii peroxidum) — неорганическое хим соединение, молекулярный вес 34, 01. Молекула перекиси водорода не представляет собой линейную последовательность атомов водорода и кислорода. Связи меж атомами водорода и кислорода размещены под прямым углом к связи меж атомами кислорода, при этом в нескольких вариантах (набросок 9). [13]

Связь O—O непрочна, потому H2O2 — неустойчивое соединение, просто разлагается. Пероксид водорода проявляет слабенькие кислотные характеристики (К = 1,4·10?12), и потому диссоциирует по двум ступеням:

Набросок 9 — Пространственное строение молекулы перекиси водорода

Пероксид водорода владеет окислительными, также восстановительными качествами. Пероксид водорода является наиболее мощным окислителем, т. е. просто отдаёт собственный излишний (по сопоставлению с наиболее устойчивым соединением — водой) атом кислорода. Конкретно на окислительных свойствах основано его практическое применение. Соответствующий для пероксида водорода окислительный распад быть может схематически изображён так:

Н2О2 = Н2О + О (на окисление)

Кислая среда наиболее способствует этому распаду, чем щелочная. Существенно наименее характерен для пероксида водорода восстановительный распад по схеме:

Н2О2 = О2 + 2 Н (на восстановление)

Щелочная среда наиболее способствует такому распаду, чем кислая.

1.2.1 Образование АФК в организме

В организме перекись водорода появляется в итоге блокады конечного звена дыхательной цепи в митохондриях в критериях гипоксии, когда происходит разгрузка дыхательной цепи от повсевременно пополняющих ее электронов за счет их утечки по пути следования к цитохромоксидазе. Предпосылкой образования супероксидного анион-радикала и перекиси водорода в тканях при гипоксии является одноэлектронное восстановление O2 на убихиноне под воздействием электронов, не достигающих цитохромоксидазы.

Набросок 10 — Образование АФК в организме

Не считая этого в процессе фагоцитоза супероксид-радикалы подвергаются действию супероксиддисмутазы, вследствие чего же появляется перекись водорода. В норме фагоциты употребляют перекись водорода для синтеза гипохлорита под воздействием миелопероксидазы. Гипохлорит разрушает стену бактериальной клеточки и тем убивает бактерии. Перекись водорода диффундирует в клеточки, но там разрушается в итоге активности ферментов каталазы и глутатионпероксидазы . [24, 29]

В присутствии ионов двухвалентного железа перекись водорода разлагается с образованием гидроксильного радикала. Радикал гидроксила очень активен химически и разрушает практически всякую встретившуюся ему молекулу. Действуя на SH-группы, гистидиновые и остальные аминокислотные остатки белков, он вызывает денатурацию крайних и инактивирует ферменты. В нуклеиновых кислотах гидроксил радикал разрушает углеводные мостики меж нуклеотидами и, таковым образом, разрывает цепи ДНК (Дезоксирибонуклеиновая кислота — макромолекула, обеспечивающая хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов) и РНК (Рибонуклеиновая кислота — одна из трёх основных макромолекул (две другие — ДНК и белки), которые содержатся в клетках всех живых организмов), в итоге чего же происходят мутации и смерть клеток. Внедряясь в липидный слой клеточных мембран, радикал гидроксила запускает (инициирует) реакции цепного окисления липидов, что приводит к повреждению мембран, нарушению их функций и смерти клеток. [24, 31]

Перекись водорода появляется в реакциях с ролью флавожелезопротеидов, медьсодержащих оксидаз, ферментов, содержащих молибден (ксантиндегидрогеназа, ксантиноксидаза, альдегидоксидаза). К дегидрогеназам, которые при помощи флавопротеидов переносят водород на молекулярный кислород с образованием H2O2, относятся моноамино-, диамино, глицин-, гликольоксидазы. действие ферментов группы монооксигеназ (гидроксилаз), а именно флавопротеидных, включает поочередные стадии, в каких восстановитель переводит флавин в дигидроформу, восстанавливающую O2 до H2O2, потом фермент-флавин-пероксидный комплекс гидроксилирует субстрат. Образование H2O2 происходит при самопроизвольном окислении гемоглобина, ферредоксинов, восстановленных цитохромом b5 гидрохинонов, тетрагидроптеридинов, адреналина.

Ферменты, участвующие в метаболизме H2O2, в значимом количестве содержатся в таковых клеточных органеллах, как пероксисомы.

В их H2O2 образует обыкновенные самоокисляющиеся флавопротеиды — ферменты уратоксидаза, оксидаза D-аминокислот, оксидаза a-оксикислот, а каталаза разрушает ее. Каталаза употребляет H2O2, образованную иными ферментами в пероксисоме, для окисления огромного количества субстратов — к примеру, фенолов, мурвьиной кислоты, формальдегида и спирта — при помощи окислительной реакции:

H2O2 + R.H2 —> R.+ 2H2O

1.2.2 Воздействие АФК на мембраны

В истинное время считают, что перекись водорода в физиологических (микромолярных) концентрациях оказывает на клеточки стимулирующее действие. Воздействие перекиси проявляется в обновлении состава и обеспечении многофункциональных параметров биомембран, участии в энергетических действиях, клеточном делении, синтезе на биологическом уровне активных веществ.

Вольные радикалы, в том числе и перекись водорода могут инициировать перекисное окисление полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), играющее существенную роль в почти всех реакциях обмена, формировании структуры клеточки и, а именно, мембран. Возникающие перекиси липидов лучше растворяются в воде, чем ПНЖК, из которых они образуются, и потому легче вымываются из мембран, содействуя самообновлению мембранных структур. Это делает подходящие условия для функционирования ферментных систем в мембранах. Перекиси липидов нужны для биосинтеза эйкозаноидов (простагландинов, простациклинов, тромбоксанов, лейкотриенов), прогестерона. Они участвуют в гидроксилировании растворим в жирах и органических растворителях. «>действие. одной из принципиальных мишеней повреждающего деяния Н2О2 на микробную клеточку является ее плазматическая мембрана. Происходит лишная активация действий перекисного окисления липидов (ПОЛ) (набросок 11).

Набросок 11 — Перекисное окисление липидов

Более чувствительны к действию этих форм кислорода полиеновые жирные кислоты, которые в главном локализованы в фосфолипидах мембран. Легче всего вольные радикалы О2 отрывают электрон от СН2-группы, находящейся меж 2-мя двойными связями. Образуются вольные радикалы жирной кислоты. Потом в итоге развития цепной реакции образуются перекиси липидов. Конечным продуктом деградации жирных кислот при ПОЛ является малоновый диальдегид. Это химически весьма активное вещество, которое своими альдегидными группами способно вести взаимодействие с аминогруппами белков, вызывая их необратимую денатурацию.

Перекисное окисление липидов сопровождается окислением тиоловых (сульфгидрильных) групп мембранных белков. Это может приводить в итоге к неферментативной реакции SH-групп со вольными радикалами липидов. При всем этом образуются сульфгидрильные радикалы, которые потом ведут взаимодействие с образованием дисульфидов или окисляются кислородом с образованием производных сульфоновой кислоты.

2-ой итог перекисного окисления липидов связан с тем, что продукты пероксидации владеют способностью конкретно наращивать ионную проницаемость липидного бислоя. Так, показано, что продукты перекисного окисления липидов делают липидную фазу мембран проницаемой для ионов водорода и кальция. Это приводит к потере митохондриями возможности производить синтез АТФ, и клеточка оказывается в критериях энергетического голода. сразу в цитоплазму выходят ионы кальция, которые повреждают клеточные структуры.

3-ий итог пероксидации — это уменьшение стабильности липидного слоя, что может привести к электронному пробою мембраны своим мембранным потенциалом, другими словами под действием разности электронных потенциалов, имеющейся на мембранах жив клеточки. электронный пробой приводит к полной потере мембраной ее барьерных функций. [41]

1.2.3 Воздействие АФК на белковые молекулы

Окислительной модификации также подвергаются белковые молекулы. Активные формы кислорода штурмуют белки по всей длине полипептидной цепи, нарушая первичную, вторичную, третичную структуры. Это приводит к агрегации и фрагментации белковой молекулы. Более всераспространенный тип повреждения белка — образование карбонильных групп при окислении аминокислот: лизина,аргинина и пролина. Карбоксильные группы белков под действием активных форм кислорода преобразуются в карбонильные группы, которые могут вести взаимодействие с аминогруппами и с углеводами, образуя Шиффовы основания, приводящие к образованию поперечных сшивок меж белковыми молекулами (продукты Амадори) и нарушению их активности. [34]

Одно из проявлений сшивок меж белками — утрата тканями эластичности. Это возникает при ковалентном «сетеобразовании», которое происходит при формировании поперечных ковалентных связей меж коллагеновыми волокнами (набросок 12). [52, 55]

Что касается фрагментации белков, то этот процесс инициируется гидроксильным радикалом в большей степени методом отрыва водорода у a-углеродного атома полипептидного остова молекулы с локализацией у этого атома вольной валентности. При этом, a-углеродный атом в составе полипептидной цепи (но не у вольных аминокислот) является одним из основных участков молекулы для атаки гидроксильным радикалом.

Набросок 12 — Схема повреждения белка АФК

Вторым неотклонимым условием для воплощения свободнорадикального расщепления полипептидной цепи является наличие в среде кислорода. Особо подвержены окислительному разложению пептидные ацил-пролиновые связи, чувствительные, по-видимому, даже к окислительной атаке О2. .Обосновано это наиболее легким окислением третичной амидной связи, чем вторичной, которую сформировывают остальные аминокислотные остатки. [46, 49]

1.2.4 Воздействие АФК на механизмы проведения сигнала в клеточку

В крайнее время обнаружены новейшие функции перекиси водорода. Они стимулируют скопление в клеточке вторых посредников — циклонуклеотидов: цAMФ и цГМФ. АФК вызывают скопление ионов Са2 + в цитозоле и стимуляцию фосфорилирования белков в итоге активации протеинкиназ (в особенности протеинкиназы С) и протеинтирозинкиназ и ингибирования протеинфосфатаз; активируют белок Ras, играющий важную роль в передаче сигналов в ядро клеточки. Интенсивно исследуется, не могут ли АФК сами прямо делать функции вторых посредников гормонов. В пользу этого свидетельствуют скопление АФК при действии причин роста клеток, цитокинов, инсулина, паратирина, витамина (витамины — сборная по химической природе группа органических веществ, объединённая по признаку абсолютной необходимости их для гетеротрофного организма в качестве составной части пищи) Д3 , модификация эффектов этих гормонов под воздействием АФК и их понижение либо блокада антиоксидантами. АФК и липидные ROOH в низких субтоксических концентрациях индуцируют такие процессы, как экспрессия генов (в том числе генов ранешнего ответа и остальных протоонкогенов) и деление клеток. Н2О2, накапливающаяся при инвазии вирусов и микробов, активирует транскрипционный фактор NF-kB, что приводит к индукции ряда цитокинов и иммунных рецепторов и в итоге к иммунным и воспалительным ответам, также к индукции белков острой фазы и адгезии (крайние содействуют выходу лейкоцитов в ткани (Строение тканей живых организмов изучает наука гистология), что принципиально при воспалении). Разумеется, роль АФК в защите организма обширнее, чем предполагалось ранее: она включает не только лишь фагоцитоз небезопасных клеток, да и пуск остальных воспалительных реакций и иммунных действий. [52,56]

на данный момент уже признана способность перекиси активировать транскрипцию генов, участвующих в индукции роста, дифференцировке и развитии клеток, Считается, что перекись водорода быть может сигнальной молекулой, осуществляющей передачу инфы от мембранных рецепторов на надлежащие цитоплазматические эффекторы либо транскрипционные причины. Установлено, что перекись водорода нужна для активирования ядерного фактора, контролирующего синтез оксида азота, 1-го из самых массивных микробицидных причин фагоцитов.

Некие создатели считают, что механизм деяния перекиси водорода на организм связан с тем, что при контакте с тканями под воздействием содержащегося в их фермента каталазы она стремительно разлагается с выделением атомарного кислорода, окисляющего разные органические составляющие микробных клеток. Атомарный кислород, как раз является одним из самых мощных антиоксидантов, устраняющих кислородное голодание тканей, да и, что не наименее принципиально, уничтожает всякую патогенную микрофлору (вирусы, грибы, бактерии и т. п.), также лишних вольных радикалов.

1.2.5 Внедрение АФК в медицине

Перекись водорода обширно употребляется в разных отраслях (индустрия, косметология), для нас наиболее принципиально ее внедрение в медицине.

Перекись водорода доступна в различной процентной концентрации, но в мед целях употребляется в главном 3%. [25]

Различны пути введения перекиси водорода в организм: от внешнего до интраназального, перорального, ректального, ингаляционного, внутривенного и даже внутриартериального.

Перекись водорода употребляется как антисептическое, гемостатическое, дезинфицирующее, дезодорирующее средство. [22]

Используют основным образом внешне в форме 1 — 3%-ного аква раствора перекиси водорода для обработки гнойных ран, язв, свищей и полостей, при воспалениях слизистых оболочек рта, глаз, глотки и среднего уха. Смеси перекиси водорода, нанесенные на слизистые оболочки либо на поверхность ран, действуют вяжуще и кровоостанавливающе.

издавна и крепко зарекомендовало себя внедрение перекиси водорода при заболеваниях полости рта и десен.

Для полоскания полости рта применяется 3-процентный раствор перекиси водорода либо (как вариант) прикладывание к нездоровым местам тампонов, смоченных в перекиси.[40]

При заболеваниях десен, также при пародонтозе рекомендуется втирать в нездоровые десны смесь из пищевой соды с 3-процентной перекисью водорода, смешанных до смеси пасты.

Перекись также помогает при отбеливании зубов и устранении противного аромата изо рта.

При ангинах 3% перекись водорода употребляется для полоскания гортани. Сочетание перекиси с веществом марганца отлично помогает при ринитах и гайморите — но в данном случае нужно употреблять 1-процентный раствор. Вводить смеси в полость носа рекомендуется с помощью маленького шприца или малеханькой спринцовкой.

При воспалении среднего уха применяется 0,5-3-процентная перекись для удаления гноя и обогащения тканей кислородом. При острых отитах закапывание не рекомендуется — продукт лучше вводить с помощью марлевых тампонов. [29]

При незначимых капиллярных кровотечениях в случае порезов либо ссадин на коже также употребляется перекись. За счет пенообразования смеси перекиси водорода оказывают местное кровоостанавливающее действие при капиллярных кровотечениях, обусловленное тем, что пена ускоряет переход фибриногена в фибрин, что и приводит к свертыванию крови (внутренней средой организма человека и животных) на раневых поверхностях, т.е. вроде бы цементируя их, тем останавливая кровотечение.

При грибковом поражении либо бородавках употребляется 6 — 15-процентный раствор перекиси водорода. В компрессах таковая концентрация недопустима — могут показаться ожоги; используют 0,5-1-процентный раствор. Компрессы с перекисью водорода используются при артритах и травматических болях в суставах. Накладывается на область хворого сустава.

При опухолях, находящихся близко к поверхности кожи, даже с признаками изъязвления применяется перекись водорода наиболее высочайшей (до 15%) концентрации. Помещенные на представленный новообразованной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы)«>способы исследования

2.1 Использованные материалы

В работе были применены последующие реактивы: хлорид натрия NaCl («5 океанов», г. Минск, хч), хлорид калия KCl («5 океанов», г.Минск, хч), гидрофосфат натрия NaH2PO4 («5 океанов», г.Минск, хч), глюкоза, перекись водорода Н2О2 («5 океанов», г.Минск, хч), фиколл-верографин («Sigma», Германия, хч), краситель Романовского-Гимзы («МиниМед», г.Брянск), нитросиний тетразолий, уксусная кислота («Лаверна», г. Москва, хч), диметилсульфоксид («НеваРеактив», г. Санкт-Питербург, хч), среда Хенкса с феноловым красноватым. В качестве основного буферного раствора употребляли 10мМ калий-натрий фосфатный буфер, содержащий 140мМ NaCl, 10мМ KCl, 10мМ NaH2PO4, 5мМ глюкозы, рН 7,3.

Конкретно перед тестами готовили нужные смеси Н2О2 в концентрациях: 0,005М; 0,01М; 0,05М. В опытах использовалась суспензии клеток Staphylococcus aureus, за ранее опсонированных компонентами объединенной донорской сыворотки.

2.2 Получение полиморфноядерных гранулоцитов из периферической крови (внутренней средой организма человека и животных)

В опытах была применена тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) 20 здоровых доноров.

Для получения нейтрофилов к цельной венозной крови (внутренней средой организма человека и животных) добавляли равный размер рабочего буфера, а потом наслаивали на градиент фиколл-верографина (с=1,085/1,18 ) в соотношении размеров 2:1, центрифугировали 30 минут при 2000 о/мин, опосля чего же отбирали образовавшийся слой лейкоцитов. К выделенной клеточной суспензии добавляли 10мМ К,Na-фосфатный буфер. Концентрацию лейкоцитов определяли методом подсчета в камере Горяева. количество жизнестойких клеток с внедрением витального красителя.

2.3 минут при 37?С. Клеточки осаждали центрифугированием в течение 20 минут при 2000 о/мин, надосадочную жидкость удаляли. Потом клеточки промывали два раза 10мМ К,Na-фосфатным буфером для удаления перекиси из среды инкубации.

2.4 Определение фагоцитарной активности полиморфноядерных гранулоцитов

Суспензию интактных либо обработанных разными концентрациями Н2О2 нейтрофилов соединяли в равных соотношениях с суспензией за ранее опсонизированной пуловой донорской сывороткой культурой St. aureus и инкубировали при 37?С. Через 30, 60, 90, 120 и 150 минут из обскурантистской смести отбирали аликвоты клеточной суспензии из которых готовили мазки с следующим окрашиванием по способу Романовского-Гимзы. Определение фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа проводили с внедрением обычной методики при условии подсчета не наименее 100 лейкоцитарных клеток.

мембрана нейтрофил образованная водянистой соединительной тканью (Совокупность различных и взаимодействующих тканей образуют органы). Состоит из плазмы и форменных частей: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов»>тканью. Состоит из плазмы и форменных элементов: клеток лейкоцитов и постклеточных структур: эритроцитов и тромбоцитов) окислительный

2.5 исследование активности окислительных ферментов полиморфноядерных гранулоцитов в тесте восстановления нитросинего тетразолия

Для определения активности окислительных ферментов употребляли тест спонтанного и индуцированного восстановления нитросинего тетразолия.

При проведении спонтанного теста инкубированные с разными концентрациями Н2О2 и интактные нейтрофилы вносили в пробирки для микроанализа в объеме 200 мкл, потом добавляли свежеприготовленный раствор НСТ реактива (0,8 %) в таком же объеме и 200 мкл рабочего буфера и инкубировали при температуре + 37?С. Через 30, 60, 90, 120 и 150 минут из обскурантистской смести отбирали аликвоты клеточной суспензии (100 мкл) и вносили в пробирки с 500 мкл ДМСО. Пробы инкубировали при + 37?С в течение 60 минут, потом центрифугировали 15 мин при 2000 о/мин. Результаты оценивались спектрофотометрически при длине волны 640 нм.

При проведении индуцированного теста инкубированные с разными концентрациями Н2О2 и интактные нейтрофилы вносили в пробирки для микроанализа в объеме 200 мкл, потом добавляли свежеприготовленный раствор НСТ реактива (0,8 %) в таком же объеме и 200 мкл дневной культуры St. aureus и инкубировали при температуре + 37?С. Через 30, 60, 90, 120 и 150 минут из обскурантистской смести отбирали аликвоты клеточной суспензии (100 мкл) и вносили в пробирки с 500 мкл ДМСО. Пробы инкубировали при + 37?С в течение 60 минут, потом центрифугировали 15 мин при 2000 о/мин. Результаты оценивались спектрофотометрически при длине волны 640 нм. в объеме 200 мкл.

2.6. Определение активности миелопероксидазы полиморфноядерных гранулоцитов

Для определения активности миелопероксидазы нейтрофилов употребляли тест спонтанного и индуцированного окисления ортофенилендиамина.

При проведении спонтанного теста инкубированные с разными концентрациями Н2О2 и интактные нейтрофилы вносили в пробирки для микроанализа в объеме 200 мкл и 200 мкл рабочего буфера и инкубировали при температуре + 37?С. Через 30, 60, 90, 120 и 150 минут из обскурантистской смести отбирали аликвоты клеточной суспензии (100 мкл) и вносили в пробирки с 500 мкл субстратной консистенции состоящей из ортофенилендиамина (0,04%) и 0,002% перекиси водорода на фосфатно-цитратном буфере, pH=5,0. Через 30 мин реакцию останавливали добавлением 200 мкл 10 % серной кислоты, потом центрифугировали 15 мин при 2000 о/мин. Результаты оценивались спектрофотометрически при длине волны 492 нм.

При проведении индуцированного теста инкубированные с разными концентрациями Н2О2 и интактные нейтрофилы вносили в пробирки для микроанализа в объеме 200 мкл и 200 мкл 200 мкл дневной культуры St. aureus и инкубировали при температуре + 37?С. Через 30, 60, 90, 120 и 150 минут из обскурантистской смести отбирали аликвоты клеточной суспензии (100 мкл) и вносили в пробирки с 500 мкл субстратной консистенции состоящей из ортофенилендиамина (0,04%) и 0,002% перекиси водорода на фосфатно-цитратном буфере, pH=5,0. Через 30 мин реакцию останавливали добавлением 200 мкл 10 % серной кислоты., потом центрифугировали 15 мин при 2000 о/мин. Результаты оценивались спектрофотометрически при длине волны 492 нм.

2.7 Оценка конфигурации динамического состояния мембраны полиморфноядерных гранулоцитов

При проведении индуцированного теста инкубированные с разными концентрациями H2O2 и интактные нейтрофилы вносили в пробирки для микроанализа в объеме 200 мкл и 200 мкл дневной культуры St. aureus и инкубировали при температуре + 37?С. Через 30, 60, 90, 120 минут из обскурантистской смести отбирали аликвоты клеточной суспензии (100 мкл) и помещали в лунки плоскодонного 96-луночного планшета, инкубировали в течение 20 минут при 37 ?С, три раза промывали рабочим буфером. В качестве контроля употребляли пробу с суспензией культуры St. aureus, которую проводили через все стадии анализа. Клеточки фиксировали этанолом, вносили в каждую лунку по 200 мкл красителя Романовского-Гимзы, икубировали при комнатной температуре в течение 20 минут, потом краситель удаляли, а планшет три раза промывали. Для экстракции красителя употребляли 200 мМ уксусную кислоту. Учет реакции проводили спектрофотометрически при длине волны 650 нм.

2.8 Статистическая обработка результатов

Статистическая обработка приобретенных экспериментальных данных проводилась с внедрением пакета программ Statistica 6.0. Оценка достоверности приобретенных результатов, не подчиняющихся закону обычного распределения, проводилась с внедрением анализа ANOVA по Фридману и аспекта Вилкоксона для зависимых групп. Различия считали достоверными при уровне значимости 0,05. Приобретенные данные представлены в виде медианы и 25-75 квартилей.

3. Результаты и обсуждение

3.1 Воздействие окислительных критерий на динамику фагоцитарной реакции нейтрофилов

В опытах были применены полиморфноядерные гранулоциты периферической крови (внутренней средой организма человека и животных) 20 здоровых доноров.

Для оценки динамики конфигурации фагоцитарной активности интактных и за ранее инкубированных с Н2О2 нейтрофилов была применена измененная нами методика постановки реакции фагоцитоза с внедрением культуры St. aureus с поочередным отбором проб через 30, 60, 90, 120 мин с начала инкубации. Результаты использовались для оценки главных многофункциональных характеристик фагоцитарной реакции: фагоцитарного показателя (ФП) и фагоцитарного числа (ФЧ).

Как видно из представленных результатов (набросок 14), в контроле количество клеток, вступающих в фагоцитоз, добивается максимума 78 % (77;80) опосля 90 минут инкубации с следующим плавным понижением этого показателя до 72% (71;77) к 120 мин.

Таковым образом, 90 минут — это время, нужное для многофункциональной активации интактных клеток и перехода их в стадию активного поглощения микробов.

Набросок 14 — Изменение фагоцитарной активности интактных и инкубированных в окислительных критериях нейтрофилов (p<0,05)

У нейтрофилов, за ранее инкубированных с 0,005 и 0,01 М Н2О2, наблюдается сдвиг максимума фагоцитарной активности в сторону уменьшения времени, нужного для клеточной активации до 30 мин и времени инкубации.

Подготовительная инкубация нейтрофилов с 0,05М перекисью водорода (набросок 14) также приводит к повышению их возможности вступать в фагоцитоз, но этот показатель несколько ниже аналогичного параметра нейтрофилов, обработанных 0,005 М и 0,01 М Н2О2 с максимумом на 90-й мин инкубации.

Таковым образом, для Н2О2-обработанных нейтрофилов в целом наблюдается достоверное повышение показателя фагоцитарной активности в среднем на 10-25% от значения контроля и миниатюризируется время, нужное для первичной активации клеток, вступающих в фагоцитоз. Максимум активирующего эффекта наблюдается для клеток, обработанных 0,005 М и 0,01 М Н2О2 . Приобретенные нами данные отлично согласуются с плодами остальных создателей. [42, 43]

Динамика конфигурации поглотительной возможности нейтрофилов опосля действия перекиси водорода также имеет тенденцию к значительному возрастанию. Необходимо подчеркнуть, что изменение данного показателя для контрольной пробы имеет два пика — максимум поглощения на 60 мин инкубации и минимум поглощения на 90 мин, при сохраняющемся среднем значении поглощения на уровне 5 (4,7;5,3) на 30, 120 мин инкубации.

Для нейтрофилов, за ранее инкубированных с 0,005 М Н2О2, наблюдается подобная динамика поглотительной возможности (набросок 15), но значения данного параметра практически на единицу достоверно выше для всех контрольных точек в процессе фагоцитарной реакции (p<0,05).

Нейтрофилы, за ранее инкубированные с 0,01 М Н2О2 и 0,05 М Н2О2 также показывают огромную поглотительную способность по сопоставлению с контролем. В этом случае также наблюдается повышение значений поглощения микробов наиболее чем на единицу и также с максимумом на 60 мин инкубации и минимумом на 90 мин.

Набросок 15 — Изменение поглотительной возможности интактных и инкубированных в окислительных критериях нейтрофилов в процессе фагоцитарной реакции (p<0,05)

Приобретенные результаты по изменению поглотительной возможности нейтрофилов отлично согласуются с данными о динамике конфигурации фагоцитарной активности для контрольной и анализируемых популяций клеток.

Достоверность всех приобретенных результатов оценивалась с внедрением анализа ANOVA по Фридмену и аспекта Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А1-6)

Общее повышение количества фагоцитируемых объектов на 20-40% для 0,005 М, 0,01М и 0,05 М Н2О2-обработанных нейтрофилов является результатом активирующего действия подготовительной инкубации клеток с перекисью водорода, которое сохраняется опосля снятия действия. Находящиеся в активированном состоянии клеточки не только лишь резвее и в большем количестве вступают в фагоцитоз, что отражается в увеличении фагоцитарной активности, да и способны за наименьшее время фагоцитировать большее количество объектов, что приводит к повышению значений показателя поглощения. Более действенными активирующими концентрациями являются 0,005 М, 0,01 М и 0,05 М Н2О2.

У грамположительных микробов, к которым относится использованный в опыте St. аureus, в состав клеточных стен входят, не считая мукопептидов, полисахариды, тейхоевые и липотейхоевые кислоты, находящиеся в комплексе с главным компонентом клеточной стены — муреином. К рецепторам, распознающим патоген-ассоциированные паттерны клеточной стены грамположительных микробов, относятся маннозные, скавенджер нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри, TLR — 1, 2, 4, 5, 6, 9, NOD1. Потому что в опытах была применена суспензия St. aureus, опсонизированная объединенной донорской сывороткой, можно утверждать, что в процессы определения, фиксации и поглощения мельчайшего организма были вовлечены и нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри к компонентам системы комплемента и Fc-рецепторы. И анализируя приобретенные данные можно представить, что активирующий эффект деяния перекиси водорода также быть может связан с индукцией активированного конформационного состояния ведущих паттерн-распознающих рецепторов нейтрофилов и конфигурацией динамического состояния внешной мембраны. Через 60 минут развития фагоцитарной реакции ведомую роль в увеличении процента фагоцитирующих клеток начинают играться нервные (относящиеся к пучкам нервов) импульсы По месту расположения и по выполняемым функциям выделяют экстерорецепторы интерорецепторы и пропри к опсонизирующим сывороточным лигандам, эффективность деяния которых у Н2О2-обработаных клеток также выше, чем у интактных. Больший эффект подготовительная тест отражает степень многофункциональной активации нейтрофилов in vivo в отсутствии чужеродных агентов. Поглощаемый нейтрофилами кислород восстанавливается до супероксидного радикала ферментами НАДФ-оксидазной системы, которая локализована на мембранах специфичных гранул нейтрофилов. При контакте нейтрофила с чужеродным объектом и рецепторной активации клеточки происходит слияние мембран специфичных гранул с цитоплазматической мембраной и формируется настоящий НАДФ-оксидазный комплекс. При проведении спонтанного теста в отсутствии чужеродного объекта растворимый нитросиний тетразолий может просачиваться через цитоплазматическую мембрану и окисляться НАДФ-оксидазной системой специфичных гранул до нерастворимого формазана, образующего гранулки в цитоплазме.

Приобретенные экспериментальные данные отражают различную динамику ферментативной активности НАДФ-оксидазного комплекса у интактных и Н2О2-обработаных клеток. Для интактных нейтрофилов типично наличие подъема окислительной активности на 60 мин инкубации (набросок 16).

Иную динамику конфигурации ферментативной активности окислительных ферментов имеют 0,005 М, 0,01 М, 0 05М Н2О2-обработанные нейтрофилы, максимум ферментативной активности наблюдается уже в 1-ые 30 минут инкубации, завышенная активность сохраняется до 90 минутки, при всем этом активность их ферментов в 1,8-2,5 раза достоверно превосходит значения контроля.

Не считая этого необходимо подчеркнуть наличие лишь 1-го максимума ферментативной активности на 60 минутке с следующим плавным понижением этого параметра к 90 минутке инкубации.

Набросок 16 — Изменение активности окислительных ферментов интактных и инкубированных в окислительных критериях нейтрофилов в спонтанном НСТ-тесте (p<0,05)

Достоверность всех приобретенных результатов оценивалась с внедрением анализа ANOVA по Фридмену и аспекта Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А7-9)

При анализе приобретенных данных становится разумеется, что Н2О2-обработанные нейтрофилы, демонстрирующие в спонтанном тесте Надф-оксидазную активность в 1,8-2,5 раза превосходящую активность интактных клеток, находятся в активированном состоянии, которое было индуцировано подготовительной инкубацией с перекисью водорода. Можно представить, что действие перекиси водорода на рецепторный комплекс цитоплазматической мембраны и конкретно на мембрану вызывает образование множественных липидных рафтов и неспецифическую активацию рецепторов, что, в свою очередь, приводит в движение специальные гранулки, в мембранах которых находятся компонентны НАДФ-оксидазного комплекса. Слияние специфичных гранул с цитоплазматической мембраной приводит к образованию настоящей НАДФ-оксидазы, способной производить каталитические реакции окисления НСТ с большенный скоростью.

Для оценки динамики активности НАДФ-оксидазного комплекса интактных и Н2О2-обработанных нейтрофилов в процессе фагоцитарной реакции был поставлен НСТ тест в присутствии опсонизированной компонентами объединенной донорской сыворотки культуры St. aureus, результаты которого представлены на рисунке 17.

Набросок 17 — Изменение активности окислительных ферментов интактных и инкубированных в окислительных критериях нейтрофилов в процессе фагоцитарной реакции (индуцированный НСТ-тест в присутствии культуры St.aureus) (p<0,05)

Разумеется, что индуцированная НАДФ-оксидазная активность интактных нейтрофилов в процессе фагоцитарной реакции имеет динамику, аналогичную динамике ферментативной активности в спонтанном тесте — подъемы активности на 60 минутке инкубации.

Наибольшая активность НАДФ-оксидазы в процессе фагоцитоза у 0,005, 0,01 и 0,05 М Н2О2-обработанных нейтрофилов наблюдается на исходной стадии реакции в течение первых 30 минут с следующим увеличении е к 90 минутке инкубации. Необходимо подчеркнуть, что во всех экспериментальных пробах активность НПДФ-оксидазы в 2-2,5 раза достоверно превосходит активность контрольных проб.

Достоверность всех приобретенных результатов оценивалась с внедрением анализа ANOVA по Фридмену и аспекта Вилкоксона для зависимых групп с уровнем значимости 0,05. (приложение А 10-13)

Сборка НАДФН-оксидазной системы связана с функционированием актинового цитоскелета. При действии белков микробов, поверхностно активных веществ (форболовые эфиры, дигитонин) при индуцированном НСТ-тесте наблюдается резкое повышение интенсивности и скорости мобилизации энергетических и пластических ресурсов клеток, т. е. происходит дыхательный взрыв. Конкретно сиим можно разъяснить повышение ферментативной активности при индуцированном НСТ-тесте.

]]>